直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效

目的观察直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效。方法选取2019年8月—2022年8月贵州水矿控股集团有限公司总医院CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿85例,按照随机数表法分为观察组(42例)和对照组(43例),其中对照组患儿给予利巴韦林治疗,观察组患儿给予直肠滴入中药治疗。对比两组患儿治疗前后口腔疱疹、发热、皮疹等症状的评分,治疗前后患儿炎症因子、免疫指标水平及两组患儿治疗后不良反应发生率。结果治疗前,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分均降低,并且治疗后观察组患儿的以上症状评分低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α均降低,并且治疗后观察组患儿的以上降低幅度大于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,CD8^(+)水平降低,并且治疗后观察组患儿的变化幅度大于对照组(P<0.05);观察组患儿不良反应发生率为4.76%,对照组患儿不良反应发生率为18.60%,观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论给予CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿直肠滴入中药治疗,能减轻患儿临床症状及炎性反应,改善免疫功能,且不良反应少,值得借鉴。

2017-2020年江门地区儿童手足口病流行病学特征及非EV71型非CA16型肠道病毒型别分析

目的:分析广东省江门市2017-2020年手足口病的流行特征,了解非EV71型非CA16型肠道病毒的分子流行病学特征,为本市进一步临床治疗和防控工作提供科学依据。方法:通过全国传染病报告信息管理系统收集2017-2020年本市手足口病患儿资料,收集整理2017-2020年本院信息系统报告的手足口病例及分析其流行特征,采用荧光RT-PCR法对疑似手足口病患者标本同时进行EV通用型、EV71型、CA16型检测,并选取EV71型和CA16阴性而EV通用型阳性的标本进行型别鉴定,设计5’非编码区特异性引物,RT-PCR扩增后进行序列测定,最后对核苷酸的同源性进行比对及确定病毒的型别。结果:2017-2020年江门市共报告HFMD总发病人数为31 709例,其中2017年报告病例数最高。4年内共采集了因怀疑手足口病到本院就诊患儿的2 587例标本,并同时进行EV通用型、EV71型、CA16型检测,总阳性1 263例,总阳性率为48.82%。阳性主要以托幼儿童和男患儿为主。其中EV71核酸阳性173例,占13.70%;CA16核酸阳性282例,占22.33%;其他EV核酸阳性808例,占63.97%。在2017-2020年中确定属于肠道病毒分型共87份,检出的非EV71型非CA16型的肠道病毒有6种型别,分别为CA6、CA10、CA4、CA12、CA5、CA8,其中CA6是占主要的,为70.11%,其次是CA10占13.79%。结论:江门市手足口病的分布呈现出人群差异、季节差异,非EV71型非CA16型的肠道病毒病原谱有六种,病毒型别以CA6为主。应持续进行病原学检测,掌握优势型别,为防控提供依据。

HPLC-UV法检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液相关抗原纯度的方法建立与评价

为建立一种准确可靠的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)方法,检测EV71-CA16二价手足口病(HFMD)灭活疫苗原液中的相关抗原,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的纯度。本文采用Waters体积排阻色谱柱(SEC,UltrahydrogelTM 2507.8×300 mm,6μm),流动相为0.01 mol/L的PBS中再加入0.1 mol/L氯化钠溶液,等度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长280 nm,进样量50μL,柱温21℃,进行EV71与CA16病毒原液的纯度检测,并对该方法的检测限、拖尾因子、专属性、重复性及检测范围进行验证。结果显示,2种抗原的灵敏度溶液的信噪比(S/N)分别为37.053和47.710,均远大于3,各试样的拖尾因子均小于3;CA16原液和EV71原液经HPLC分离纯化后的目标抗原峰馏分经SDS-PAGE和Western-Blot特异性鉴定,结果显示,色谱峰样品组成分别为CA16和EV71的2种病毒衣壳的结构蛋白,表明本检测方法专属性高。不同浓度的EV71与CA16病毒抗原经多次检测后,各浓度条件下的峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,重复性良好。不同抗原浓度批样品检测结果显示,CA16原液抗原浓度在89 U/mL~26398 U/mL之间,EV71原液抗原浓度在170 U/mL~9074 U/mL之间时,2种抗原溶液经多次检测统计显示峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,本方法在该抗原浓度范围内准确可靠,适用于EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液中病毒抗原纯度的检测。

