非肌型肌球蛋白轻链激酶的结构、功能及其生理与病理学意义

肌球蛋白轻链激酶(myosin light-chain kinase,MYLK)在哺乳动物中由MYLK基因编码,编码的产物主要包括长链非肌型肌球蛋白轻链激酶(non-muscle myosin light-chain kinase,nm MYLK,220 kDa),短链平滑肌型肌球蛋白轻链激酶(smooth muscle myosin light-chain kinase,sm MYLK,130 kDa)及端蛋白(telokin)(17 kDa)。其中nm MYLK的特殊N端结构域赋予其参与更多病理生理学过程的特性,包括炎症、细胞黏附、肿瘤细胞浸润、动脉粥样斑块形成等。本文综述nmMYLK的结构、功能研究进展,梳理nmMYLK与炎症、癌症及其他疾病间的关系。

姜黄素对非酒精性脂肪肝大鼠肠黏膜肌球蛋白轻链激酶的影响

目的探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠黏膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响。方法 35只SD大鼠随机分为3组,正常对照组(NC)10只、高脂饲料喂养组(HF)15只、姜黄素组(Cur)10只,后两组予高脂饲料喂养16周,其中Cur组在高脂饲料喂养8周后,予姜黄素灌胃200 mg/(kg·d),每天1次,共8周。检测大鼠血ALT、AST、LPS、DAO水平及肠黏膜MLCK的表达;观察肝脏病理学及肠黏膜紧密连接。结果与NC组比,HF组大鼠血ALT、AST、LPS及DAO均明显升高(P<0.05);与HF组比,Cur组大鼠血ALT、AST、LPS及DAO均明显下降(P<0.05)。HF组大鼠肝细胞脂肪变性明显,Cur组肝细胞脂肪变减轻。HF组紧密连接间隙较NC组明显增宽(P<0.05),Cur组紧密连接间隙较HF组变窄(P<0.05)。HF组MLCK表达较NC组明显升高,Cur组阳性染色较HF组减弱(P<0.05)。结论姜黄素能够通过下调NAFLD大鼠肠黏膜MLCK的表达,改善肠黏膜紧密连接结构。

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化

发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提示肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化可能是一种新的机制,并与平滑肌张力的维持有关。

肌球蛋白轻链激酶和肌球蛋白轻链9基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究肌球蛋白轻链激酶(MYLK)及肌球蛋白轻链9(MYL9)在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达情况及其与NSCLC临床特征的关系。方法采用荧光定量PCR方法检测60例NSCLC组织、癌旁组织和60例正常肺组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA的表达情况,并分析癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达值与临床分期的相关性。结果 MYLK mRNA、MYL9 mRNA在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织及正常肺组织(P均<0.05),癌旁组织和正常肺组织中MYLK mRNA、MYL9 mRNA表达量无统计学差异(P均>0.05)。在癌症患者中,淋巴结转移组MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量比无淋巴结转移组高(P<0.05)。腺癌组织与鳞癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量无统计学差异(P<0.05)。MYLK mRNA与MYL9 mRNA的表达呈正相关(P<0.001),MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达与肿瘤临床分期呈正相关(P<0.05)。结论 NSCLC组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA表达均明显低于癌旁组织及正常组织,MYLK mRNA及MYL9 mRNA的表达与临床分期呈正相关。

