肿瘤靶向多肽生物淘选技术研究进展

生物淘选肿瘤或癌细胞的各种特异性靶向多肽是探索肿瘤早期诊断和治疗方法的有效途径.特异性靶向多肽既可用于探测肿瘤细胞表型特征,又可将其与抗癌药物结合进行靶向治疗,同时还可作为体内肿瘤的成像制剂,用于肿瘤及肿瘤细胞微转移的早期探测.噬菌体展示肽库技术能够有效地进行生物淘选或识别出与癌或肿瘤细胞某一靶点连结的,具有特异性、高亲和性的多肽.近年来,利用体内或体外噬菌体展示肽库技术已成功地淘选或识别出一些癌细胞的靶向多肽.本文就这些方面的研究进展进行了简要阐述,重点介绍了癌或肿瘤细胞靶向多肽的体外和体内生物淘选最新技术和临床应用.

靶向多肽修饰的磁性纳米粒子在肿瘤成像中的应用

磁性纳米粒子在磁共振肿瘤成像中的应用已经得到广泛关注,相关研究也取得了各种突破性进展。与早期的被动模式相比,近年来发展的主动靶向性磁共振分子影像技术对靶器官具有高度的选择性和特异性,因此能提供更接近病理的相关信息,有更广阔的应用前景。围绕磁性氧化铁纳米粒子的肿瘤靶向成像应用,着重介绍靶向多肽修饰的磁性氧化铁纳米粒子的制备及其在疾病诊断应用,尤其是在肿瘤早期影像诊断方面的研究进展。

转铁蛋白受体靶向多肽载体合成条件的优化

研究表明,转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)在一些肿瘤细胞表面呈现过表达现象,而在正常细胞表达量很低[1-2],这种差异化表达提示TfR可能成为肿瘤治疗的作用靶点。噬菌体展示技术是筛选肿瘤靶向多肽的主要方法之一[3]。

肿瘤靶向多肽TMTP1偶联阿霉素选择性地抑制高侵袭性宫颈癌细胞株生长的体外研究

目的:合成一种新型的抗肿瘤药物TMTP1-Dox,探讨其应用于宫颈癌化疗的潜在应用价值。方法:选取正常宫颈上皮永生化细胞系End1及宫颈癌细胞系SiHa和C-33A。Transwell试验验证侵袭转移能力。细胞亲和试验检测FITC-TMTP1对细胞株的亲和能力。流式细胞仪检测Dox及TMTP1-Dox的细胞摄入。CCK-8法检测Dox和TMTP1-Dox作用于End1、C-33A和SiHa细胞时的生长抑制率。结果:SiHa细胞的侵袭能力显著强于C-33A和End1细胞,TMTP1对SiHa细胞的亲和力高于C-33A和End1,SiHa细胞对TMTP1-Dox的摄入量显著多于C-33A和End1,差异均有统计学意义(P<0.05)。作用12和24h时,TMTP1-Dox/Dox对SiHa细胞的生长抑制率无显著差异(P<0.05)。TMTP1-Dox对C-33A和End1细胞的生长抑制作用明显弱于Dox细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TMTP1-Dox能选择性地抑制高侵袭能力的宫颈癌细胞的生长增殖,对正常细胞的毒性作用低。提示TMTP1-Dox对于宫颈癌的靶向治疗具有潜在应用价值。

靶向多肽R8-HBAP抑制成人T细胞白血病细胞恶性增殖

成人T细胞白血病(Adult T-cell leukemia,ATL)是与人类T淋巴细胞白血病1型病毒(Human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)感染密切相关的恶性淋巴细胞白血病.HTLV-1反义编码的HBZ(HTLV-1 b ZIP factor)蛋白在ATL发生过程中扮演极为重要的角色.为了寻找治疗成人T细胞白血病的方法,设计了能与HBZ蛋白形成二聚体,从而封闭HBZ蛋白功能的靶向多肽R8-HBAP.通过免疫共沉淀实验,发现R8-HBAP可以有效抑制HBZ蛋白与下游靶蛋白c-Jun的结合,报告基因实验显示,R8-HBAP能阻遏HBZ蛋白对AP-1信号通路的调控作用.MTT和流式细胞术实验发现,R8-HBAP能抑制ATL细胞的恶性增殖并促进细胞凋亡.因此,靶向多肽R8-HBAP通过阻遏HBZ蛋白的功能从而抑制白血病细胞的恶性增殖,为R8-HBAP的开发利用及成人T细胞白血病的治疗提供一定的实验依据.

