基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究

试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。

乙型肝炎病毒HBsAg重组疫苗与表面抗原DNA疫苗诱导H-2~b小鼠免疫应答的实验研究

目的:观察重组乙肝疫苗及乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原DNA疫苗接种后,C57BL/6(H-2b)小鼠的免疫应答.方法:构建质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S.转染COS7细胞系进行表达.将C57BL/6小鼠分为5组,分别接种质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S,pVR1012100μg及重组乙肝疫苗1μg.ELISA法检测小鼠血清抗-HBs.结果:DNA疫苗在转染细胞中可表达HBsAg.血清抗-HBs在第一次接种重组乙肝疫苗后即可检出,而在DNA疫苗组则未检出.此后重组疫苗组诱导的抗-HBs的滴度与DNA疫苗组相似.结论:HBV表面抗原DNA疫苗在H-2b小鼠试验中有体液免疫原性.

胶体金法快速检测乙肝表面抗原(HBsAg)

在中国乙肝表面抗原(HBsAg)阳性者占总人口10%以上,因此HBsAg的检测十分重要.而此项目的检测方法有很多种.现在的检测方法不仅需要灵敏度高、特异性强、准确度高,而且需要检测迅速.根据本实验室的多次运用,认为胶体金标法(金标法)较为适合卫生检测.现将结果报告如下.

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因重组杆状病毒的构建及鉴定

目的 利用Bac -to-Bac杆状病毒表达系统 ,构建乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因的重组杆状病毒。方法 构建含有HBVS基因的表达截体pFBDHTa -S ,转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统 ,将该基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmid中 ,转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBVS基因的重组杆状病毒。结果 构建了的含HBVS基因的重组杆状病毒 ,感染昆虫细胞后 ,PCR检测可以扩增出相应大小的片段。结论 利用杆状病毒表达系统 ,成功地构建了含HBVS基因的重组杆状病毒 。

乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因工程疫苗的研究进展

在乙肝病毒 (HBV)的结构蛋白中 ,与疫苗有关的主要是HBsAg。HBsAg基因已在不同的生物体系中获得成功的表达 ,其基因工程疫苗的研究也取得了长足的进展 。

肝康健2号对部分应答慢性乙型肝炎患者HBsAg及调节性T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨肝康健2号对经恩替卡韦治疗后获得部分应答的慢性乙型肝炎患者HBsAg及调节性T淋巴细胞亚群的影响。方法将2020年5月—2022年10月在广州中医药大学顺德医院就诊的60例经恩替卡韦治疗获得部分应答的慢性乙型肝炎患者随机分为观察组和对照组各30例,对照组继续予以恩替卡韦治疗,观察组予以恩替卡韦联合肝康健2号治疗,2组疗程均为48周。观察2组患者治疗前后HBsAg定量、T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)及CD4^(+)/CD8^(+))、乙肝病毒载量、中医证候积分的变化及治疗安全性。结果治疗后,观察组HBsAg定量明显低于治疗前及对照组(P均<0.05),CD4^(+)明显高于治疗前及对照组(P均<0.05),对照组治疗后HBsAg定量及CD4^(+)与治疗前比较差异均无统计学意义(P均>0.05);治疗后2组CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)与治疗前比较变化均不明显,差异均无统计学意义(P均>0.05);2组的乙肝病毒载量、肝功能治疗前后均正常。结论肝康健2号联合恩替卡韦治疗部分应答的慢性乙型肝炎患者,能够有效降低HBsAg,上调CD4^(+),有望通过调节免疫平衡来获得临床治愈。

