肝癌靶向性超抗原基因疫苗的设计和预测

目的 :探讨AFP顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原疫苗 (SEA(D2 2 7A) Linker CD80tm)设计的合理性。方法 :应用核酸和蛋白质分析软件GeneConstructionKit2 .0、ANTHERPRO5 .0、JAMBW1 1和www .expasy .com网站提供的方案 ,分析重组体的开放读框以及融合蛋白的可及性、柔性、抗原性和疏水性 ,并作了跨膜区和二级结构模拟。结果 :重组体的转录受AFP顺式作用元件调控 ,Linker所在部位柔性高 ,可及性弱 ,不改变两侧蛋白分子的抗原性和疏水性。融合蛋白表达后 ,被CD80tm锚定于肝癌细胞表面 ,超抗原部分 (SEA)表达在细胞膜外 ,二级结构预测Linker不改变蛋白结构 ,完全符合作者设计疫苗的初衷。结论 :重组疫苗设计合理 ,特异性高 ,融合蛋白有很大可能保留了SEA和CD80tm的理化特性 ,为进一步的实践操作提供了可靠的理论基础。

肿瘤疫苗潜在的靶抗原——癌基因蛋白

近年来随着ＭＨＣ分子对抗原识别理论的阐明以及癌基因结构和功能的深入研究，以ＭＨＣ癌基因抗原肽为基础旨在诱导ＣＤ８＋ＣＴＬ介导的细胞免疫反应为主的肿瘤疫苗研究进展迅速，提示癌基因抗原肽疫苗有望应用于肿瘤特异性免疫治疗。

肿瘤基因治疗的靶向性策略

肿瘤基因治疗的靶向性问题直接关系到治疗的成败。这种靶向性的策略包括目的基因对肿瘤细胞的靶向转移 ,目的基因在肿瘤细胞中的特异表达 ,以及基因修饰细胞分泌的肿瘤靶向治疗分子。对现有病毒或非病毒载体进行改造 ,由与载体融合的抗体或配体与肿瘤表面抗原或受体的相互作用可以实现目的基因的靶向转移 ;肿瘤或组织特异性调控元件的应用 ,以及一些物化。

基因释放剂在制备结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶DNA模板中的应用

目的 :探讨基因释放剂的应用并为结核病DNA疫苗的研究提供靶基因。方法 :分别用基因释放剂提取法与DNA提取试剂盒提取法制备结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶DNA模板 ,采用PCR法从模板中扩增早期分泌性抗原靶 (ESAT - 6 )基因并测序证实所扩增的基因是否为目的基因。结果 :从基因释放剂提取法与DNA提取试剂盒提取法制备的DNA模板中均成功地扩增出了目的基因ESAT - 6。结论 :基因释放剂提取法制备结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶DNA模板方便、快捷 ,提高了制备DNA模板效率。

蒿甲醚预防日本血吸虫病诱导的兔特异抗体相关靶抗原编码基因的筛选

目的寻找应用蒿甲醚预防血吸虫后,引起免疫保护作用的抗原分子,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法感染血吸虫7天后的家免口服蒿甲醚,收集血清,用蒿甲醚预防后的免疫免血清筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)成虫 cDNA 文库,并对阳性克隆的插入基因片段进行 PCR 扩增及测序分析。结果经三轮筛选,获8个阳性克隆。测序分折所获的这8个序列,其中5个序列分别与日本血吸虫三磷酸甘油醛脱氢酶基因(Sj GAPDH)基因同源,其余3个序列为日本血吸虫28kD 谷胱甘肽-S-转移酶(Sj.GST)基因。结论 Sj.GAPDH 和 Sj.28kDGST 可能是蒿甲醚杀伤血吸虫后,引起对再感染起免疫保护作用的抗原分子。