手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型分析

目的探究2018—2020年平顶山市新华区手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型状况。方法选择平顶山市新华区疾病预防控制中心2018年7月至2020年12月收治的104例手足口病患儿作为研究对象,通过患儿粪便及肛拭子标本对患儿病毒核酸进行检测,观察患儿肠道病毒病原学构成情况及分析患儿EV71病毒及CoxA16病毒VP1基因中各基因型同源性,并记录手足口病患儿临床症状表现及外周血白细胞水平。结果104例手足口病阳性样本中,EV71病毒感染54例(51.92%),CoxA16病毒感染7例(6.73%),其他肠道病毒感染43例(41.35%),EV71病毒感染比例高于CoxA16病毒感染比例,差异有统计学意义(P<0.05);CoxA16 VP1基因序列与A、B、C基因型代表株核苷酸同源性为82.6%~82.9%,与D基因型代表株核苷酸同源性为92.7%~99.2%;EV71 VP1基因序列与C4基因型代表株核酸同源性为92.4%~96.8%,与C4a基因型代表株核苷酸同源性为94.3%~96.8%,与C4b基因型代表株核苷酸同源性为92.4%~93.7%;EV71病毒、CoxA16病毒及其他肠道病毒感染组之间发热、皮疹等临床症状所占比例及外周血白细胞水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论手足口病患儿中EV71病毒感染比例相比于CoxA16病毒感染比例更高;且CoxA16及EV71 VP1基因序列均存在高同源性的病毒株;但各病毒株感染后临床症状表现几乎一致。

手足口病患儿EV71、CoxA16及EBV和CMV的检测与临床意义

手足口病（handfootandmouthdisease，HFMD）是一种全球性的急性传染病，病原体以肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus，CoxA16）为主。轻者预后良好，重症多合并神经系统疾病。

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16鼠源性广谱中和活性单克隆抗体的制备

目的制备可以同时阻断肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)感染的中和活性单克隆抗体(mAb)。方法采用EV71病毒体蛋白1(VP1)羧基端的163~177位氨基酸(SP55)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备mAb,用EV71中和抗原表位SP55以及高度同源的CV-A16 VP1羧基端的第163~177位氨基酸(PEP55)同时进行检测,筛选同时与EV71和CV-A16发生交叉反应的mAb,并进行体外中和试验检测对EV71和CV-A16的中和作用,并分析mAb的生物学特性。结果筛选获得1株可以同时中和EV71及CV-A16的mAb 6E5,其重链为IgG1亚类,轻链为Kappa链;细胞微量中和实验表明其抗EV71感染的中和效价为1∶128,抗CV-A16感染的中和效价为1∶32。结论成功获得1株能同时中和EV71及CV-A16的广谱中和活性mAb。

EV71型病毒疫苗接种后住院患儿手足口病流行病学特征及病原学变化

目的了解EV71型病毒疫苗接种对手足口病流行病学及病原学的影响,为手足口病的防治工作提供科学依据。方法收集2014—2018年某院手足口病住院患儿病例资料,应用SPSS 18.0软件对数据进行统计,比较EV71型病毒疫苗接种前后(2014年—2016年10月VS 2016年11月—2018年)住院患儿手足口病的流行病学特征及病原学变化。结果共收治手足口病住院患儿7099例,其中普通型6339例,重症1570例。与EV71型病毒疫苗接种前比较,接种后手足口病住院患儿数减少,重症病例所占比率下降,差异有统计学意义(χ2=56.27,P<0.001)。男童患病率高于女童,发病年龄仍然以5岁以下婴幼儿为主,但每个年龄段重症病例均有下降;全年发病呈现两个高峰,分别在5—7月、9—11月;普通型病例以非EV71/CoxA16肠道病毒感染为主,重症病例仍以EV71型病毒感染为主。结论EV71型病毒疫苗接种后手足口病优势病原体较前发生了明显变化,且重症病例所占比率明显下降,EV71型病毒疫苗值得推广应用。需进一步开展非EV71/CoxA16肠道病毒的分型检测,为手足口病的防治提供更加有力的依据。