癌细胞/组织靶向多肽研究进展

恶性肿瘤是严重威胁人类健康生活的高发性疾病,由于缺乏早期诊断的方法以及放/化疗的巨大毒性,恶性肿瘤仍然是对人类生命健康的最大威胁之一.未来恶性肿瘤诊治取得突破的关键在于早期诊断和靶向治疗,而特异、敏感的肿瘤标志物对此意义十分重大.近年来,肿瘤标志物的研究探索取得了一定进展,尤其是肿瘤靶向多肽类标志物的研究进展较大.本文对近年来恶性肿瘤靶向多肽的筛选、鉴定、应用及未来的发展方向等进行了简要综述,以供从事相关研究的人员参考.

靶向多肽SS-31对载脂蛋白E敲除动脉粥样硬化大鼠干预效果研究

目的观察靶向多肽SS-31对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除动脉粥样硬化大鼠的干预效果。方法2018年12月—2019年4月于中国人民解放军空军军医大学第二附属医院实验动物中心进行实验。ApoE基因敲除雄性大鼠60只,按照随机数字表法分为2组,各30只。实验组大鼠皮下注射SS-31,对照组大鼠皮下注射同等剂量的生理盐水。2组大鼠均高脂饲养10周后处死,取主动脉窦染色,比较2组大鼠主动脉斑块面积及大小,取血液样本检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、血清细胞内黏附因子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平,观测大鼠主动脉切片活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)及ATP水平,免疫组化法检测大鼠CD36及LOX-1的表达水平。结果实验组大鼠主动脉斑块面积及大小均低于对照组(t/P=5.664/<0.001,5.035/<0.001);血清ICAM-1及MCP-1水平均低于对照组(t/P=8.138/<0.001、5.253/<0.001),而2组TG、TC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组主动脉组织ROS及SOD水平明显低于对照组,ATP水平明显高于对照组(t/P=7.533/<0.001、2.580/0.018、8.794/<0.001);CD36及LOX-1表达均显著低于对照组(t/P=5.957/<0.001、7.170/<0.001)。结论靶向多肽SS-31对ApoE敲除大鼠动脉粥样硬化具有较好的治疗效果,与该药能够缓解大鼠氧化应激反应有关。

CSB1-Lipo-DOX-miR101靶向治疗乳腺癌及抗耐药效应的体外研究

通过薄膜超声分散技术、硫酸铵主动载药技术构建了靶向乳腺癌(breast cancer,BC)细胞的具有抑制化疗药物多药耐药性(multidrug resistance,MDR)特征的阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体载药体系CSB1-Lipo-DOX-miR101。应用MTT法、损伤修复法、Transwell、细胞核染色、扫描电镜等技术对药物疗效和细胞行为变化进行研究。利用网络数据库分析miRNA101潜在靶向的MDR相关靶基因及BC恶性表征相关基因,以Western blot验证分析miRNA101靶基因的表达及潜在的抗MDR机制。结果表明,CSB1-Lipo-DOX-miR101对BC细胞MCF-7靶向性良好,特别是对耐药性BC细胞MCF-7/ADR具有明显杀伤力,同时对药物的MDR形成具有显著抑制作用,使药物可以持续发挥杀伤作用。结果提示CSB1-Lipo-DOX-miR101可以提高DOX对BC的临床治疗效应、降低毒副作用及复发率,其对BC的治疗效应及对MDR的抑制机理可能是通过抑制ABCC5、EZH2、APEX1、ITGB1、Snail1、MMP2基因表达实现的。

