革皮氏海参皂苷对小鼠免疫功能的调节作用

从革皮氏海参(Pearsonothuria graeffei,P.graeffei)中提取海参皂苷,并探讨其对正常小鼠和免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。结果表明,对于正常小鼠,革皮氏海参皂苷能显著提高小鼠的细胞免疫和非特异性免疫功能,显著增加小鼠的足跖增厚值(P<0.05),促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力(P<0.05)。对于免疫功能低下小鼠,革皮氏海参皂苷能显著提高小鼠的抗体形成细胞数和小鼠血清溶血素含量(P<0.05,P<0.01),促进小鼠的体液免疫功能;显著促进小鼠的迟发型变态反应,提高小鼠脾淋巴细胞的增殖能力(P<0.01),提高小鼠的细胞免疫功能;显著促进小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(P<0.01),促进小鼠的非特异性免疫功能。提示革皮氏海参皂苷对小鼠具有显著的免疫调节作用。

革皮氏海参皂苷抑制血管新生作用

目的以革皮氏海参中分离得到的三萜皂苷ho-lothurin A1(HA)和24-dehydroechinoside A(DA)为研究对象,比较研究其抗血管新生的作用。方法采用MTT法和AO/EB染色法检测不同剂量HA和DA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响;采用小管形成实验观察HA和DA对HUVEC分化形成小管能力的影响;细胞黏附实验比较研究HA和DA对HUVEC与肝癌细胞HepG2的黏附能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型,观察HA和DA抑制CAM血管新生的情况。结果 HA和DA均具有抑制HUVEC增殖的活性(48 h的IC50值分别为4.80、3.82μmol.L-1),并能促进内皮细胞的凋亡;在体外能抑制内皮细胞小管形成,可抑制HUVEC与HepG2细胞间(P<0.01)的黏附,能使CAM新生血管明显减少,其中DA抑制血管新生活性优于HA。结论海参皂苷HA和DA具有抑制血管新生的作用,其活性与其结构相关。

革皮氏海参总皂苷对小鼠骨髓细胞周期和细胞凋亡的影响

目的研究革皮氏海参总皂苷对环磷酰胺(cyclophos-phamide,Cy)诱导的骨髓抑制模型小鼠骨髓细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法通过腹腔注射Cy建立小鼠骨髓抑制模型,灌胃不同剂量的革皮氏海参总皂苷(10和30 mg(kg·d)-1),1次/d,连续16 d。采用流式细胞术检测革皮氏海参总皂苷对小鼠骨髓细胞周期分布和凋亡的影响,逆转录聚合酶链式反应(reverse ranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测小鼠骨髓细胞cyclinB1、bcl-2和bcl-xl基因mRNA表达水平。结果革皮氏海参总皂苷能明显增加骨髓有核细胞数;促进骨髓细胞周期由S期进入G2/M期,提高G2/M期关键因子cyclinB1 mRNA的表达水平;明显降低细胞凋亡率,提高抑制凋亡基因bcl-2和bcl-xl mRNA表达量。结论革皮氏海参总皂苷明显促进骨髓细胞增殖。其作用机制可能通过促进细胞进入增殖活跃期,抑制细胞凋亡,达到促进小鼠骨髓造血的作用。

革皮氏海参皂苷单体抗血管新生的实验研究

研究革皮氏海参(Pearsonothuria graeffei)皂苷单体化合物echinoside A(EA)和ds-echinoside A(DSEA)对血管新生的抑制作用。采用MTT法和AO/EB荧光染色法研究EA和DSEA对人脐静脉血管内皮细胞Human UmbilicalVein Endothelial Cells(HUVEC)增殖、凋亡的影响;采用小管形成实验观察EA和DSEA对HUVEC分化形成小管能力的影响;细胞间粘附实验比较研究EA和DSEA对HUVEC细胞同肿瘤细胞之间粘附的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型,观察EA和DSEA抑制CAM血管新生的情况。实验结果显示,EA和DSEA能够显著抑制HUVEC细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),并诱导其凋亡;在体外能够显著抑制小管的形成能力,可显著抑制同肿瘤细胞间的粘附作用,在体内能够减少CAM新生血管的分支数目,而且DSEA的活性要强于EA。提示革皮式海参皂苷单体EA和DSEA都能够显著抑制肿瘤血管的新生,其活性与结构相关。