荧光PCR法在手足口病肠道病毒EV71型临床诊断中的意义

目的利用实时荧光PCR检测EV71型肠道病毒,了解焦作地区手足口病流行趋势,并提供防治依据。方法采集2014年4月9日至12月16日焦作地区手足口病患儿肛门拭子407例标本,用实时荧光PCR方法对肠道病毒进行核酸检测。结果检出肠道病毒EV71型341例,Co XA16型26例型,肠道病毒通用型40例。结论 2014年4月至12月焦作地区手足口病以肠道病毒EV71型为主。实时荧光PCR技术可以对手足口病的治疗及疫情的有效控制提供有力的病原学支持。

2009年西安地区手足口病病原血清型分析及肠道病毒71型基因特征

目的了解西安地区2009年手足口病的肠道病毒血清型;评价IgM抗体检测在肠道病毒71(EV71)感染早期诊断中的意义;分析西安地区EV71 VP1基因特征。方法分别在西安市城区医院和郊县医院采集的标本共185份,RT-PCR法检测标本中的病毒核酸;采集EV71核酸阳性的急性期病例血液标本,ELISA法检测血清中IgM抗体;细胞培养分离EV71,扩增其VP1区,测序并与EV71各血清型代表株序列比对,进行进化分析。结果在185份标本中,156份检出肠道病毒核酸(84.32%),其中72.4%为EV71,17.3%为柯萨奇A16(CA16);63份EV71核酸阳性的急性期病例血清标本中,45份EV71 IgM抗体阳性(71.43%);分离到的12株EV71均为C4亚型。结论 2009年西安地区手足口病病原以EV71为主,且主要是C4亚型;ELISA方法可用于EV71感染的早期诊断。

EV71与CA16双价灭活疫苗诱导小鼠免疫原性研究

目的评价EV71和CA16双价灭活疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答。方法分别应用EV71和CA16双价疫苗、EV71和CA16单价疫苗按单针、两针(0,14 d)的程序免疫小鼠,采用细胞病变法检测血清第1针免疫后21 d时中和抗体效价,应用LUMINEX液相芯片技术检测小鼠脾单个核细胞体外经抗原刺激分泌细胞因子的水平。结果双价疫苗与EV71单价疫苗单针、两针免疫相比,EV71中和抗体几何平均值相近(118.8∶84.0;159.5∶156.8,P>0.05)。双价疫苗与CA16单价疫苗单针免疫诱导的CA16中和抗体均为阴性;两针免疫CA16中和抗体几何平均值一致(30.0∶26.9,P>0.05)。加强免疫7 d后,小鼠脾MNC经EV71抗原刺激,双价疫苗较EV71单价疫苗诱导Th2类细胞因子IL-4、5、6、10和炎症因子TNF-α的分泌水平显著增高(P=0.020,P=0.027,P=0.038,P=0.019,P=0.026);MNC经CA16抗原刺激,双价疫苗与CA16单价疫苗相比诱导细胞因子水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论双价疫苗可诱导与单价疫苗相似的中和抗体应答水平,并可提高Th2类细胞因子应答,研究为EV71和CA16双价灭活疫苗的研发提供了实验依据。

