靶向端粒酶反转录酶基因短发夹RNA载体的构建

背景:端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。目的:利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。方法:选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列,经退火成互补双链,与线性化pLentilox3.7.U6载体连接、转化大肠杆菌和序列测定,应用蛋白质印迹和免疫荧光技术,在体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞模型上验证构建的干扰载体抑制端粒酶反转录酶基因表达的效果。结果与结论:蛋白质印迹和免疫荧光检测结果表明,重组质粒干扰组中星形胶质细胞端粒酶反转录酶均呈低表达。结果证实,实验成功构建了针对大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA质粒表达载体,此载体能有效抑制体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶的表达。

短发夹RNA抑制外源荧光素酶在肝癌细胞中的表达

目的:构建含荧光素酶(luciferase,luc)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其在肝癌细胞Bel-7402中抑制外源荧光素酶的表达. 方法:设计的两条反向重复的多聚核苷酸序列,退火形成双链DNA,再与双酶切后的载体PGE-1连接,构建pshRNA-luc重组质粒,与荧光素酶基因表达质粒pCMV- luc共转染肝癌细胞株BEL-7402,检测其对荧光素酶表达的影响. 结果:PCR和DNA序列分析证实了重组质粒构建成功. pshRNA-luc对共转染的pCMV-luc中的荧光素酶具有明显的抑制作用,抑制率可达86%(P<0.01). 结论:构建的pshRNA-luc表达质粒能有效地抑制荧光素酶在肝癌细胞中的表达,为RNA干扰用于肿瘤的基因治疗打下基础.

慢病毒携带的短发夹RNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶基因表达的沉默作用

目的通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用。方法采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响。建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体。在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P<0.05)。HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞。在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达。在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长。结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用。

编码大鼠血管紧张素转换酶短发夹环RNA质粒的构建与鉴定

目的构建编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体质粒,为利用基因沉默技术从转录后水平进行高血压治疗的研究做准备。方法根据大鼠ACE mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计的相同,获得大鼠ACE的shRNA表达载体质粒。结论构建的编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体可进入哺乳动物细胞内表达短发夹RNA,经Dicer酶裂解成si R-NA并降解靶基因mRNA,而达到基因干扰的作用。为利用其进行自发性高血压大鼠的降压治疗研究奠定了基础。

针对乙酰肝素酶基因的短发夹RNA干扰载体的构建

目的构建对人乙酰肝素酶(hpa)基因有特异性抑制作用的短发夹RNA(shRNA)表达载体。方法根据GenBank数据库提供的hpa基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆。结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功。结论成功构建了5个靶向人hpa的shRNA表达载体,为进一步研究该载体转染MDA-MB-231细胞后对hpa基因的沉默效果奠定基础。

短发夹状RNA在人细胞诱导RNA干扰(英文)

背景与目的:RNA干扰是一种通过细胞内导入双链RNA而导致特异基因表达抑制的进化保守的转录后基因沉默现象,目前RNA干扰已成为研究基因功能的重要方法。本研究旨在利用DNA载体在细胞内产生短发夹状RNA(shorthairpinRNAs,shRNA),通过这些shRNA来诱导RNA干扰(RNAinterference,RNAi),为基因功能分析提供新的实验手段。方法:利用双荧光素酶报告系统来检测DNA载体在细胞内产生的shRNA诱导RNAi的效果。比较该载体产生的shRNA在不同条件下的RNA干扰效果。结果:DNA载体产生的shRNA在人细胞能诱导RNAi,序列特异地抑制基因表达。抑制效果与所选基因靶位点高度相关。结论:shRNA在人细胞能诱导RNA干扰,序列特异地抑制基因表达,这一方法可用于基因功能分析。

