携载CAⅨ多肽的靶向纳米泡动态监测肾癌移植瘤形成过程的实验研究

目的应用靶向纳米泡动态监测裸鼠肾癌移植瘤的形成过程,阐明靶向纳米泡在肿瘤形成过程中的成像特征和规律,探索靶向纳米泡诊断微小肿瘤的能力。方法建立人肾透明细胞癌皮下移植瘤裸鼠模型,于种植后第1天行二维超声检查,于第7天及第14天分别行二维、彩色多普勒血流显像(color doppler flow imaging,CDFI)和超声造影检查,定量分析移植瘤组织和癌旁组织中靶向纳米泡、空白纳米泡和微米泡的显像特点。应用免疫组织化学染色鉴定移植瘤组织和癌旁组织中碳酸酐酶Ⅸ(carbonic anhydraseⅨ,CAⅨ)的表达情况。结果种植后第7天,二维超声和超声造影显示,种植部位形成环状移植瘤组织,中间为未吸收的细胞悬液。种植后第14天,种植部位基本形成实性皮下移植瘤组织,细胞悬液完全吸收。二维超声结合超声造影可发现直径<1.5 mm的微小肿瘤,且靶向纳米泡在显像峰值强度、峰值降半时间、峰值降半时曲线下面积均优于空白纳米泡和微米泡(P<0.05),免疫组织化学染色证实移植瘤组织内高表达CAⅨ,而癌旁组织未表达CAⅨ。结论超声造影能有效监测移植瘤形成的过程,靶向纳米泡能使裸鼠肾癌皮下移植瘤组织特异性显像,有利于肾癌的早期诊断。

携双抗体纳米微泡对卵巢癌细胞增殖活性的影响

背景:免疫治疗可通过多种途径增强抗肿瘤免疫反应,联合免疫治疗是一个更好的选择。超声靶向微泡破坏技术可将药物、基因、抗体和细胞因子直接输送到免疫细胞的细胞质中,进一步增强免疫应答。然而,通过超声靶向微泡破坏技术将携趋化因子受体4抗体和细胞程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡应用于卵巢癌的治疗尚未见报道。目的:探讨超声辐照携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响。方法:对IOSE-80正常卵巢上皮细胞及SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞进行培养及扩增,采用双标记荧光免疫法对3种细胞中的趋化因子受体4和细胞程序性死亡配体1蛋白进行共定位,蛋白质印迹法检测3种细胞中趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白相对表达量,并筛选出实验细胞。制备携不同配体的靶向纳米微泡后,即单纯的纳米微泡、携趋化因子受体4抗体的纳米微泡、携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡。取对数生长期的SKOV3卵巢癌细胞,分6组处理:A组加入McCoy’s 5A培养基,B组加入含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,C组加入单纯的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,D组加入携趋化因子受体4抗体的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,E组加入携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,F组加入单纯的纳米微泡溶液,超声辐照120 s,孵育48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,通过伤口愈合实验检测B-E组细胞的愈合迁移能力。结果与结论:①免疫荧光染色显示,3种细胞均可表达趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白;蛋白质印迹法检测显示,SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞中的趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白表达量均高于IOSE-80正常卵巢上皮细胞(P<0.05);②CCK-8检测结果显示,B组细胞存活率高于A组(P<0.05),F组细胞存活率低于A组(P<0.05),B-E组细胞存活率逐渐降低,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);③伤口愈合实验显示,B-E组细胞愈合率逐渐降低,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,超声靶向微泡破坏技术联合携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡可显著抑制卵巢癌细胞的增殖迁移。

携载AMD070的靶向超声纳米泡的构建及其抑制乳腺癌细胞生长的效能评估

目的构建携载CXCR4小分子拮抗剂AMD070的诊疗一体化超声靶向纳米泡,观察其在体外与乳腺癌细胞的靶向结合能力,初步探讨靶向纳米泡联合超声靶向纳米微泡破坏(ultrasound targeted nano-microbubble destruction,UTMD)对乳腺癌细胞生长的抑制作用。方法通过碳二亚胺法和机械振荡法制备携载AMD070的靶向纳米泡,检测其物理特性,观察靶向纳米泡与乳腺癌细胞的特异性结合能力,CCK-8法筛选UTMD参数并评估在体外靶向纳米泡联合UTMD对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果携载AMD070的超声靶向纳米泡粒径(481.72±26.17)nm,电位(-7.14±0.31)mV,其中AMD070与脂质纳米泡有效连接,体外结合实验显示靶向纳米泡相较于空白纳米泡对CXCR4阳性乳腺癌细胞有更强的亲和力,靶向纳米泡联合优化的UTMD能明显抑制CXCR4阳性的乳腺癌细胞生长。结论靶向纳米泡能与CXCR4阳性表达的乳腺癌细胞特异性结合,并在优化后UTMD的配合下显著抑制CXCR4阳性乳腺癌细胞的生长。