肠道病毒71型感染所致手足口病的研究进展

手足口病是由肠道病毒感染引起的以手足掌、臀部、口腔等部位出现暗红色皮疹或疱疹为临床特征的一种急性传染病，多发于5岁以下儿童，以1-3岁的婴幼儿多见。尽管有20多种肠道病毒可以引起手口足病，但以肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型最为多见［1］。虽然柯萨奇病毒A16型与肠道病毒71型，有着类似的基因结构［2］，但两者引起手足口病的严重程度却截然不同。通常情况下，EV71感染者更多发展为重症和危重症［3］。近5年来EV71已成为引起手足口病的主要病原体［4］，故日益受到重视。本文就肠道病毒71型所致手足口病的临床研究现状综述如下。

肠道病毒71型疫苗研究的新进展

手足口病是以发热和手、足、口腔等部位的皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病,绝大部分患者病情较轻,少数可发生严重的神经系统并发症甚至死亡。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒,包括埃可病毒、柯萨奇病毒和肠道病毒71型（EV71）等,以EV71、CoxA16最常见。研究表明EV71主要与重症型手足口病相关,EV71引起的神经系统并发症以及全身性并发症是手足口病的主要致死原因。近几十年在亚太地区的马来西亚、中国台湾、越南、中国大陆等地频繁暴发高死亡率的EV71感染,严重威胁了公共健康安全。然而目前临床上尚缺乏治疗EV71感染的良好药物,开发EV71疫苗成为控制EV71疫情的最佳策略。近几年,EV71疫苗的发展迅速,

肠道病毒、EV71及CoxA16多重PCR检测方法的研究

目的建立多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction)方法,检测手足口病患者粪便、咽拭子标本中的肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Enterovirs71EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16)。方法设计3对寡核苷酸引物,分别在同一体系中扩增PE、EV71及CoxA16特异性基因片段,优化反应体系,测定该方法的灵敏性,并用乙型脑炎病毒、轮状病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型检测其特异性。结果对临床标本作多重PCR检测,EV71(+)标本可见264bp和440bp两条特异性条带,CoxA16(+)标本可见440p、550bp两条特异性条带,PE(+)EV71(-)CoxA16(-)标本可见440bp1条特异性条带。病毒cDNA最低检出浓度分别为4.78、2.36和43.27μg/ml。提取乙型脑炎病毒、轮状病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型核酸,进行同体系、同条件多重PCR扩增,均为阴性。结论多重PCR方法能在一个反应体系和反应条件下同时检测PE、EV71、CoxA16,且特异性强,灵敏度高,可用于手足口病的临床诊断和流行病学调查。

内江地区手足口病肠道病毒核酸检测及流行特征分析

目的分析内江地区2014年1月至2015年12月手足口病的病原学特征,为手足口病的预防控制提供病原学依据。方法选取2014年1月至2015年12月临床疑似手足口病685例作为研究对象。采集疑似手足口病患儿发病1周内的疱疹液、咽拭子或肛拭子标本,用实时荧光RT-PCR进行肠道病毒通用型(EV)、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)和肠道病毒71型(EV71)核酸扩增,并分析患儿性别、年龄以及近2年流行时间的分布。结果 685例疑似手足口病中,肠道病毒阳性599例,检出率87.45%(599/685),其中EV71型、CoxA16型、肠道病毒其他型分别占肠道病毒感染阳性的16.53%(99/599)、12.35%(74/599)和71.12%(426/599)。EV71与CoxA16型手足口病的患儿以0~<4岁儿童为主,性别差异无统计学意义(P>0.05);4-7月与10-11月为该地2个发病高峰。结论对内江地区类似手足口病症状的儿童进行病原学检测,及早发现并治疗,有利于疫情控制及应对突发事件,是降低手足口病死亡率的关键。