靶向磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响

目的探讨靶向持续抑制磷酸二酯酶5(PDE5)的短发夹RNA(shRNA)[PDE5 shRNA]重组腺病毒载体对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响。方法结扎小鼠左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型,随机分为实验组10例,将携带有PDE5 shRNA重组腺病毒载体注射到心肌梗死区及周边区和对照组10例,将没有插入PDE5 shRNA的普通腺病毒载体注射到心肌梗死区及周边区。1周后,进行免疫组化和原位末端标记分析(TUNEL)检测梗死及梗死周边细胞凋亡情况,酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测环磷酸鸟苷(c GMP)和蛋白激酶G(PKG)的表达,蛋白印迹分析检测各组PDE5的表达情况。结果心梗1周后,和对照组相比较,实验组小鼠梗死区及梗死周围区域细胞凋亡明显减少(P<0.05),梗死周边心肌细胞凋亡明显减少(P<0.05),实验组小鼠心肌PDE5表达明显减少,c GMP和PKG表达明显上调(P<0.05)。结论 PDE5 shRNA的干预可以明显减少心肌梗死及梗死周边区细胞凋亡和非梗死区心肌细胞凋亡,可能与上调c GMP和PKG的表达密切相关。

靶向磷酸二酯酶5的短发夹RNA导入后的间充质干细胞对心肌梗死后心室重构的影响

目的探讨磷酸二酯酶5(PDE5)短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒载体[PDE5shRNA]导入后的间充质干细胞(MSCs)对心肌梗死(MI)后心室重构的影响。方法构建PDE5shRNA转染的MSCs,结扎大鼠冠状动脉左前降支(LAD)建立MI模型,随机分成假手术组(n=4,只穿线不结扎LAD);模型组(n=4,穿线并结扎LAD建立MI模型);MSCs-Ad-Null组(n=4,MI模型基础上注射经空白腺病毒载体转染的MSCs);MSCs-shRNA-PDE5组(n=4,MI模型基础上注射经PDE5shRNA转染的MSCs)。建模后,每组各取1只大鼠取心脏进行病理检验,用于判断造模成功,余大鼠入组观察相关指标。4周后心脏超声检测各组大鼠心功能指标[左室收缩末期内径(LVESd)、左室舒张末期内径(LVEDd)、左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(FS)]。HE染色观察心肌病理改变,Masson染色观察心肌纤维化情况,qRT-PCR方法检测大鼠心肌中PDE5、环磷酸鸟苷(cGMP)和蛋白激酶(PKG)mRNA的相对表达量。结果实验4周后,(1)心脏超声示:MI各组大鼠心室腔明显扩张,左心室心肌收缩功能明显降低。与假手术组相比,MI各组大鼠的LVESd、LVEDd增大,LVEF、FS降低(P均<0.05);与模型组相比,MSCs-Ad-Null组、MSCs-shRNA-PDE5组的LVESd、LVEDd降低,MSCs-shRNA-PDE5组的LVEF、FS升高(P均<0.05)。(2)心肌病理结果示:与模型组比较,MSCs-Ad-Null组、MSCs-shRNA-PDE5组的心肌病理改变逐渐减轻。(3)qRT-PCR法结果示:与假手术组相比,模型组、MSCs-Ad-Null组PDE5 mRNA表达升高、cGMP和PKG mRNA表达降低(P均<0.05);按模型组→MSCs-Ad-Null组→MSCs-shRNA-PDE5组之序,PDE5 mRNA表达递降,cGMP、PKG mRNA表达递升(P<0.05,P<0.01)。结论PDE5shRNA导入后的MSCs可改善MI后心功能,减轻心肌病理改变及心肌纤维化,同时通过调节PDE5、cGMP、PKG的表达,发挥抑制心室重构的作用。

抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体对阿霉素所致心肌病小鼠的保护作用

目的研究靶向磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂短发夹RNA(shRNA)[PDE5shRNA]重组腺病毒载体对阿霉素所致心肌病的保护作用。方法用一次性腹腔内注射阿霉素15 mg·kg^(-1)诱导小鼠阿霉素心肌病模型。按照体重将小鼠随机分为3组:模型组(n=16);实验组(阿霉素+PDE5shRNA,n=16)在造模后,一次性心肌多部位注射PDE5shRNA重组腺病毒载体(1×1010粒子/鼠);正常组(n=10):一次性腹腔注射等量0.9%NaCl。给药2周后,对存活小鼠进行心脏超声检查,检测左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(%FS)。以苏木精-伊红(HE)染色法测量心肌细胞直径;以Masson氏染色法测量心肌纤维化面积;以酶联免疫吸附法检测各组小鼠心肌组织中环磷酸鸟苷(c GMP)和蛋白激酶(PKG)含量,以免疫蛋白印迹法检测各组小鼠心肌组织中肌凝蛋白重链(MHC)、肌钙蛋白I(Tropnin1)以及肌间蛋白(Desmin)的表达情况。结果给药后2周后,实验组与模型组的LVESD分别是(2.13±0.10),(2.75±0.12)mm,这2组的LVEDD分别是(2.98±0.10),(3.42±0.12)mm,这2组的LVEF分别是(58.74±1.40)%,(48.53±1.50)%,这2组的%FS分别为(28.52±2.10)%,(19.59±1.67)%,2组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。这2组的心肌细胞直径分别是(14.68±0.42),(13.75±0.38)μm,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组与模型组的心肌纤维化面积比率分别为(2.28±0.20)%,(5.10±0.35)%,差异有统计学意义(P<0.05)。这2组的c GMP含量分别是(0.23±0.02),(0.06±0.01)pg·mg^(-1),这2组的PKG含量分别是(0.21±0.02),(0.10±0.01)pg·mg^(-1),2组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组与模型组的MHC表达分别是1.55±0.16,1.15±0.22,这2组的Tropnin1表达分别是1.32±0.08,0.88±0.08,这2组的Desmin表达分别是1.33±0.51,1.10±0.04,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 PDE5shRNA可能通过激活c GMP/PKG通路减轻阿霉素所致心肌细胞萎缩和心肌纤维化,明显改善左心室功能障碍。

RNA干扰端粒酶反转录酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

背景:端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)对端粒酶活化起重要作用,但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的:构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的慢病毒载体,并观察其对端粒酶反转录酶表达的抑制作用。方法:通过设计合成出shRNA-TERT序列,经聚合酶链反应扩增后定向连接到pLentilox3.7U6载体上构建重组质粒,经转染DH5α细胞筛选阳性菌落后行测序鉴定。将pLentilox3.7U6-TERT重组质粒转染293T细胞,包装产生重组慢病毒Le-TERT并测定其滴度,再用Le-TERT感染大鼠脊髓星形胶质细胞,实时定量-聚合酶链反应检测各细胞株TERT基因表达水平,并利用Western blot和免疫荧光分别检测TERT蛋白的表达。结果与结论:基因测序鉴定证明,pLentilox3.7U6-TERT重组质粒构建成功,并成功包装慢病毒。实时定量PCR、Western blot和免疫荧光检测结果表明,Le-TERT转染星形胶质细胞4 d后,对TERT mRNA的干扰效率可达(63.98±2.6)%,Le-TERT在转然后的星形胶质细胞中呈低表达。结果证实,实验构建的重组表达载体pLentilox3.7U6-TERT能够产生有效滴度的慢病毒,感染大鼠脊髓星形胶质细胞后,该载体可以有效抑制TERT的表达。

人端粒酶逆转录酶基因RNAi表达载体的构建、鉴定

目的构建端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法化学合成能编码针对hTERT基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6 shRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)启动子的下游,构建重组RNAi质粒pSliencer-hTERT。结果经酶切电泳及测序分析证实,目的序列成功插入到预计位点。结论已成功构建pSliencer-hTERT载体,为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础。

PPARγ基因靶向shRNA真核表达载体的构建及表达

目的研究短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)真核表达载体在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendo-thelial cell,HUVECs)中对人过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达的抑制作用。方法设计3条靶向PPARγ的shRNA,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中构建重组载体,经酶切鉴定和测序确认后,将3个重组表达载体转染到HUVECs,利用Western blot检测并筛选出抑制效果最好的重组表达载体。结果通过酶切鉴定和测序分析,靶向PPARγ的3个pGPU6/GFP/Neo-shR-NA重组载体构建成功,Western blot结果显示pGPU6/GFP/NeoshRNAPPARγ3可有效抑制高糖诱导HUVECs中PPARγ基因的表达,抑制率为63.2%。结论 PPARγ基因靶向shRNA真核表达载体构建成功,且能有效抑制HUVECs中PPARγ基因的表达。

抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体对缺氧缺糖乳鼠心肌细胞的保护作用

目的观察磷酸二酯酶5(PDE5)shRNA对缺氧缺糖条件下乳鼠心肌细胞的保护作用。方法培养新生C57BL/6J小鼠心肌细胞,通过缺氧缺糖建立小鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤模型。随机分2组:实验组(shPDE5)通过构建PDE5 shRNA,将PDE5 shRNA转染心肌细胞;对照组(Null):将普通腺病毒载体转染心肌细胞。用原位末端标记分析(TUNEL)检测2组细胞凋亡情况;免疫蛋白印迹检测PDE5蛋白的表达;用酶联免疫吸附法测定各组心肌细胞cGMP和PKG的水平。结果与对照组比较,实验组PDE5表达明显下降,cGMP和PKG的活性明显上调(P<0.05);实验组细胞凋亡数明显减少(P<0.05)。结论 PDE5 shRNA可明显拮抗缺氧缺糖诱导的心肌细胞凋亡,可能与PDE5 shRNA持续抑制心肌细胞PDE5基因表达、显著上调cGMP和PKG活性有关。

血红素合成酶特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定

目的利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-б-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定。方法根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列,分别克隆至质粒载体pGCsi-U6/Neo/DsRed中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定eALAS基因的真核表达载体pEGFP-N1-eALAS;将3种pGCsi-U6/Neo/DsRed/eALAS-shRNA分别与pEGFP-N1-eALAS共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测pEGFP-N1-eALAS融合蛋白的荧光强度,选择最佳RNA干扰(RNAi)靶点,并在基因和蛋白水平检测eALAS的表达,进一步验证最佳RNAi靶点的敲减效率。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,最佳RNAi靶点敲减效率达72.45%,eALAS在基因和蛋白水平显著下降。结论成功构建了eALAS特异性RNAi表达载体,为下一步研究铁效应元件eALAS在铁代谢异常所致红系统疾病的机制奠定了基础。

乙酰肝素酶shRNA双基因共表达真核载体的构建和筛选

目的：构建并筛选有效的、编码2条shRNA的乙酰肝素酶（Hpa）特异性基因真核表达载体．方法：分别设计、化学合成6对寡核苷酸单链，经退火、连接和磷酸化后得到Hpa shRNA双链，将两两随机问隔4～8个碱基后定向克隆入带有各自的U6启动子和终止码、共同的绿色荧光蛋白（green fluoreseent protein，EGFP）基因和Neo基因的pGenesil-1中，构建3条含两段Hpa基因shRNA的pGenesil-1-Hpa—shRNA真核表达载体，转染卵巢癌细胞株SKOV3，流式细胞仪和荧光显微镜下观察转染效率，免疫组化分析Hpa蛋白表达．结果：酶切与测序证实pGenesil-1-HPSE—shRNA构建成功，无任何碱基突变，3组质粒转染细胞均有Hpa表达的变化，3种不同shRNA质粒转染细胞后Hpa蛋白表达有明显差别．结论：构建并筛选了针对Hpa特异性的双基因shRNA真核表达载体pGenesil-1-Hpa-shRNA．

靶向XIAP的shRNA重组质粒的构建

目的:设计以X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)为靶向的shRNA,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制XIAP表达的效应,筛选RNA干扰作用最强的shRNA片段.方法:设计4对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体psiRNA-Hhneo-XIAP,通过脂质体介导的方法将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2细胞中.采用逆转录酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)方法检测XIAP的mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达差异,以判断各shRNA的干扰效应.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒.经质粒测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,XIAP基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应最强.shRNA作用48h后,对HepG2细胞中XIAP mRNA和蛋白的抑制率与3,4号重组质粒相比,均具有显著性差异(mRNA:94.5% vs 81.5%,82.6%,均P<0.01:蛋白:92.6% vs 80.7%,82.9%,均P<0.01).结论:成功构建了携带以XIAP为靶向的shRNA的重组质粒,其对肝癌细胞内XIAP的表达具有显著抑制效应.<正>X染色体连锁凋亡抑制蛋白;;短发夹状RNA;;肝癌;;逆转录聚合酶链式反应;;