非肌性肌球蛋白重链9、信号转导和转录激活因子4、尿激酶型纤溶酶原激活物单核苷酸多态性与新疆维吾尔族特发性膜性肾病相关性

目的探讨非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)(rs12107)、信号转导和转录激活因子4(STAT4)(rs3024912)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)(rs4065)位点单核苷酸多态性与特发性膜性肾病相关性。方法对2012年12月-2016年12月在新疆维吾尔自治区人民医院肾活检确诊的90例维吾尔族特发性膜性肾病(IMN)患者为病例组,90例维吾尔族健康对照,采用基因测序方法分析rs12107、rs3024912、rs4065位点单核苷酸多态性(SNP),分析其基因型与IMN易感性及IMN肾功能相关性。结果病例组rs12107位点CC基因型、C等位基因频率(46.67%,63.33%)高于对照组(28.89%,48.33%),差异有统计学意义(P=0.013,P=0.004);C等位基因携带者患IMN的风险是T等位基因的2倍(OR=1.85,95%CI=1.21-2.81);rs12107位点CC基因型较non-CC基因型的患者发生肾功能衰竭的风险高(OR=4.38,95%CI=1.80-2.92,P=0.002);病例组rs3024912位点GG基因型、G等位基因频率(50.00%,61.11%)高于对照组(28.89%,45.00%),差异有统计学意义(P=0.013,P=0.002);G等位基因携带者患IMN的风险是T等位基因的2倍(OR=1.92,95%CI=1.26-2.92);rs3024912位点GG基因型的患者是非GG基因型的患者发生肾功能衰竭风险的3倍(OR=3.20,95%CI=1.28-8.01,P=0.012);rs4065位点只有TT一种基因型,未见到TC、CC基因型。结论新疆维吾尔族MYH9基因rs12107位点存在C/T多态性,CC基因型在IMN患者中的频率高于正常对照组,且与IMN肾功能进展相关。STAT4基因rs3024912位点GG基因型既是IMN的功能基因,亦是其易感基因。uPA rs 4065位点未发现T/C多态性。

同型半胱氨酸对内皮细胞肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)运动能力以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响。方法不同浓度的Hcy处理人脐静脉内皮细胞后,MTT法检测Hcy对HUVEC增殖的影响,划痕实验检测Hcy对细胞迁移的影响,免疫组化法及Western blot法检测MLCK表达的变化。结果随着浓度的升高,Hcy对HUVEC的增殖有显著的抑制作用,对HUVEC的迁移有明显的促进作用,免疫组化法及Western blot法结果显示Hcy可以增强MLCK的表达。结论 Hcy对HUVEC的迁移具有促进作用,可能是Hcy通过上调MLCK的表达所致。

肌球蛋白轻链激酶mRNA在非小细胞肺癌患者外周血的表达情况及其临床意义

目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MYLK)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血的表达情况及其与临床特征的关系。方法 48例NSCLC患者(肺癌组)和48例非肿瘤患者(对照组),抽取静脉血后分离出单个核细胞,使用实时荧光定量PCR检测MYLK mRNA的表达情况,并分析其表达量与临床特征的关系。结果肺癌组及对照组患者外周血均有MYLK mRNA表达,肺癌组患者MYLK mRNA表达量为(1.40±0.57),明显低于对照组的(2.03±0.16)(P<0.05);术前组与术后组、鳞癌组与腺癌组、高+中分化组与低分化组、男性组与女性组、吸烟组与不吸烟组的MYLK mRNA相对表达量比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);Ⅲ+Ⅳ期组患者、有淋巴结转移组患者MYLK mRNA相对表达量分别高于Ⅰ+Ⅱ期组、无淋巴结转移组患者(P<0.05)。结论外周血MYLK mRNA的表达水平可能与NSCLC发生发展有关,对判断NSCLC预后有一定价值。

平滑肌细胞迁移的肌球蛋白轻链非磷酸化途径

为了阐明平滑肌细胞迁移存在肌球蛋白轻链非磷酸化调节途径,研究花生四烯酸(arachidonicacid,AA)对肌球蛋白轻链非磷酸化状态下平滑肌细胞迁移的影响及其相关的信号传导途径.经Boyden小室跨膜迁移实验发现,AA对培养的兔血管平滑肌SM3细胞具有明显的诱导迁移作用.然而,当预先用10μmolL肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)特异性抑制剂ML7作用SM3细胞后,发现AA对SM3细胞仍然具有明显的诱导迁移作用,并呈剂量依赖性,这种诱导作用可被细胞外信号调节激酶12(ERK12)的特异性抑制剂PD98059或磷脂酶C(PLC)的特异性抑制剂U73122所拮抗.此外,Ⅱ型肌球蛋白抑制剂blebbistatin(BLB)可部分抑制“非磷酸化”状态下AA的诱导迁移作用.经Western印迹检测显示,10μmolLML7可完全抑制SM3细胞中20kD肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化,并且加入AA后MLC20仍为非磷酸化状态.应用免疫荧光染色法观察肌动蛋白在SM3细胞中分布的变化,发现在AA作用下肌动蛋白呈细胞边缘聚集现象,有伪足形成,细胞形态表现为迁移状态.预先用ML7作用后再加入AA,肌动蛋白的分布与上述结果相同.研究结果初步表明,在平滑肌细胞迁移的作用途径中,在MLC磷酸化调节途径受到抑制时,AA可诱导MLC非磷酸化的平滑肌细胞发生迁移,其分子机理可能与ERK12和PLC信号传导途径有关,非磷酸化的肌球蛋白直接参与了该迁移过程.

