葡激酶纳米脂质体的制备及靶向溶栓的实验研究

目的探讨葡激酶(PK)纳米脂质体的溶栓效果。方法采用逆相蒸发法制备PK纳米脂质体,并用反相液相色谱(HPLC)法制备归巢装置,观察PK纳米脂质体包封率、分散性、形态、大小,制备血栓动物模型,应用不同剂量的PK纳米脂质体导向装置,观察溶栓效果。结果PK纳米脂质体平均粒径为(78.6±5.7)nm,多分散性指数为0.298。PK纳米脂质体包封率71.5,回收率93.2。分析10、20、30、40min各个时间段,PK大剂量组与精-甘-天冬-丝氨酸(RGDS)-PK纳米脂质体在血压变化方面与对照组均有显著差异(P<0.05),各实验组的血栓湿重与对照组比较均有显著差别(P<0.001)。其中PK纳米脂质体、RGDS-PK纳米脂质体与小剂量PK组比较有统计学意义(P<0.05)。结论制备PK纳米脂质体是可行的,RGDS有导向性,该归巢装置具有较好的溶栓效果。

经导管靶向溶栓对ST段抬高型心肌梗死患者微循环的保护价值

目的通过微导管对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者行冠状动脉内靶向溶栓,观察其对冠状动脉微循环灌注、心肌梗死面积及预后的影响。方法2018年6~12月,50例冠状动脉造影显示血栓积分≥3分高血栓负荷的急性STEMI患者应用随机数表法分为经微导管冠状动脉内靶向溶栓组(IT组)及常规血栓抽吸组(TA组),各25例。IT组通过微导管冠状动脉内给予低剂量重组尿激酶原10 mg,TA组常规血栓抽吸,支架植入术后即刻通过压力-温度导丝测定冠状动脉微循环阻力指数(IMR),心肌梗死溶栓试验(TIMI)血流分级、校正的TIMI血流帧数计数(CTFC)及TIMI心肌灌注分级(TMPG),测量肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)峰值水平及心电图ST回落(STR)情况,术后7 d行单光子发射计算机断层显像检查评价灌注缺损面积(PDA),心肌梗死术后24 h及3个月后行心脏超声评价心脏功能及结构,随访3个月内主要心脏不良事件发生及出血的发生。结果两组基线资料及冠状动脉造影资料、介入数据资料、TIMI分级、CTFC及STR比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。IT组CK、CK-MB、cTNI峰值低于TA组,IT组TMPG 3级比例高于TA组,IT组IMR值低于TA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后24 h,两组左室射血分数(LVEF)、左室舒张末径、室壁运动积分指数(WMSI)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后3个月,IT组LVEF高于TA组,左室舒张末径、WMSI低于TA组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后7 d,IT组PDA低于TA组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者在出血事件及3个月内主要心脏不良事件发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论冠状动脉内靶向溶栓可有效降低高血栓负荷的STEMI患者的血栓负荷,恢复前向血流,提高冠状动脉微循环灌注水平,更好地发挥心肌保护作用;对于STEMI患者急诊介入治疗中,与单纯血栓抽吸相比,冠状动脉内靶向溶栓治疗能够明显缩小心肌梗死面积,改善心脏功能。

