期刊文献+
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
DNA核靶向序列的研究进展
1
作者 梁翠翠 郭华荣 《科技资讯》 2016年第2期148-149,共2页
DNA核靶向序列(DNA nuclear targeting sequence,DTS)是指能够促进外源质粒DNA通过核孔复合体(Nuclear Pore Complex,NPC)靶向入核的DNA片段。筛选和发现有活性的DTS,并将其插入质粒载体中,对于在不分裂细胞中采用非病毒介导的基因转移... DNA核靶向序列(DNA nuclear targeting sequence,DTS)是指能够促进外源质粒DNA通过核孔复合体(Nuclear Pore Complex,NPC)靶向入核的DNA片段。筛选和发现有活性的DTS,并将其插入质粒载体中,对于在不分裂细胞中采用非病毒介导的基因转移方法所开展的基因治疗的效率的提高,具有重要科学意义。该文综述了DNA核靶向序列的发现及其作用机制,并展望了其应用前景。 展开更多
关键词 DNA核靶向序列 基因转移技术 入核效率 研究进展
下载PDF
靶向哺乳动物细胞线粒体的核酸转运 被引量:2
2
作者 付爱玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-4,共4页
线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的遗传性突变和缺陷是多种线粒体功能失调相关疾病的根本原因。靶向线粒体递送核酸,可从根本上纠正mtDNA突变、挽救mtDNA损伤、阻断疾病进程。哺乳细胞内线粒体的核酸转运途径与细胞核的基因转染大... 线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的遗传性突变和缺陷是多种线粒体功能失调相关疾病的根本原因。靶向线粒体递送核酸,可从根本上纠正mtDNA突变、挽救mtDNA损伤、阻断疾病进程。哺乳细胞内线粒体的核酸转运途径与细胞核的基因转染大不相同。该文综述了向哺乳动物细胞线粒体递送DNA和RNA(tRNA、rRNA、mRNA和反义RNA)的有效策略,并对其存在问题和发展趋势做一阐述。 展开更多
关键词 线粒体转导 靶向序列 核酸转运 线粒体相关疾病 tRNA载体 5srRNA转导 穿梭蛋白
下载PDF
华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位 被引量:2
3
作者 胡旭初 周红娟 +6 位作者 胡凤玉 马长玲 赵俊红 黄灿 郑小凌 徐劲 余新炳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期95-101,共7页
目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基(CsATP-synt_B)的虫体组织定位,并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。方法用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠,取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色,观察CsATP-synt_B蛋白在华... 目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基(CsATP-synt_B)的虫体组织定位,并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。方法用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠,取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色,观察CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫组织中的分布。根据生物信息学预测的CsATP-synt_B线粒体转运序列(MTS序列)和核定位序列(NLS序列)位置,设计4组引物[CsATP-synt_B全长序列,以及3个缺失突变体(MTS-缺失线粒体转运序列、NLS-缺失核定位序列、MTS-NLS-线粒体-核定位双缺失)引物],扩增出全长基因和3个突变体基因,构建重组质粒pEGFP-N1-CsATP-synt_B1-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B30-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B(1-238)+(257-300)及pEGFP-N1-CsATP-synt_B(30-238)+(257-300)。将这些重组质粒用阳离子脂质体转染HeLa细胞,48h后用激光共聚焦显微镜观察CsATP-synt_B全长基因和3个突变体在HeLa细胞的表达和亚细胞定位。结果CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫中分布较为广泛,主要分布在腹吸盘、卵巢、卵黄腺和皮层。绿色荧光蛋白GFP表明CsATP-synt_B全长序列表达于线粒体或细胞核,线粒体转运序列缺失突变体表达于细胞核,核定位序列缺失突变体表达于线粒体,双缺失突变体仅表达于胞浆。结论CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫的分布与线粒体的分布一致,主要集中在能量代谢较旺盛的组织部位。CsATP-synt_B蛋白既可进入线粒体,也可进入细胞核,理论预测的定位序列得到证实。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 ATP合酶b亚基 免疫组织化学 亚细胞定位 靶向序列
下载PDF
慢病毒介导构建661W细胞mito-OGG1过表达和OGG1敲减模型
4
作者 李晗 马伟 +5 位作者 施康沛 王磊 黄浩 吴文斌 张晓彤 朱晓波 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期348-356,共9页