肌球蛋白轻链在肺动脉高压内皮祖细胞衰老中的作用机制

目的探讨非肌肉型肌球蛋白调节轻链（nmMLC20）在肺动脉高压内皮祖细胞（EPCs）衰老中的作用及机制.方法建立低氧诱导的肺动脉高压动物模型和体外EPC衰老模型,采用法舒地尔或基因沉默等进行干预.测定大鼠右心室收缩压（RVSP）,右心重构指数,肺血管重构,外周血EPCs衰老率,EPCs中NOX2mRNA和蛋白表达和p-nmMLC20水平等指标.结果肺动脉高压大鼠外周血来源EPCs衰老率明显增加伴随NOX2表达和p-nmMLC20水平升高.上述现象能被法舒地尔逆转;低氧处理后,EPCs衰老率增加伴随NOX2表达和p-nmMLC20水平升高,上述现象可被法舒地尔或MLC20 siRNA逆转.结论肺动脉高压时,nmMLC20以磷酸化形式促进NOX2表达,提高活性氧水平,进而加速了EPCs衰老.

肌球蛋白轻链激酶在非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用

目的 研究肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用,探讨肠黏膜屏障在NASH发病中的作用机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常饮食对照组、单纯性脂肪肝（NAFL）组、NAFL加MLCK特异性抑制剂ML-7组（NAFL＋ ML-7组）,NASH组以及NASH＋ ML-7组,每组为10只小鼠.HE染色法观察各组肝组织病理改变,免疫组化法测定小肠上皮中MLCK的表达,透射电镜观察小肠上皮细胞间紧密连接形态并测量细胞间隙宽度,ELISA法检测门静脉中内毒素脂多糖（LPS）浓度,测定外周血中转氨酶水平,ELISA和实时定量PCR法检测肝脏组织中炎性因子的浓度和mRNA表达.结果 NASH组小肠上皮细胞中MLCK表达量明显高于正常饮食对照组（P＜0.01）.NASH组紧密连接结构紊乱,细胞间隙宽度显著大于正常饮食对照组[（26.60±1.20） nm比（14.90±0.33） nm,P＜0.05],给予MLCK抑制剂ML-7后（NASH＋ML-7组）,紧密连接结构恢复,细胞间隙宽度[（14.90 ±0.67）nm]较NASH组明显减小（P＜0.05）.NASH组小鼠门静脉中LPS浓度显著高于正常饮食对照组[（7.260 ±3.184） U/L比（2.962±0.845）U/L,P＜0.05],NASH＋ ML-7组门静脉中LPS浓度[（3.772±1.033） U/L]显著低于NASH组（P＜0.05）.NASH组外周血ALT及AST水平明显高于正常饮食对照组（P均＜0.05）,肝脏中炎性因子TNFα、IL-6浓度及TNFα、IFM、NF-κB的mRNA水平显著高于正常饮食对照组（P均＜0.05）;给予MLCK抑制剂后（NASH＋ ML-7组）,外周血ALT和AST水平、肝脏中TNFα和IL-6浓度、肝脏中TNFα和NF-κB的mRNA水平均显著低于正常饮食对照组（P均＜0.05）.结论 NASH阶段小鼠肠黏膜通透性增加,MLCK可能在其中具有十分重要的调节作用,抑制MLCK后可以有效降低实验动物肠黏膜通透性,从而防治NASH.