基于金纳米粒-白蛋白融合蛋白递送系统的非药物靶向溶栓策略

血栓是导致心肌梗塞、脑卒中等心血管疾病的主要因素之一。纤维蛋白溶酶类抗血栓药物虽然已被广泛应用于临床,但依然受到治疗窗口狭窄、半衰期短、易失活和因非靶向性造成的异常出血等不良反应的限制。因此,有效地将溶栓物质靶向输送到血栓部位并将不良反应降至最低至关重要。基于人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)在血液中的长循环效果和优异的载药特性,本研究运用基因工程技术在HSA的N末端融合一段能靶向血栓部位的功能肽(P-selectin binding peptide,PBP),经毕赤酵母表达并纯化得到具有血栓靶向功能的白蛋白融合蛋白。该融合蛋白包载金纳米粒子(gold nanoparticles,Au NPs)后能够形成均一稳定的纳米粒(PBP-HSA@Au),粒径为17.7±1.0 nm,zeta电位为-11.3±0.2 mV。细胞毒性和溶血实验证明PBP-HSA@Au生物相容性好,血小板靶向实验表明PBP的引入赋予了PBP-HSA@Au血栓靶向能力,近红外光(near infrared ray,NIR)照射后,PBP-HSA@Au能将光能快速转化为热能进而破坏纤维蛋白,表现出优异的溶栓效果。本研究设计的白蛋白融合蛋白递送系统为血栓治疗提供了一种精准、快速、非药物的治疗策略,该体系设计简单、生物相容性高,具有较强的临床应用性。研究涉及的所有动物实验均按照江南大学动物实验伦理委员会批准的方案执行[JN.No20230915S0301015(423)]。

靶向寡肽溶栓剂

对靶向寡肽溶栓剂P6A(ARPAK)及其衍生物、RGD肽及含有自由基伪肽的靶向溶栓作用进行综述。P6A是纤溶酶原的降解产物之一,具有增加血管通透性和溶栓作用。P6A的衍生物及P6A代谢产物具有更强的溶栓作用。血栓形成中,RGD序列是纤维蛋白原与血小板结合的关键序列。将RGD序列与溶栓寡肽结合,构成了具有靶向溶栓作用的杂交寡肽。在溶栓治疗中,血流再灌注生成的大量自由基会对组织造成损伤,将自由基清除剂与溶栓寡肽结合可得到具有溶栓和自由基清除双向功能的溶栓伪肽。因为溶栓处是产生大量自由基的部位,所以含自由基清除剂的溶栓伪肽可将自由基清除剂带到自由基堆积部位,体现了靶向内涵。

超声辅助溶栓的研究进展和应用价值

超声波不仅有溶栓的效果,还可以协助溶栓药物以增加溶栓的效果。超声波直接照射的溶栓作用和辅助溶栓药物的核心原理是空化效应。脉冲式低频、低功率超声照射的有效性可以满足常规溶栓需求,安全性较好。微泡超声造影剂与常规超声波照射联合,可以明显增强超声波的溶栓效果。微泡超声造影剂还可以在加工后用于靶向溶栓,在溶栓治疗中具有良好的应用前景。

HV12p-rPA血栓靶向脂质体的制备及体内溶栓实验

将通过蛋白质工程获得的抗凝溶栓双功能蛋白水蛭素12肽-瑞替普酶(HV12p-rPA)制备成靶向脂质体,并考察其体内溶栓效果。用薄膜分散-超声法制备HV12p-rPA脂质体,通过正交设计优化处方,采用碳二亚胺法偶联抗纤维蛋白原单克隆抗体(McAbSZ-65)制备HV12p-rPA靶向脂质体,采用大鼠颈总动脉血栓模型,考察HV12p-rPA靶向脂质体的体内溶栓效果。结果:最佳处方中HV12p-rPA脂质体的粒径为(142.45±1.20)nm,Zeta电位为(-30.63±0.48)mV,平均包封率为(91.59±1.39)%。靶向脂质体组(0.48±0.083)mg在相同剂量下(80k IU/kg)与PBS空白对照组(2.04±0.114)mg、游离HV12p-rPA组(1.2±0.100)mg和普通HV12p-rPA脂质体组(0.74±0.089)mg分别比较,其血栓干重明显减轻(P<0.05);靶向脂质体组与5倍剂量(400k IU/kg)的游离HV12p-rPA组(0.52±0.084)mg比较,其血栓干重较之偏轻(P>0.05)。制备出的靶向HV12p-rPA脂质体具有体内靶向溶栓效果。