HBV C基因型有关的HBsAg阴性HBV DNA阳性患者S区突变对HBsAg的影响

目的通过构建HBV C基因型突变质粒研究HBsAg阴性HBV DNA阳性患者HBV S区突变对HBsAg水平的影响。方法收集2022年8月至2023年4月首都医科大学附属北京佑安医院107例HBsAg-/HBV DNA+患者血液样本,对成功提取扩增的HBV DNA S区进行测序,通过构建HBV C基因型突变质粒对HBV S区突变位点进行细胞功能验证,探讨OBI可能发生的分子机制。结果对成功提取扩增的68例患者进行测序,发现HBV S区存在大量突变,包括免疫逃逸突变(如sG145R、sK122R、sS114T、sT131P等)和跨膜结构域(transmembrane domain,TMD)突变(如sT5A、sG10D、sF20S等)。通过构建HBV C基因型突变质粒,进行细胞转染和细胞免疫荧光实验发现sG145R突变会明显降低HBsAg的表达,但是sK122R、sI26N、sQ29N、sR169H、sS114T、sT131P这6个突变位点并未影响细胞内外HBsAg的表达。结论通过测序发现HBsAg-/HBV DNA+患者HBV S区存在大量突变位点,通过构建sG145R、sK122R、sI26N、sQ29N、sS114T和ST131P等突变质粒发现sG145R突变会明显降低细胞内外HBsAg的表达,但是sK122R、sI26N、sQ29N、sR169H、sS114T、sT131P并未明显降低细胞内外HBsAg的表达。

量子点与抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体的偶联研究

表面带羧基的量子点(QD)在活化剂作用下与羊抗HBsAg共价偶联。本研究考察了4种不同封闭剂[乙醇胺(EA)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、氨基聚乙二醇单甲醚(PEG2000-NH2)和牛血清蛋白(BSA)]对制备得到的量子点-抗体复合物(QD-Ab)的影响。使用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析复合物的电泳和粒径特征,斑点免疫杂交反应比较不同封闭剂制备的复合物的免疫特性。结果表明:量子点可以与HBsAg抗体共价偶联形成QD-Ab复合物,斑点免疫反应表明其中PEG2000-NH2封闭的复合物免疫特性较优,可以检测到1.57 ng的HBsAg斑点。

识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体NK92MI细胞的制备

目的构建识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)慢病毒表达载体,并使其在NK92MI细胞表达,制备识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。方法根据单链抗体(scFv)的序列,设计并合成CAR,构建慢病毒表达载体,将其包装、浓缩、测定滴度。然后用浓缩的慢病毒感染HEK293T细胞、Western blot法验证CD3ζ链的表达及在NK92MI细胞中的感染效率。结果成功构建识别HBsAg的CAR慢病毒表达载体,测得滴度≥10^(7)转导单位(TU)/mL。感染NK92MI细胞后,可表达CD3ζ蛋白。结论成功制备了识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。

内窥镜检查前乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测的意义

目的：探讨内窥镜受检者血液乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测在医院感染中的临床意义，为防止医源性感染提供参考依据。方法：采用肢体金免疫层析法，对2002年2月—2003年1月在我院内科门诊做胃镜检查的1141名患者，于检查前作末梢血HBsAg检测。结果：共检出HBsAg阳性129例，总阳性率为11．3％，与我国整体人群水平相近(u=0．5，P>0．05)，男女性阳性率分别为14．74％和7．16％，男性高于女性，有显著性意义(x^2=15．48，P<0．01)。结论：患者内窥镜检查前的血液HBsAg检洲，对于保护医护人员和患者的自身利益，防止医源性感染，减少医疗纠纷有着十分重要的意义。

1998～2007年新建县应征入伍青年乙肝表面抗原(HBsAg)检测情况分析

HBsAg阳性是HBV感染的一个重要指标辫，为了解应征入伍青年乙肝表面抗原阳性率情况，更好地制定新建县乙肝计划免疫规划工作，1998-2007年对新建县应征入伍青年乙肝表面抗原进行了检测，现将结果报告如下。

乙肝表面抗原-HBsAg快速检测试纸条的应用

测定血清中乙肝表面抗原-HBsAg国内有很多种方法.目前最常用的是:ELISA法.此法操作时间较长,不适合于大批查体筛选,HBsAg快速检测试纸条克服了这一缺点.本人对ELISA法和快速检测试纸条法,测定血清中HBsAg阳性、阴性、结果做初步评价.

