无CpG基序的短磷酸二酯寡核苷酸作免疫激活剂

以前发现细菌的DNA能作用于免疫效应细胞。据报道，这种免疫调节作用是因为存在有未甲基化的CpG二核苷酸，在二核苷酸的侧面分别毗邻两个5′嘌呤和两个3′嘧啶，合成的8～100个碱基的寡核苷酸至少含有这样一个CpG基序以刺激免疫系统。

非甲基化的CpG寡核苷酸对鼠巨噬细胞Toll样受体9及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的CpG寡核苷酸(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7 Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7,置24孔培养板中,随机将细胞分为四组,分别为CpG-ODN组,Non-CpG-ODN组,CpG-ODN+氯喹组和对照组,分别添加CpG-ODN(0.3μg/ml),Non-CpG-ODN(0.3μg/ml),CpG-ODN+氯喹组(CpG-ODN和氯喹各0.3μg/ml),培养基。逆转录聚合酶链反应及Western blot检测24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及IL-12的表达水平。结果刺激24h后,巨噬细胞TLR-9mRNA的表达,CpG-ODN组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为7.12,P<0.01);CpG-ODN组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为8.04,P<0.01);CpG+氯喹组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为4.25,P<0.05);CpG+氯喹组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为5.58,P<0.01)。TLR-9蛋白,CpG-ODN组为1.35±0.18,高于Non-CpG(1.01±0.04)及对照组(0.91±0.10),差异有统计学意义(t值分别为3.21、3.67,P值均<0.05)。CpG-ODN+氯喹组为1.34±0.15,高于Non-CpG及对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.71、4.10,P值均<0.05),而CpG-ODN组及CpG-ODN+氯喹组比较,差异无统计学意义(t值为0.10,P>0.05)。细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组[(0.48±0.12)ng/ml]高于Non-CpG-ODN组[(0.29±0.23)ng/ml]、CpG-ODN+氯喹组[(0.32±0.24)ng/ml]和对照组[(0.29±0.19)ng/ml],差异有统计学意义(t值分别为2.84、2.38、3.25,P值均<0.05);IL-6,IL-12水平:CpG-ODN组分别为[(27.69±15.61)pg/ml和(48.59±25.17)pg/ml]与Non-CpG-ODN组分别为[(17.02±10.66)pg/ml和(59.58±32.89)pg/ml]、CpG-ODN+氯喹组分别为[(28.58±24.08)pg/ml和(41.30±13.17)pg/ml]和对照组分别为[(16.12±17.70)pg/ml和(61.54±39.69)pg/ml],差异无统计学意义(t值分别为1.94、0.75,P值均>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TLR-9表达增高,Th1类细胞因子分泌增加。

CpG-ODN联合HBsAg体外对慢性乙肝患者外周血树突状细胞STAT、SOCS通路的影响

目的研究含非甲基化CpG基序的免疫刺激寡核苷酸(CpG-ODN)联合重组HBsAg对慢性乙肝(CHB)患者外周血树突状细胞(dendriticcell,DC)表面标志、功能及胞浆信号传导与转录激活因子(STAT)、细胞信号转导抑制因子(SOCS)表达的影响。方法由CHB患者和健康者外周血单核细胞诱导扩增DC,以CpG2ODN或联合HBsAg刺激DC,并与TNF2α比较,评价其对DC表面标志、分泌IL212p70及刺激同种T细胞增殖能力的影响;应用Westernblot法检测DC胞浆STAT1、3、4、5、6以及SOCS1、3蛋白的表达。结果与PBS组比,TNF2α、CpG-ODN或联合HBsAg能明显提高CHB患者DC表面分子HLA-DR表达,IL-12p70分泌增加,刺激同种T细胞增殖能力增强,CpG-ODN联合HBsAg还能明显提高CD1a的表达;CpG-ODN或联合HBsAg、TNF2α对DC胞浆STAT1、4、6和SOCS1、3的表达呈不同程度增强作用,对STAT3、5的表达无明显影响。结论CpG-ODN与TNF-α一样能促进CHB外周血DC分化、成熟;CpG2ODN或联合HBsAg能增强DC的特异性抗原提呈作用;其作用机制可能是通过调节DC细胞内STAT1、4、6以及SOCS1、3等信号蛋白的表达。