靶向纳米级脂质微泡超声造影剂的研究进展

靶向纳米级脂质微泡作为一种超声造影剂,已在超声成像、生物医药、基因转染等方面展示出重要的应用前景。靶向纳米级脂质微泡能够特异性的结合靶器官或靶组织,微泡聚集在靶器官或靶组织,从而提高靶器官或靶组织的显像分辨率,为早期精准定位定性诊断提供可能。靶向纳米级脂质微泡也可携带基因、药物穿过内皮间隙结合靶器官或靶组织,就能在细胞分子水平上进行基因或者药物治疗,从而增强治疗效果、减轻不良反应。

超声微泡造影剂在膀胱肿瘤中的研究进展

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤。目前膀胱肿瘤诊断、治疗及预后主要通过膀胱镜检查、经尿道膀胱肿瘤电切术(TURB-t)、术后化疗及长期随访等方法而实现。因此,如何精准进行术前定位定性诊断、术中操作以及术后治疗是降低肿瘤复发率甚至彻底根治的关键。靶向纳米微泡造影剂具有器官或组织靶向性、血管穿透性及显像聚集性的特点。膀胱肿瘤靶向纳米微泡造影剂能够特异性地结合肿瘤组织,并在肿瘤组织聚集,从而提高膀胱肿瘤的显像分辨率,为膀胱肿瘤早期精准定位定性诊断提供可能。膀胱肿瘤靶向纳米微泡造影剂还可携带基因、药物穿过内皮间隙结合肿瘤组织并且诱导释放,从而使得在分子水平对膀胱肿瘤进行治疗成为可能,最终提高治疗水平、降低药物不良反应。

载顺铂靶向纳米微泡对小细胞肺癌增殖抑制作用的实验研究

目的制备载顺铂抗前胃泌素释放肽(ProGRP)单抗靶向纳米微泡,并研究其对小细胞肺癌(SCLC)增殖抑制效果及抗癌的分子机制。方法应用薄膜水化法制备载顺铂抗ProGRP单抗靶向纳米微泡,研究其理化性质;建立10只SCLC裸鼠皮下移植瘤模型,以空白纳米微泡作对照,分析载顺铂靶向纳米微泡的超声分子靶向显影效果;另建24只SCLC荷瘤裸鼠模型,随机分为4组:空白纳米微泡组、顺铂组、载顺铂纳米微泡组、载顺铂靶向纳米微泡组,计算抑瘤率。采用CCK8法检测其对SCLC增殖的影响;运用RT-PCR和Western blotting分析4个处理组SCLC增殖相关基因P53、Rb、c-myc的mRNA和蛋白水平变化。结果成功制备载顺铂抗ProGRP单抗靶向纳米微泡,粒径为(467.3±42.3)nm,结构稳定;载顺铂靶向纳米微泡在SCLC裸鼠移植瘤体内具有良好的超声分子显影效果,可明显抑制SCLC增殖;RT-PCR和Western blotting显示,与对照组相比,载顺铂靶向纳米微泡组的增殖相关基因P53、Rb的mRNA和蛋白水平显著上调,c-myc的mRNA和蛋白水平显著下调(均P<0.05)。结论载顺铂靶向纳米微泡对SCLC具有抑制增殖的作用,可作为一种治疗SCLC的新型潜在靶向药物。

动脉易损斑块与超声分子显像

新生血管的形成与动脉粥样斑块稳定性的变化有着密切的关系。KDR作为最重要的血管内皮生长因子(VEGF)的主要受体,高表达于易损斑块新生血管内皮细胞。构建具有高穿透力的纳米级脂膜靶向超声分子显像剂,利用高分辨率的超声生物显微多普勒技术有望有效地监测动脉易损斑块的发生和发展,为动脉粥样硬化的防治和寻找新的治疗靶点奠定基础。