靶分子亲和-质谱联用技术应用于中药等复杂体系中活性成分的筛选

如何从中药等复杂体系中快速、高效地筛选出活性成分,是现代药物研究的重要领域之一。基于光学检测或放射性检测的高通量药物筛选模式,在应用于中药等复杂体系时,由于没有成分分离过程,易产生假阳性或假阴性结果;而采用传统的成分分离、结构鉴定、活性测试的筛选模式,则存在工作量大、周期长、活性成分易丢失等缺陷。靶分子亲和-质谱联用技术是利用药物靶点与配体的亲和作用或靶酶的催化作用将活性成分从复杂体系中抽提出来,并用质谱对其进行检测及活性评价的一种筛选技术。本文对适用于中药等复杂体系中活性成分筛选的靶分子亲和-质谱联用技术进行了综述,主要介绍直接进样质谱筛选技术、膜分离-质谱联用技术、分子排阻色谱-质谱联用技术、固定化靶蛋白-质谱联用技术、前沿亲和色谱-质谱联用技术、高效液相色谱恒流在线反应-质谱联用技术等的原理及其应用,为中药活性成分筛选提供技术参考。

不同类型中药制剂逆转结直肠癌T细胞免疫抑制及其靶分子的比较研究

目的比较研究不同类型抗瘤中药制剂对结直肠癌所致T细胞免疫抑制的影响,寻找能有效逆转结直肠癌T细胞免疫抑制的抗瘤中药制剂组方。方法分别制备三氧化二砷(As2O3)、川芎嗪(LHC)、黄芪(AMB)、氧化苦参碱(MOX)、猪苓多糖(PUPS)、青蒿琥酯(ART)等6种中药制剂作用后的小鼠结直肠癌Colon26细胞再培养上清;MTT法检测中药制剂作用后对Colon26所致T细胞转化抑制的影响,直接免疫荧光FCM法检测对IL-2Rα及CD3ε+ζ+表达抑制的影响;定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6、IL-10和PGE2含量;多元相关分析中药制剂逆转结直肠癌T细胞免疫抑制的相应靶分子。结果 AMB、PUPS及ART对T细胞转化抑制的下调程度较强(下调约50%),维持时间较长;ART对IL-2Rα表达抑制的下调作用最强(下调约50%),维持时间较长;AMB对CD3ε+ζ+表达抑制的下调作用最强,不但可完全消除表达抑制,还可进一步促进表达,维持时间亦较持久。对Colon26肿瘤细胞所致转化抑制及CD3ε+ζ+表达抑制的逆转,LHC的作用靶分子为TGF-β1和IL-10,其他5种中药制剂的靶分子均为TGF-β1。对IL-2Rα表达抑制的逆转,除AMB以外其他5种中药制剂的靶分子均为TGF-β1。结论通过阻碍肿瘤细胞分泌TGF-β1、IL-10等免疫抑制分子,以逆转肿瘤细胞产生的T细胞免疫抑制,应是中药制剂的新型抗瘤机制之一。

GCG干预LMP1激活的NF-κB信号转导通路中的靶分子

为阐明在鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(latentmembraneprotein 1,LMP1)激活的NF κB信号转导通路中的靶分子 ,采用EBV阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞 ,利用噻唑蓝 (MTT)法 ,观察表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对CNE1和CNE1 LMP1细胞生存率的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对NF κB活性的作用 .利用间接免疫荧光法 ,观察EGCG对NF κB (p6 5 )核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,通过蛋白质印迹分析EGCG抑制NF κB (p6 5 )的核移位后胞浆及胞核蛋白中NF κB (p6 5 )的变化 .采用蛋白质印迹分析EGCG对IκBα的磷酸化水平的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对EGFR启动子活性的影响 ,并用蛋白质印迹分析EGCG对EGFR自身磷酸化的作用 .结果表明EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制NF κB的活性 .EGCG能抑制NF κB (p6 5 )的核移位 ,并抑制IκBα的磷酸化 .EGCG对NF κB信号通路下游的靶基因EGFR的启动子活性及自身磷酸化都有抑制作用 .由上述结果可以推断 ,EGCG对信号转导通路上的NF κB、NF κB (p6 5 )、IκBα、EGFR多个靶点分子具有干预作用 .LMP1是EB病毒编码的蛋白质 ,因此 。