特异性靶向犬细小病毒融合DNA疫苗的构建及免疫效果的研究

研究旨在构建特异性靶向犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)融合DNA疫苗,探讨其诱导机体产生免疫应答的效果。试验用重组技术构建了含细胞毒性T淋巴细胞抗原-4胞外区(CTLA-4125)与犬细小病毒VP2的主要抗原表位区域(VP2_(228))融合表达质粒pVAX1-CTLA-4125-VP2_(228),同时构建了不含CTLA-4125的pVAX1-VP2_(228),体外转染COS-7细胞,Western blotting检测其表达产物;将pVAX1-CTLA-4125-VP2_(228)、pVAX1-VP2_(228)分别免疫小鼠,免疫后进行抗体水平测定和抗体亚型分析;通过淋巴细胞增殖试验和ELISA分别检测淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平。结果显示成功构建了pVAX1-CTLA-4125-VP2_(228)和pVAX1-VP2_(228),并能在COS-7细胞中正确表达;抗体检测结果显示pVAX1-CTLA-4125-VP2_(228)免疫组抗体水平显著高于pVAX1-VP2_(228)免疫组(P<0.05);淋巴细胞增殖试验显示pVAX1-CTLA-4125-VP2_(228)免疫组的刺激指数显著高于pVAX1-VP2_(228)免疫组(P<0.05);γ-干扰素表达水平测定显示pVAX1-CTLA-4125-VP2_(228)免疫组极显著高于pVAX1-VP2_(228)免疫组(P<0.01)。结果表明,CTLA-4125-VP2_(228)融合DNA能有效增强动物对VP2_(228)抗原的免疫应答,为进一步研究融合DNA疫苗特异性的靶向递呈机制奠定基础。

特异性靶向的戊肝嵌合DNA疫苗的构建及免疫效果研究

目的 制备特异性靶向的嵌合DNA疫苗，并探讨其诱导机体产生免疫应答的效果。方法 用基因重组技术构建细胞毒T淋巴细胞抗原4（CTLA4）与戊肝病毒抗原HEVE2嵌合基因的真核表达质粒。同时构建不带CTLA4的pHEVE2作为平行对照质粒，体外转染COS-7细胞，Western blotting法检测细胞培养上清表达并且 物；于BALB/c小鼠皮内注射，每隔2周1次，共免疫3次，100μg/次，于免疫的第3、5和10周ELISA检测抗体效价。结果 获得pHEVE2和pCTLA4-HEVE2嵌合基因真核表达质粒，测序证实各连接点阅读框序列正确；体外转染COS-7细胞，证明真核质粒以分泌形式表达；接种pCTLA4-HEVE2小鼠产生高滴度的特异性抗HEVE2抗体，比接种pHEVE2的对照组高50-100倍；pCTLA4-HEVE2诱导高水平的IgG2a,IgG2bTh1型抗体和IgG1Th2型抗体应答，pHEVE2则以IgG1Th2型抗体应答为主。结论 CTLA4-HEVE2嵌合DNA疫苗有效地增强动物对HEVE2抗原的免疫应答，为进一步研究抗原靶向性的嵌合DNA疫苗奠定基础。

河南汉族人群HLA超型的分析研究

目的分析河南汉族人群HLA基因多态性和超型分布。方法采用测序法对111名志愿者的血样进行HLA-A、-B、-C、-DRB1和-DQB1五个座位的基因分型,分别根据5个研究组的HLA超型分型标准进行HLAⅠ类和Ⅱ类超型的分析统计。结果总共检测出130个HLA等位基因,其中HLA-A座位为21个等位基因,-B座位为41个,-C座位为24个,-DRB1座位为27个,-DQB1座位为17个。依据不同的分型方法,共得到86个超型,其中HLAⅠ类51种,Ⅱ类35种。按照5个研究组的分型标准,HLAⅠ类的优势超型型别基本相似,其中HLA-A2和-B7的分布差异无统计学意义(P>0.05)。但对于HLAⅡ类分子,超型名称分类标准在不同的研究组均不同。结论获得河南汉族人群的超型分布特征,HLAⅠ类分子的优势超型为HLA-A3、-A2、-B7、-B44和-B62,但HLAⅡ类分子的超型分类标准尚不统一,有待进一步研究。