2010年盐城地区手足口病例肠道病毒型别调查

目的对盐城地区2010年手足口病患儿及其临床重症病例进行病原学调查。方法采集手足口病患儿咽拭子和肛拭子,对其病毒核酸进行肠道病毒检测定型。结果 481例(含重症52例)患儿采集的咽拭、肛拭标本中,共检测出病毒核酸阳性326例,阳性率为67.78%,其中CA16型44例(13.50%)、EV71型179例(54.91%)、未定型103例(31.59%)。52例重症病例中共检测出病毒核酸阳性45例,阳性率为86.54%,其中EV71型32例(71.11%)、未定型13例(28.89%)、CA16型0例。326例病毒核酸阳性患儿中男214例,女112例;45例病毒核酸阳性重症患儿中男33例,女12例。结论盐城地区手足口病患儿检测到的主要病原体是CA16和EV71等,EV71感染率高于CA16感染率,肠道病毒EV71是引起重症病例的主要病原体。

非EV-71和非CV-A16肠道病毒的流行病学现状分析

肠道病毒(EV)是人类最常见的病原体,常引发大规模的疾病,如:手足口病、疱疹性咽峡炎、心肌炎、脑炎、无菌性脑膜炎、急性弛缓性麻痹及急性弛缓性脊髓炎等神经系统和心肺疾病,且多感染5岁以下儿童,严重时可引起致命的并发症。近年来,非肠道病毒71型(EV71)和非柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)肠道病毒流行强度逐渐增强,EV优势流行株逐渐发生了变化,及时掌握EV的病原学、流行病学、分子进化特征,对于EV的防控具有重要的意义。因此,本文对非EV71和非CV-A16肠道病毒所致疾病现状及分子流行病学进行阐述,以期对EV的防控产生一定的提示作用。

2010年合肥儿童手足口病病例肠道病毒血清基因型分析

目的：对合肥地区2010年5～7月儿童手足口病流行期间的手足口病患儿进行病原学调查.方法：采集手足口病患儿的疱疹液、粪便、咽拭子进行病毒分离;分离的病毒接种非洲绿猴肾细胞（Vero）后待细胞病变（CPE）达到＋＋＋＋以上后提取RNA.分别用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定,并根据血清型不同比较其临床特征.结果：77例患儿采集的标本中65例分离到病毒；经RT-PCR检测发现其中47例CA16阳性,18例为EV71,比例为2.6∶1.CA16感染和EV71感染在患者的年龄大小、症状轻重等方面无显著统计学差异.结论：手足口病患儿检测到的主要病原是CA16和EV71,两者感染对临床的影响无显著差异.

小儿手足口病中EV71与CoxA16两种肠道病毒同血清检验指标的相关性检测分析

手足口病由肠道病毒感染引起,夏秋季为高发期,是丙类传染病,患者与病毒携带者多为传染源,病毒主要通过消化道及呼吸道传播,具有危害大、流行性广、途径多、易传染等特点,近年来发病率不断攀升。为探究小儿手足口病中EV71与CoxA16两种肠道病毒同血清检验指标检测的相关性,现进行如下报道。

2008年湖州市肠道病毒71型和COXA16型的监测分析

目的:了解湖州市肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染提供依据。方法:采用荧光定量RT-PCR和RT-PCR方法,对湖州市101例疑似肠道病毒感染者的疱疹液、咽拭子及粪便标本进行肠道病毒通用核酸、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16的核酸检测。结果:肠道病毒通用核酸阳性87例,阳性率为86.14%(87/101)。其中EV71阳性20例,阳性率为19.80%(20/101);Cox A16阳性1例,阳性率为0.99%(1/101),二者均阴性14例。男女发病率分别为18.46%(12/65)和25.0%(9/36)。疱疹液中EV71检出率24.32%(9/37),Cox A l6检出率2.70%(1/37);咽拭子中EV71检出率18.96%(11/58),Cox A l6未检出;粪便标本中EV71和Cox A l6均未检出。结论:EV71是引起湖州市儿童手足口病的主要病原体,Ev71和Cox A16的发病率无性别差异,疱疹液、咽拭子标本中EV71及Cox A16的检出率明显高于粪便标本,要加强对Ev71和Cox A16的鉴别诊断,有利于提出更好的预防和控制措施。