T淋巴细胞活化相关的microRNA的筛选、靶分子的预测、构建和鉴定

目的:筛选T细胞活化相关的microRNA并预测其靶分子,通过双荧光素酶实验鉴定这些microRNA的靶分子。方法:利用ExiqonmiRNA基因表达谱芯片,以活化的Jurkat细胞(用CD3抗体和CD28抗体双信号活化)为实验组,未活化Jurkat细胞为对照组,分析了二者miRNA表达谱的差异,找出表达水平显著改变的miRNA,并通过实时定量PCR的方法对芯片结果进行验证;构建miRNA的真核表达载体;利用生物信息学方法预测miRNA的靶分子,构建含靶分子3′UTR的荧光素酶报告基因质粒;分别将miRNA基因真核表达质粒与含有靶分子的荧光素酶报告基因质粒共转染HEK293细胞,进行荧光素酶实验来鉴定miRNA的靶分子。结果:ExiqonmiRNA基因表达谱芯片显示:Jurkat细胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576的表达明显下调;实时定量PCR验证结果与芯片结果一致;酶切鉴定与序列测定证实miR-568的真核表达载体构建成功;利用miRanda软件预测miR-568的靶分子,筛选出与T细胞活化密切相关的分子;双荧光素酶实验显示miR-568对NFAT5有比较明显的抑制作用。结论:T细胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576表达明显下调;NFAT5可能是miR-568作用的一个靶分子。

雷帕霉素靶分子信号转导通路在增生性玻璃体视网膜病变中的表达及意义

目的探讨雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号转导通路在增生性玻璃体视网膜病变中的表达及意义。方法用RT-PCR、Western-blotting方法检测正常视网膜组织和增生膜组织中mTOR、p70S6k和4E-BP1的mRNA及蛋白的表达。结果与正常视网膜组织相比,在增生膜组织中mTOR、p70S6k的mRNA及蛋白表达增加,4E-BP1mRNA及蛋白表达减少,差异均具有统计学意义。结论激活的mTOR信号通路可能是促进增生性玻璃体视网膜病变形成的重要因素之一。

依据药物作用的靶分子结构进行新药设计的方法

依据药物作用的靶分子结构进行新药设计 ,作为药物研究中的新方法使新药的研发过程正在从一种偶然性、经验性的过程逐渐走向一种合理的、科学的研发过程。作者在结合国内外有关文献基础上对这一方法的基本原理和基本过程进行综述。

二硫化碳氧化性自由基对生物靶分子损伤机理研究

利用脉冲辐解技术研究了二硫化碳(CS2)被氧化生成的阳离子自由基,以时间分辨瞬态吸收光谱方法获取CS2阳离子自由基的特征吸收谱。同时,研究了CS2阳离子自由基损伤生物靶分子的机理,测定了相关的反应动力学常数。结果发现,CS2阳离子自由基能与DNA、dGMP、酪氨酸和色氨酸反应产生新的产物,在CS2对生物靶分子的氧化损伤中可能起着重要的作用。

双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.

结肠癌及其分型的靶分子修饰递送药物的研究进展

目的:为结肠癌靶向治疗药物的研发提供参考。方法:以"结肠癌""靶分子""分型""靶向机制""修饰递送药物""Colon cancer""Target molecule""Typing""Targeting mechanism""Modified delivery drug"等为关键词,在中国知网、万方数据、PubMed等数据库中组合检索2001年7月-2018年6月发表的相关文献,筛选出能够准确靶向至结肠癌细胞的靶分子,并针对不同类型的结肠癌患者的靶向药物及其靶向特征的研究进展进行综述。结果与结论:共检索到相关文献255篇,其中有效文献54篇。目前,国内外学者研究和应用较多的结肠癌靶分子包括透明质酸、叶酸、小麦胚芽凝集素、核酸适配体、Affibody分子、单克隆抗体、多肽、microRNA等。为了能够更加精准地对结肠癌进行靶向,可以运用逆转录定量聚合酶链反应或者免疫组化法分析候选的生物标志物,将结肠癌分为杯状型、肠上皮细胞型、干细胞型、炎症型以及过渡扩增型CS-TA、CR-TA等6种类型,在研究结肠癌靶向药物时根据结肠癌不同分型选择其靶点及靶分子进行研发。目前,临床上已出现的靶向药物仍然因为对不同的结肠癌患者缺乏选择性使其应用受到限制。虽然可将结肠癌患者分型并据此给予不同的靶向药能够达到事半功倍的效果,但是目前这个分型方法还没有应用到临床上,并且此分型方法也由于样本量的限制,还不够完善。因此,关于结肠癌的分型以及针对不同分型的靶向药物还有必要继续深入研究。