地衣芽孢杆菌制剂对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝脂肪变性及肠黏膜屏障功能的影响

目的通过建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型,探讨地衣芽孢杆菌制剂对大鼠肝组织病理学及肠黏膜屏障功能的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(Control组,n=5)、模型组(Mod组,n=15)、地衣芽孢杆菌低剂量组(BLL组,n=5)和地衣芽孢杆菌高剂量组(BLH组,n=5)。Control组给予普通饲料喂养,Mod组、BLL组、BLH组给予高脂饲料喂养16周,其中BLL组、BLH组在高脂饲料喂养8周后,分别予地衣芽孢杆菌制剂灌胃2.5×10^(7)CFU/kg、5.0×10^(7)CFU/kg,每天1次,持续8周。8周干预结束后,检测大鼠血清ALT、AST、TC、TG、空腹血糖(FPG)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、IL-6、IL-1β和TNF-α水平。HE染色观察肝组织病理学改变并根据NAFLD活动度积分(NAS)评分。透射电镜下观察肠黏膜紧密连接结构。免疫组化染色观察肠黏膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。实时定量PCR检测肠黏膜MLCK的mRNA水平。高通量16S rRNA测序法分析肠道菌群组成。采用单因素方差分析进行多组间比较,多重比较采用Bonferroni法。结果与Mod组相比,BLH组和BLL组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、FPG、IL-1β及TNF-α水平降低,SOD水平升高,肝细胞脂肪变减轻,NAS评分降低,肠黏膜紧密连接结构恢复,MLCK蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。此外,BLH组较Mod组CAT水平升高,MDA及IL-6水平下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与BLL组相比,BLH组大鼠血清MDA、IL-6、TNF-α水平降低,CAT水平升高,肠黏膜MLCK蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。肠道菌群示BLH组和BLL组厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度均较Mod组有所恢复,且BLH组厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度更接近Control组。结论地衣芽孢杆菌制剂可有效减轻NAFLD大鼠的肝脂肪变性,其作用机制可能与下调肠黏膜MLCK蛋白的表达水平、改善肠黏膜紧密连接结构有关。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及肌球蛋白轻链激酶的变化

目的:研究不同阶段非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化。方法:将60只雄性清洁级SD大鼠随机分为两组:正常饮食组(NDG)和高脂饮食组(FDG)。于4周、8周、12周时观察各组大鼠肝脏病理学改变;应用ELISA方法测定各阶段大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)的变化;应用鲎实验测定各阶段大鼠门静脉血中内毒素(ET)水平;应用免疫组化方法检测肠道粘膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白(ZO-1)的表达及分布情况。结果:随着高脂饮食时间增长,高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变性程度逐渐加重;血清ALT、AST、TG、CHOL水平逐渐升高(4周时,P>0.05,8周和12周时P<0.05);大鼠血浆内毒素的水平逐渐上升(0.11±0.01比0.11±0.01,P>0.05;0.36±0.01比0.11±0.01,P<0.05;0.44±0.15比0.18±0.03,P<0.05);高质饮食组较正常饮食组大鼠紧密连接蛋白ZO-1表达逐渐下降(3.6±0.7比3.9±0.32,P>0.05;2.8±0.63比3.8±0.42,P<0.05;1.8±0.79比3.7±0.48,P<0.05),MLCK表达逐渐增多(0.5±0.53比0.3±0.48,P>0.05;1.3±0.48比0.4±0.52,P<0.05;1.9±0.74比0.5±0.53,P<0.05)。结论:肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1及MLCK可通过影响肠粘膜屏障功能,改变肠粘膜的通透性,促进非酒精性脂肪肝病发生发展。

非酒精性脂肪性肝病患者肠黏膜肌球蛋白轻链激酶与紧密连接蛋白Occludin的变化

目的研究在非酒精性肝病(NAFLD)进展过程中小肠黏膜中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白Occludin的表达。方法 90例患者,分为健康对照组、单纯性脂肪肝(NAFL)组、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)组,每组30例患者。分别用胃镜取十二指肠降部、结肠镜取回肠末段小肠黏膜。用免疫组化方法检测MLCK在肠黏膜中的表达。用RT-PCR方法检测Occludin在肠黏膜中的表达。结果随NAFLD进展,MLCK在NASH组表达明显增加且具有统计学意义(P<0.05);Occludin的变化与MLCK相反,随疾病进展,Occludin mRNA在NASH组表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MLCK可通过影响Occludin的表达改变肠黏膜通透性参与NAFLD疾病的进展。