小鼠卵透明带3(mZP3) cDNA的克隆、测序及mZP3 DNA疫苗的构建

卵透明带 3 (ZP3 )蛋白是透明带中的一种主要蛋白 ,在精卵结合过程中作为精子的初级受体起重要的作用 ,抗 ZP3抗体可以阻断精卵的相互作用 ,ZP3被认为是一种潜在的避孕疫苗的靶抗原。本文根据小鼠卵透明带(m ZP3 ) c DNA序列 (1 3 1 7bp)设计了上游和下游引物 ,从小鼠卵巢中提取总 RNA,经 RT-PCR克隆了鼠卵透明带 3基因的 c DNA,将其亚克隆至 p UCm-T载体后利用蓝白斑特性筛选出阳性克隆 ,酶切鉴定后测序比较 ,与Gene Bank小鼠 ZP3 c DNA序列完全相同 ,证明克隆出正确的小鼠 ZP3 c DNA.将 m ZP3克隆至真核表达质粒p CMV4上 ,构建完成了 DNA避孕疫苗的载体 p CMV4-m ZP3 ,为应用

恶性肿瘤基因治疗结合放射治疗的研究进展

肿瘤的基因治疗是当前医学和生物学的一个新的研究领域,它是通过将外源性 DNA片段即目的基因稳定地插入到靶细胞基因中,使其在肿瘤部位表达高浓度产物或在体外相关细胞内重组后再导入体细胞中表达,从而抑制肿瘤恶性表型,达到控制肿瘤细胞生长和繁殖的目的.目前基因治疗研究在细胞和动物实验阶段已取得了一定的成果,有不少方法已进入临床试验阶段,但其临床治疗疗效并不令人满意 [1].基因治疗尚不能取代手术、放疗、化疗等常规治疗手段,但研究已表明其可用来提高放疗、化疗的敏感性,减少肿瘤的复发和转移等 [2].本文将就近几年来基因治疗结合放疗治疗恶性肿瘤的研究进展作一简要综述.

构建乙型肝炎核酸疫苗的几条新思路

近年来兴起的核酸疫苗的研究在乙型肝炎的防治中显示出诱人的前景,引起了国内外学者们的关注。然而,研制高效低毒的乙型肝炎核酸疫苗仍是目前研发的主要目标。本文就如何构建高效的乙型肝炎核酸疫苗提供了几条新思路。

EB病毒及其疫苗的研究进展

EB病毒广泛存在于人群中,它的潜伏感染与多种疾病密切相关,包括鼻咽癌等恶性肿瘤,研制疫苗用于EB病毒相关疾病的预防和治疗十分必要。本文综述了EB病毒的结构及基因表达特点、EB病毒潜伏期感染基因表达及潜伏期基因产物的功能,以及研制EB病毒疫苗的靶抗原的选择。

DC靶向性DNA疫苗在人小细胞肺癌细胞株中的抗肿瘤作用

小细胞肺癌（SCLC）是肺癌中恶性程度最高的一种，针对小细胞肺癌靶抗原的基因免疫治疗是其防治的方向。前胃泌素释放肽（PGRP）是SCLC的特异性肿瘤标志物…。我们从人小细胞肺癌细胞中克隆了PGRP基因，构建具有DC靶向的DNA疫苗，免疫小鼠后得到了较理想的免疫效果。