肿瘤靶向纳米四氧化三铁造影剂的制备及其磁共振成像应用

环氧氯丙烷交联法制备交联葡聚糖与多肽偶联的肿瘤新生血管靶向的纳米Fe3O4造影剂,考察其体内肿瘤靶向性并进行磁共振成像试验。以共沉淀法制备6～8nm的Fe3O4粒子,采用油酸钠和葡聚糖二次包覆,用环氧氯丙烷使葡聚糖交联并与靶向多肽偶联,进行了肿瘤细胞结合实验和荷瘤动物磁共振成像实验。结果表明,包覆后纳米Fe3O4复合粒子为20～30nm,水动力学粒径小于80nm,仍表现为超顺磁性;葡聚糖交联的时间4～8h,造影剂在体内血浆半衰期从2.8h延长到6.2h;主要通过肝脏和肾脏代谢。与无靶的比较,靶向多肽偶联后与肿瘤细胞特异性结合能力提高了10～30倍,MR成像信号密度是无靶的3.68倍。

应用多肽偶联修饰提高中药靶向抗肿瘤作用的研究进展

多肽具有易合成、易代谢、免疫原性低、毒副作用低等优点,多肽支链上大量的官能团可以和药物偶联,是药物递送系统的重要发展方向。应用多肽偶联中药有效单体成分,可以很好的提高其靶向性、稳定性、利用率,延长在肿瘤区域的作用时间,减缓降解等作用。癌症靶向多肽能够特异性识别肿瘤细胞上的膜受体,提高药物靶向治疗效果,减少毒副作用。文章旨在对现有热点中药成分与多肽偶联修饰治疗肿瘤的研究进行综述,为中医中药依托现代科技优化药物疗效提供新思路。

多肽靶向脂质体的表面配体修饰密度及其体内肿瘤靶向效果的研究

脂质体作为一种药物载体广泛应用于肿瘤药物输送中。配体修饰的靶向脂质体,其靶向配体分子在脂质体表面修饰的构象和密度等参数,对脂质体本身的特性及其体内的靶向效果,有很大的影响。但有关其中的具体相互关系,以及可能的最优条件,国内外文献都尚无定论。据此我们建立了多肽靶向脂质体表面配体修饰的分析方法,并通过影像学手段来研究不同靶向肽含量对脂质体在荷瘤裸鼠中的靶向行为的影响。首先采用孵育插入法将带有多肽的脂质分子插入脂质体表面,用分子筛色谱法分离修饰后的脂质体和未插入的多肽脂质,再用HPLC-ELSD定量各脂质成分,得到多肽靶向脂质体表面的靶向肽密度。而后将修饰有不同密度靶向多肽的荧光脂质体经荷瘤小鼠尾静脉注射,分别在给药前后各时间点对小鼠进行扫描,对扫描得到的图像进行处理并计算AUC、T1/2和MRT等相关药代动力学参数。结果表明,随着脂质体表面多肽密度的增加,即多肽密度大于1.298%的靶向脂质体,其肿瘤部位的荧光AUC、T1/2和MRT都较未修饰的隐形脂质体有所提高,显示其在肿瘤组织中的聚集量增多、停留时间延长,针对肿瘤细胞的特异性作用机制得以彰显。

EpCAM分子特异结合多肽的筛选和鉴定

上皮/内皮细胞分子(EpCAM)是癌干细胞(CSC)重要的表面标记物分子。利用噬菌体展示肽库进行亲和消减富集生物淘筛(Biopanning),经过5轮淘筛,从最后一轮的噬菌体洗脱库中随机挑选47个克隆扩增,通过ELISA方法初步确定30个阳性噬菌体克隆并进行测序,序列分析后获得5个共有序列克隆群,随后通过细胞免疫荧光实验验证和鉴定了其CSC靶向结合特异性。经综合分析,确定R8噬菌体克隆的EpCAM结合特异性和敏感性最佳,将其多肽序列命名为ESP1。该EpCAM靶向肽ESP1未来在癌化疗靶向递送药物研发方面具有潜在使用价值,可使药物尽可能多地杀伤CSC,进而提高疗效,减少复发。