心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

目的探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase,cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。方法纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点。制作野生型cMLCK(WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感染原代心肌细胞,并用随机数法随机分为6组:对照组、AngⅡ组、WT-cMLCK组、WT-cMLCK+AngⅡ组、ΔNT-cMLCK组、ΔNT-cMLCK+AngⅡ组,每组3个样本。RT-PCR检测心衰因子表达;Western blotting检测cMLCK及底物的表达;免疫荧光检测细胞表面积。结果WT-cMLCK在体外体系能对其底物MLC2v进行磷酸化;而ΔNT-cMLCK对MLC2v的磷酸化作用消失;使用AngⅡ处理后,可见细胞面积增大[(1787.0±142.6)μm^(2)vs.(2458.0±211.3)μm^(2),P<0.001],ANP、β-MHC表达上调(均P<0.05);cMLCK及p-MLC2v表达上调(均P<0.05);过表达WT-cMLCK可逆转心肌肥大[(2527.0±116.4)μm^(2)vs.(1775.0±88.5)μm^(2),P<0.001];敲除N端可使cMLCK的保护作用丧失[(1775.0±88.5)μm^(2)vs.(2613.0±118.4)μm^(2),P<0.001]。结论过表达cMLCK可改善AngⅡ诱导的心肌肥大,该作用依赖于其N端。

生血通便颗粒对血虚肠燥型慢传输型便秘大鼠结肠肌电及Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路的影响

目的观察生血通便颗粒对血虚肠燥型慢传输型便秘(STC)大鼠结肠肌电及Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路的影响,探讨其治疗STC的作用机制。方法采用洛哌丁胺灌胃结合尾部放血法建立血虚肠燥型STC大鼠模型。将大鼠分为对照组、模型组、枸橼酸莫沙必利组和生血通便颗粒组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃,连续14 d。观察大鼠治疗前后一般状况,检测大鼠粪便含水量,生物机能实验系统检测结肠肌电慢波频率、振幅及变异系数,测定肠道推进率,HE染色观察结肠组织病理变化,比色法检测结肠平滑肌细胞Ca^(2+)浓度,Western blot检测结肠平滑肌组织缝隙连接蛋白43(Cx43)、钙调蛋白(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链20(p-MLC20)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量、粪便含水量和肠道推进率显著降低(P<0.01),结肠肌电慢波频率减慢、频率变异系数增加(P<0.01),慢波振幅和振幅变异系数增加(P<0.01);结肠黏膜结构受损,可见炎性改变,糜烂明显,结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及Cx43、CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,枸橼酸莫沙必利组和生血通便颗粒组大鼠体质量、粪便含水量和肠道推进率显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠肌电慢波频率加快、频率变异系数减小(P<0.01),慢波振幅和振幅变异系数减小(P<0.05,P<0.01);结肠黏膜结构较完整,糜烂情况改善,结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及Cx43、CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论生血通便颗粒可改善血虚肠燥型STC大鼠症状,恢复结肠动力,其机制可能与调节结肠肌电节律性、激活Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路相关。

非酒精性脂肪性肝病发生和进展的综合影响因素

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种与遗传、环境、代谢应激等相关的慢性疾病,由于当今社会人群中肥胖的患病率迅速上升,NAFLD比酒精性肝病越来越普遍,NAFLD在疾病进展过程中可能发展为肝硬化、肝衰竭,最终发展为复杂的肝细胞癌。因此,在疾病的早期阶段对NAFLD的预防十分重要。在影响非酒精性脂肪性肝发病机制的因素中,"二次打击学说"、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)与非酒精性脂肪性肝病三者之间存在密切联系,应用MLCK抑制剂ML-7对肠道屏障有保护作用,这些因素使MLCK在非酒精性脂肪性肝病发病机制中具有重要作用。

平滑肌收缩的非钙依赖性调节机制

在平滑肌收缩活动中 ,肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)对肌球蛋白轻链 (MLC2 0 )的钙依赖性磷酸化是引起平滑肌收缩的主要原因 ,同时还存在着其它非钙依赖性的调节途径。高浓度的MLCK和Ca2 + independentLC2 0kinase均可引起MLC2 0 的非钙依赖性磷酸化 ;Rho kinase、花生四烯酸及蛋白激酶C等都能抑制肌球蛋白轻链磷酸酶的活性 ,减少MLC2 0 的脱磷酸化 ;调宁蛋白、原肌球蛋白和钙介导蛋白等能通过与肌动蛋白或肌球蛋白的结合来调节肌球蛋白Mg2 + ATP酶活性。这些因素都有助于维持低Ca2 + 时平滑肌的张力。