磷酸二酯酶5的短发夹RNA对肌细胞纤维化的作用抑制研究

目的通过短发夹RNA(shRNA)延长对磷酸二酯酶5(PDE5)的抑制作用,探索shRNA-PDE5对细胞存活率的影响以及对心肌梗死后心功能及心室重构的作用及其机制。方法(1)细胞实验:分离SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),将Ad-shRNA-PDE5和Ad-Null分别感染体外培养的MSCs,嘌呤霉素筛选稳定表达它们的细胞株,分为shPDE5组和空白对照载体(Ad-Null)组,另设正常组。缺口末端标记法染色检测各组缺氧缺糖(OGD)诱导的稳转MSCs细胞凋亡情况。(2)动物实验:通过结扎左冠状动脉前降支方法建立雄性SD大鼠心肌梗死模型。按照体重将大鼠随机分成6组:假手术组、模型组、对照组、第1转染组、第2转染组和第3转染组,在结扎前降支后,立即在心肌梗死区及周边区4个点各注射经不同处理的MSCs细胞。用蛋白质印迹法检测大鼠心肌中转化生长因子-β(TGF-β)和成纤维细胞生长因子2(FGF2)的蛋白表达水平(光密度值);Masson染色检测心肌梗死区及周边区组织的纤维化情况。结果(1)shPDE5组、Ad-Null组和正常组的凋亡细胞数分别为(6.00±1.00),(14.33±1.52)和(5.33±1.52)个,shPDE5组与Ad-Null组比较,凋亡细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)假手术组、模型组、对照组、第1转染组、第2转染组和第3转染组的FGF2蛋白表达水平分别为0.11±0.02,0.22±0.05,0.27±0.08,0.28±0.04,0.33±0.05和0.50±0.03;这6组的TGF-β蛋白表达水平分别为0.18±0.02,0.91±0.03,0.72±0.01,0.72±0.03,0.48±0.02和0.27±0.09。第2转染组、第3转染组与假手术组、模型组、对照组和第1转染组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、第1转染组、第2转染组和第3转染组与模型组比较,大鼠梗死周边区心肌组织细胞纤维化程度依次减弱。结论shRNA-PDE5可通过减少细胞凋亡,调节相关因子的表达,抑制心肌细胞纤维化,从而改善心功能。

靶向蛋白激酶B的短发夹RNA抑制人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

RNA干扰是由双链RNA介导的序列特异性的转录后基因沉默现象，通过识别与其序列相同的mRNA来使特定基因在转录后被降解。RNA干扰技术具有很高的转录后沉默效率和特异性，为基因治疗等研究领域提供了一个新的手段。本研究采用Supersilencing^TM质粒对人肝癌裸鼠移植瘤进行治疗，以探讨对肝癌行基因治疗的新方法。

MicroRNA的结构、生物合成及功能

MicroRNA是真核生物中一类长度约为22个核苷酸的参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA。成熟的microRNA是由较长的可折叠形成发夹结构的前体转录物经过Dicer酶或类似Dicer酶的内切核酸酶加工而来。MicroRNA基因存在于基因组的基因间隔区或者内含子当中。这些小分子RNA通过碱基配对与靶mRNA序列的3′非翻译区或编码区结合以调控基因的表达。它们呈现出组织特异性或发育阶段特异性表达特征。MicroRNA具有调节细胞增殖、死亡、神经细胞分化、个体发育等生物学功能。

靶向血管内皮生长因子基因的短发夹状RNA对胃癌细胞的抑制作用

RNA干扰已成为当前肿瘤基因治疗的新策略，以前我们曾报道了靶向血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA有效抑制胃癌细胞VEGF mRNA表达，本实验旨在探讨该载体在抑制了VEG-F mRNA表达后，对人胃癌细胞体内外抑制作用。