雷公藤甲素药理作用靶分子研究进展

雷公藤甲素(Triptolide,简称甲素)是一种二萜内酯类化合物,具有多种生物学活性。准确定位甲素各种药理作用相应的靶分子,不仅有利于揭示其药理作用机制,也可以为其分子结构改进相关研究提供理论基础,最终达到减毒和增效的目的。因而甲素药理作用靶分子的筛选和鉴定成为研究的重点,并在近年来不断取得突破。本文就近年来对甲素药理作用靶分子相关实验研究作一综述,为相关研究人员和临床工作者提供参考。

microRNA靶分子在人类消化系肿瘤诊断和治疗中的研究进展

microRNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,主要参与基因转录后水平的调控,在肿瘤的发生、发展中扮演着重要的角色。恶性肿瘤组织和血液循环中存在着不同于正常机体的特征性miRNA表达谱,测定这些miRNA的表达可以成为恶性肿瘤早期诊断和预后判断的重要手段,而人为的干预体内miRNA表达可以达到治疗肿瘤的目的。

高通量药物筛选中靶分子固定化数学物理模型的建立

通过对高能量药物筛选基本过程的分析 ,探索了靶分子固定化可能对筛选质量构成的影响 .从分子相互作用看 ,实际的过程远较理想的情况复杂 .分子间存在的静电力、疏水作用力及氢键力能对固定化的机理构成较大影响 ,甚至可能诱发多层吸附的固定化模式 .基于固定化过程中可能存在的靶分子与靶分子、靶分子与微球、体相与表面相之间的相互作用 ,构筑了相应的数学物理模型 ,为实际的筛选工作提供了可参考的理论依据 .

乳腺癌靶分子间相互作用

随着肿瘤靶向治疗时代的到来，乳腺癌靶分子成为研究热点，同时对靶分子的深人研究也推动了乳腺癌靶向治疗的发展，改善了乳腺癌患者的预后。但是在临床实际应用中，仍然存在针对单个特异性分子靶点的靶向药物治疗无效；或者在初始有效的患者中，

肠癌生物靶分子的研究进展

美国流行病学家最近统计,美国在2002年中被诊断的结肠癌病例数高达148 300例,其中当年死于结肠癌者为56 600例[1];上海市区肠癌发病率也上升为全市恶性肿瘤的第4位[2].

细胞信号转导通路中药物作用靶分子研究进展

细胞内有许多信号转导通路,交织成一个大的细胞信号转导网络系统,该网络系统是非常有序和复杂的.受外环境的干扰和基因突变等因素的影响,细胞信号转导系统的有序在肿瘤细胞中被打乱,某些信号转导途径出现异常.美国MIT肿瘤研究中心的ras基因发现者Robert A Weinberg教授认为有四种细胞信号转导途径的异常与肿瘤的生长有密切关系,它们包括TGF-周期素(transforming growth factir-cyclin)途径、p19-p53途径、端粒酶(telomer-ase)途径和RasMARP途径,这些信号转导途径既独立又相互影响.

雷帕霉素靶分子在糖尿病肾病发病机制中的作用

哺乳动物雷帕霉素靶分子位于胰岛素/胰岛素样生长因子通路的下游,同时接受营养信号和能量信号,参与细胞、器官和生物体肥胖的调控,引起胰岛素抵抗,促进血管内皮细胞生长因子的表达,可能在2型糖尿病及糖尿病肾病的发生发展中起重要的作用。

乳腺癌新型靶分子及其微环境的改变

近年来，随着环境、饮食、生活方式等的改变，全球恶性肿瘤的发病率及死亡率正在逐步攀升。据最新文献报道，乳腺癌已成为全球女性发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。对乳腺癌的发生、发展机制以及乳腺癌的多线治疗模式的研究已经成为目前肿瘤研究的重点及热点。