目的构建和鉴定慢病毒介导的小鼠线粒体靶向8-羟基脱氧鸟嘌呤DNA糖苷酶1(mito-OGG1)基因在661W细胞中的过表达,以及慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)下调OGG1基因在661W细胞中的表达。方法构建目的质粒pLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro-CMV-Mito-... 目的构建和鉴定慢病毒介导的小鼠线粒体靶向8-羟基脱氧鸟嘌呤DNA糖苷酶1(mito-OGG1)基因在661W细胞中的过表达,以及慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)下调OGG1基因在661W细胞中的表达。方法构建目的质粒pLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro-CMV-Mito-OGG1-3Flag(pLenti-OGG1-GFP)和pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNA(pLKD-shRNA),利用第2代慢病毒包装系统和293T细胞获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的目的慢病毒载体,利用293T细胞进行病毒滴度检测,荧光显微镜计数法检测不同感染复数(MOI)梯度下661W细胞的转染效率和生存情况,并确定最适MOI,利用不同浓度梯度嘌呤霉素作用于661W细胞以筛选出嘌呤霉素最低使用浓度,并以此浓度筛选出稳定转染细胞株,免疫荧光检测筛选后细胞转染效率并进行细胞色素C氧化酶Ⅳ(COXⅣ)-OGG1共定位鉴定,采用荧光定量PCR(QPCR)和Western blot法分别检测OGG1基因的mRNA和蛋白相对表达水平。结果测序结果显示,过表达质粒中插入的序列与基因库中小鼠OGG1(NM_010957.4)基因序列一致,包装纯化后的慢病毒原液滴度为2.0×10^7~6.0×10^7 TU/ml,661W细胞最适MOI为40,4.0 μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳转株,筛选后转染效率达100%。免疫荧光染色结果显示,OGG1与COXⅣ成功共定位。空白对照组、OGG1组、过表达对照组、shRNA组和低表达对照组OGG1 mRNA相对表达量分别为1.000±0.000、41.581±12.206、0.888±0.056、0.239±0.121和1.081±0.083,OGG1蛋白的相对表达量分别为1.029±0.153、1.657±0.237、0.752±0.143、0.471±0.149和1.036±0.185,各组间总体比较差异均有统计学意义(F=44.654、30.948,均P<0.05),其中OGG1组的OGG1 mRNA和蛋白相对表达量均较过表达对照组明显升高,shRNA组的OGG1 mRNA和蛋白相对表达水平均较低表达对照组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论本实验成功构建661W细胞mito-OGG1过表达和OGG1敲减模型,为下一步研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 慢病毒载体 过表达 短发夹RNA OGG1基因 661W细胞 线粒体靶向序列
下载PDF
The impact of the provincial reimbursement scheme on the use of targeted anticancer medications in Zhejiang,China:a controlled interrupted time-series analysis
5
作者 Cong Huang Carolina Oi Lam Ung +4 位作者 Haishaerjiang Wushouer Ziyue Xu Yichen Zhang Xiaodong Guan Luwen Shi 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2021年第7期590-597,共8页
To alleviate problems with access and affordability,six targeted anticancer medications(TAMs)were listed in the Provincial Reimbursement Drug List(PRDL)for the first time in Zhejiang,China in February 2015.In the pres... To alleviate problems with access and affordability,six targeted anticancer medications(TAMs)were listed in the Provincial Reimbursement Drug List(PRDL)for the first time in Zhejiang,China in February 2015.In the present study,we aimed to evaluate the implementation of the PRDL policy on TAMs use.Using the pharmaceutical procurement data of these six listed TAMs(study group)and four unlisted TAMs(control group)from 22 tertiary hospitals in Zhejiang,China dated between January 2014 and February 2017,interrupted time-series analysis was adopted to examine differences in the average hospital purchasing volume(HPV)and the average hospital purchasing spending(HPS)between the two groups.The average daily cost of listed TAMs in the study group was decreased after April 2015.After enlistment,the average HPV per month was significantly increased by 34.6 defined daily doses(DDDs)(P<0.001),and the average HPS per month was significantly increased by USD 6614.9(P<0.001)for the listed TAMs in the study group(n=6).Neither the average HPV nor the average HPS changed significantly for the unlisted TAMs in the control group(n=4).The PRDL policy showed positive effects on improving patients’affordability and promoting access to TAMs in Zhejiang.The government should conduct further price negotiations and include more TAMs with clinical benefits into reimbursement schemes to relieve patients’financial burden and promote access. 展开更多
关键词 Provincial reimbursement Targeted anticancer medications Interrupted time-series
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部