丙型肝炎病毒内源性靶向基因疫苗对荷瘤小鼠抑瘤效果的初步研究

目的研究基于恒定链的丙型肝炎病毒(HCV)NS3内源性靶向巨噬细胞表面分子Ia的分子基因疫苗对HCV NS3荷瘤小鼠的抑瘤效果,探索HCV感染基因治疗的可行途径。方法BALB/c小鼠皮下接种稳定表达HCV NS3的小鼠骨髓瘤SP2/0-NS3细胞,3 d后于股四头肌注射疫苗进行免疫治疗,2周后进行一次加强免疫。BALB/c小鼠共64只,随机分为等渗盐水对照组、空质粒pCI-neo对照组、pHCV- NS3非靶向治疗组和pHCV-NS3-Thl靶向治疗组,观察成瘤时间、肿瘤大小和小鼠的60 d存活率。结果等渗盐水、pCI-neo、pHCV-NS3、pHCV-NS3-Th1组小鼠平均成瘤时间分别为(16.17±2.55)d、(14.40 ±1.82)d、(16.75±2.36)d、(24.00±5.57)d;成瘤率分别为100.0%(13/13)、100.0%(14/14)、57.1%(8/14)和46.7%(7/15);60 d存活率分别为0、0、50.0%(7/14)和53.3%(8/15)。对四个时间点成瘤小鼠肿瘤大小比较的结果显示,pHCV-NS3-Th1组成瘤小鼠的肿瘤直径最小,与其他组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结果显示,成瘤小鼠的平均存活时间比等渗盐水组延长6 d,比pCI-neo组延长12 d(P<0.05),比pHCV-NS3组延长6 d。结论pHCV-NS3-Th1具有延迟HCV-NS3荷瘤小鼠肿瘤形成、限制肿瘤生长、降低成瘤率、病死率以及提高存活率的作用。基于恒定链的内源性靶向性基因疫苗有望作为HCV感染防治的候选治疗性疫苗。

HER2/neu诱导DBA/2小鼠特异性CTL应答及其抑瘤效应研究

目的 探讨HER2 neu原癌基因DNA疫苗免疫诱导特异性细胞免疫应答及其在体内的抑瘤效应。方法 将重组HER2 neu原癌基因真核表达载体转染P815细胞 ,用细胞组织化学及Western blot方法鉴定质粒在细胞中的表达。在DBA 2小鼠体内构建表达HER2抗原的肿瘤动物模型 ,通过重组质粒免疫小鼠 ,诱导小鼠产生细胞免疫应答 ,观察免疫动物体内的抗瘤效应。结果 在体外获得了稳定表达HER2 neu基因的P815细胞 ;免疫小鼠脾细胞中诱导出特异性CTL ,并杀伤HER2 neu阳性的P815细胞 ;荷瘤小鼠的肿瘤生长受抑 ,存活期延长。结论 HER2 neu原癌基因DNA疫苗免疫可诱导特异性细胞免疫应答 ,并具有一定抗瘤效应。

葡萄球菌肠毒素B突变体的免疫原性研究

目的 研究葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体的免疫原性和作为超抗原疫苗的应用前景。方法 利用小鼠动物模型 ,分别对SEB 2 3位突变体 (SEB -M2 3)和 15 0位突变体 (SEB -M 15 0 )作毒力、免疫原性和保护力试验。结果 小鼠致死性试验表明 ,与野生型SEB (SEB -N)相比 ,SEB -M 2 3的毒力大幅度下降 ,而SEB -M15 0的毒力则未见下降。淋巴细胞增殖试验发现 ,SEB -M15 0与SEB -N相比 ,cpm掺入量相似 ,说明 15 0位突变并不影响SEB超抗原的活性 ;SEB -M2 3与SEB -N相比 ,其cpm掺入量显著下降 ,表明 2 3位突变可显著降低SEB超抗原活性。ELISA结果显示 ,以SEB -N、SEB -M 2 3、SEB-M 15 0三种蛋白免疫小鼠 ,都能诱生一定量的抗体 ,且产生的抗体水平非常接近 ,无统计学意义。主动免疫治疗和被动免疫治疗结果证明 ,SEB -M2 3蛋白免疫的小鼠能抵抗野生型SEB致死剂量的攻击 ,同时被动转移免疫小鼠的抗血清能保护接受致死剂量SEB -N的小鼠免于死亡。结论 SEB -M 2 3毒力低、免疫原性强 ,有可能成为一种很有希望的超抗原候选疫苗 ,用于某些疾病的预防。