革皮氏海参总皂苷的安全性评价研究

目的对革皮氏海参总皂苷的使用安全性进行评价,阐明其毒性及潜在的危险。方法将健康ICR小鼠随机分为正常组和革皮氏海参总皂苷不同剂量组,每组5只。根据预实验的结果灌胃剂量分别为0.464、1、2.15和4.64 g.kg-1bw,一次性灌胃后连续观察14 d,记录各组的死亡数;另取健康ICR小鼠50只,随机分为正常对照组、阳性对照组和革皮氏海参总皂苷低、中、高剂量组,每组10只,♀♂各半,取股骨骨髓细胞涂片观察骨髓嗜多染红细胞微核率的变化;大鼠30 d喂养实验中,将Wistar大鼠随机分为4组,每组♀♂各10只,给大鼠灌胃不同浓度(分别为20、50和100mg.kg-1)的革皮氏海参总皂苷30 d后,进行体重、外周血象、血糖、血脂、肝脏功能、心肌损伤、肾脏功能等指标检测,取肝、肾、睾丸、卵巢、胃、心、肺进行了组织病理学观察。结果革皮氏海参总皂苷对♂小鼠的LD50为1.08 g.kg-1,♀小鼠LD50为1.10 g.kg-1,属低毒级;骨髓细胞微核实验结果为阴性;30 d喂养实验中,不同剂量组大鼠各项检测指标与正常组相比较差异均无显著性(P>0.05),组织病理观察发现革皮氏海参总皂苷对大鼠睾丸有轻微毒性作用。结论革皮氏海参总皂苷的急性毒性级别为低毒,未发现遗传毒性,存在一定的亚急性毒性。

革皮氏海参皂苷对环磷酰胺所致骨髓损伤模型小鼠造血作用的研究

目的研究革皮氏海参(Pearsonothuria graeffeii)皂苷对环磷酰胺所致骨髓损伤模型小鼠造血的调节作用。方法用不同剂量的革皮氏海参皂苷分别灌胃环磷酰胺所致骨髓损伤模型小鼠,采用实验血液学技术和造血祖细胞体外培养方法,检测小鼠外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)和网织红细胞(RET)数,骨髓有核细胞(BMNC),骨髓造血干细胞,粒单系祖细胞(CFU-GM),红系祖细胞(CFU-E)和巨核系祖细胞(CFU-Meg)数。结果革皮氏海参皂苷能提高小鼠外周血像中WBC、RBC、PLT、Hb和RET的数量,提高骨髓有核细胞数,促进造血干细胞的增殖和分化,增加骨髓中CFU-GM、CFU-E/CFU-E和CFU-Meg的集落生成。结论革皮氏海参皂苷对骨髓损伤模型小鼠有促进造血的作用。其作用途径可能通过调节机体的免疫功能,诱导机体产生多种造血细胞因子,促进造血干细胞的增殖,并诱导向粒单系、红系和巨核系祖细胞分化,恢复小鼠的造血功能。

革皮氏海参总皂苷致畸和致突变作用的研究

目的对革皮氏海参(Pearsonothuria graeffei,P.graeffei)总皂苷的生殖毒性和遗传毒性进行评价。方法采用Ames试验法,分别检测不同浓度海参皂苷对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100和TA102回复突变菌落数的影响;健康性成熟雌、雄大鼠2∶1同笼过夜,将孕鼠随机分为正常组、不同浓度海参皂苷剂量组,剂量组大鼠给予灌胃海参皂苷的剂量分别为17.2、68.8、275mg·(kg·bw)-1,正常组灌胃生理盐水。于妊娠第20d处死孕鼠,记录总胎数、活胎数、死胎数和吸收胎数;称子宫重、胎盘重和胎鼠重;测量胎鼠体长和尾长;检查胎数的外观、内脏和骨骼。结果不同剂量组海参皂苷都没有引起试验菌株回变菌落数的明显增加,结果为阴性;与正常组相比,各剂量组对胚胎形成、生长发育、外观、骨骼及内脏各指标均无显著性差异。结论在该实验剂量与条件下,海参总皂苷无致突变作用,对孕鼠生长和胚胎发育亦无致畸作用。

海参皂苷对小鼠造血调控因子的影响

目的探讨革皮氏海参皂苷(saponin of Pearsonothuria graeffei,PGS)对骨髓抑制模型小鼠造血调控因子的影响。方法雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型对照组和PGS低、高剂量组。剂量组小鼠灌胃不同浓度PGS(10和30 mg/kg),正常和模型对照组灌胃生理盐水,连续16d。除正常对照组外,其余小鼠均于首次PGS后第7d,连续3d腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg),建立骨髓抑制小鼠模型。于末次给药后,分别制备小鼠肺条件培养液(LCM)、脾条件培养液(SCM)和腹腔巨噬细胞条件培养液(PMΦCM),采用MTT法检测其对正常大鼠骨髓细胞增殖的影响;采用单层半固体培养法检测对粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)和巨核系祖细胞(CFU-Meg)集落形成的影响;采用RT-PCR法检测粒/单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素受体(EPOR)和血小板生成素(TPO)mRNA的表达。结果经PGS体内诱导所制备的LCM、SCM、PMΦCM条件培养液能显著促进正常小鼠骨髓细胞增殖,增加CFU-GM、CFU-E和CFU-Meg祖细胞的集落形成,上调骨髓细胞GM-CSF、EPOR和TPO mRNA的表达量。结论 PGS通过诱导造血细胞因子的分泌促进骨髓粒单系、红系与巨核系造血的恢复。[营养学报,2012,34(6):599-604]