同型半胱氨酸调控MEK-ERK-MLCK通路影响结肠炎大鼠肠黏膜通透性的实验研究

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是否通过调控MEK-ERK-MLCK通路影响结肠炎大鼠肠黏膜通透性的机制。方法 SD大鼠分为4组,A组为正常对照组(NS皮下注射+NS灌肠),B组为正常对照+Hcy注射组(Hcy皮下注射+NS灌肠),C组为TNBS模型组(NS皮下注射+TNBS灌肠),D组为TNBS模型+Hcy注射组(Hcy皮下注射+TNBS灌肠)。建立高Hcy血症的实验性结肠炎大鼠模型,实验结束时取大鼠结肠组织病理学检查,并进行结肠匀浆检测MPO活性,采用Western blot方法检测大鼠小肠组织中MEK、ERK、p-ERK、MLCK、p-MLCK的蛋白表达水平,采用RT-q PCR方法检测大鼠小肠组织中MLCK mRNA表达。结果与正常对照组及模型对照组相比,TNBS模型+Hcy皮下注射组大鼠DAI及HI评分增高,结肠匀浆MPO活性增高,小肠黏膜组织MEK、ERK、p-ERK、MLCK、p-MLCK蛋白表达水平增加,MLCK mRNA相对表达量增加。结论 Hcy增加实验性结肠炎大鼠肠黏膜通透性,可能与调控MEK-ERKMLCK信号通路有关。

枳术方对慢传输型便秘大鼠结肠5-HTR及下游CaM-MLCK信号通路的影响

目的通过观察枳术方对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织中5-羟色胺4受体(5-HT_(4)R)、钙调蛋白(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响,探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、枳术方组及阳性药(普芦卡必利)组。采用复方地芬诺酯片建立STC模型,枳术方组随后灌胃枳术方,阳性药组灌胃普芦卡必利。检测各组大鼠粪便含水量,肠道炭末推进率,结肠组织中5-HT_(4)R、CaM、MLCK的mRNA及蛋白相对表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠粪便含水量和炭末推进率明显降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织中5-HT_(4)R、CaM、MLCK的mRNA和蛋白相对表达水平也明显降低(P<0.01)。与模型组相比,枳术方组和阳性药组大鼠粪便含水量和炭末推进率明显升高(P<0.05),结肠组织中5-HT_(4)R、CaM、MLCK的mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。枳术方组与阳性药组比较,各项数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论枳术方能改善STC大鼠的便秘症状,可能与上调大鼠结肠组织中5-HT_(4)R表达并激活下游CaM-MLCK信号通路有关。

同型半胱氨酸影响Caco-2细胞通透性的机制研究

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对Caco-2细胞通透性的影响及其机制。方法 Caco-2结肠癌细胞分为空白对照组、Hcy处理组(10、20、50μmol/L)、Hcy+不同抑制剂处理组(ERK抑制剂PD98059、MLCK抑制剂ML-7、P38MAPK抑制剂SB203580、Ca2+/Calmodulin抑制剂KN62、Rho抑制剂Y27632及PKC抑制剂Staurosporine)。通过检测跨上皮电流阻抗(TEER)及异硫氰酸荧光素(FITC)跨膜转运量评估Caco-2细胞模型通透性,Western blot法检测Caco-2细胞中MEK、ERK、MLCK、p-ERK、p-MLCK、ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-2蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,使用50μmol/L Hcy预处理的Caco-2细胞通透性改变速率最快。Claudin-1、Occludin、ZO-1表达降低,MEK、ERK、MLCK、p-ERK、p-MLCK、Claudin-2蛋白表达升高。与Hcy处理组相比,使用ML-7及PD98059处理Caco-2细胞,可减弱Hcy预处理引起的Caco-2细胞通透性增加,降低MEK、ERK、MLCK、p-ERK、p-MLCK、Claudin-2蛋白表达,提高Claudin-1、Occludin及ZO-1蛋白表达。结论 Hcy可能通过MEK-ERK-MLCK细胞信号通路,调控细胞紧密连接(TJ)相关蛋白表达,影响Caco-2细胞通透性。