乙肝病毒表面抗原阳性者的体征及预防治疗方法研究

本文分析乙型病毒肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者体征特点,并分析防治乙肝手段。方法 研究对象,82例,我院就诊,HBsAg检测者,时间选取2019.12.10/2022.11.30(开始/结束),研究对象夫妻其中一方为HBsAg阳性者,对其开展防治干预,干预时间6个月,观察HBsAg阳性者体征、治疗效果及HBsAg阴性者乙肝感染率。结果 (1)HBsAg阳性者体征:HBsAg阳性者/HBsAg阴性者,年龄、性别占比情况对比,差异不显(P>0.05)。HBsAg阳性者单项HBsAg占比高(39.02%),其次合并抗—HBc占比较高(21.95%)。(2)治疗效果:经过综合治疗后,HBsAg阳性者乙肝病毒的脱氧核糖核酸(乙肝病毒基因,HBV—DNA)转阴率较之治疗前更高(值=64.174),差异显著(P<0.05)。(3)HBsAg阴性者乙肝感染率:经过综合干预后,HBsAg阴性者乙肝感染率较之干预前无差异(值=1.012,P>0.05)。结论 HBsAg阳性者同HBsAg阴性者在年龄、性别等方面无明显差异,HBsAg阳性者以单一HBsAg(+)为主,采取综合防治手段,可以有效提高阳性者HBV—DNA转阴率,预防阴性者出现乙肝病毒感染,可推广。

新表面抗原定量检测 实现慢性乙肝个体化治疗管理——罗氏诊断乙肝HBsAg定量检测正式在国内上市

2011年12月16日，全球体外诊断的领导者罗氏诊断在上海宣布，用于预测患者对乙肝治疗应答的新型HBsAg定量检测试剂正式在中国上市。HBsAg定量检测用于检测慢性乙肝患者体内的乙肝表面抗原的浓度（HBsAg），有助于优化慢性乙肝的治疗管理。

乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg阳性情况分析

通过对乙肝表面抗原 (HBs Ag)阳性情况的分析 ,分辨出哪些是病毒感染造成的真阳性 ,哪些是其他原因造成的假阳性 ,从而采取不同的对策 ,既让患者得到治疗 ,又让无辜者可以解脱。

四省观察点人群中血清乙型肝炎病毒表面抗原消长趋势调查

本文以前瞻性血清流行病学方法调查了人群中血清HBsAg消长趋势。观察了3 096名HBV易感者,其人年总感染率为7.0％;HBsAg人年阳转率为0.68％,两者之比为10.3:1.0。HBsAg阳转者中51.2％发生在0～3岁时期。调查了772例HBsAg携带者,其人年标化阴转率为2.01％,阴转者主要发生在10～29岁和50岁以上年龄组,占总阴转数的66.7％。以人群HBsAg阴转率加上因自然死亡而损失的HBsAg携带率和人群中HBsAg年增长率进行分析计算,得出HBsAg在观察点人群中的消长状况是呈上升趋势,即年增加率为0.370％,年减少率为0.264％。

热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原的新方法

以Ｎ－异丙基丙烯酰胺为单体，将水溶性热敏高分子聚异丙基丙烯酰胺（ＰＮＩＰ）和抗体偶联，用异硫氰酸荧光素标记羊抗人乙肝表面抗原抗体，建立了夹心型热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的新方法．评价了抗体在ＰＮＩＰ上的固定效率和非特异性吸附情况．ＨＢｓＡｇ在０．５～１００μｇ／ｍＬ范围内与体系荧光强度呈良好的线性关系，检出限为１０ｎｇ／ｍＬＨＢｓＡｇ．该方法既具有均相免疫分析的快速性，又有固相免疫分析的高灵敏度．用于乙肝病人血清中ＨＢｓＡｇ水平的测定。

重组HBcAg与HBsAg混合抗原的免疫效果

目的观察重组HBcAg与HBsAg混合抗原免疫BALB/c小鼠后体液免疫与细胞免疫的效果。方法配制含Al(OH)3佐剂与不含佐剂的混合抗原,分别免疫BALB/c小鼠,采用ELISA法测定抗体滴度和细胞因子水平;采用流式细胞仪分析T细胞亚群。结果HBcAg与HBsAg混合抗原免疫小鼠产生的IFN-γ量明显高于二者单独免疫,CD3+和CD4+水平显著增高;含Al(OH)3佐剂的混合抗原CD8+水平明显高于阴性对照组;混合抗原免疫小鼠血清产生的抗-HBs抗体与2倍剂量的HBsAg单独免疫相比,差异无显著意义。含Al(OH)3佐剂与不含佐剂的疫苗免疫效果差异无显著意义。结论重组HBcAg与HBsAg混合抗原表现出良好的体液免疫与细胞免疫效果,为治疗性乙肝疫苗的开发提供了依据。