二硫键稳定的抗肝癌人源化scFv-hTNFα突变体融合基因在大肠杆菌中表达

目的 提高抗肝癌抗体靶向人肿瘤坏死因子(hscFv2 5-hTNFα)的稳定性和杀伤活性 ,并探讨该新型靶向细胞因子在大肠杆菌中的可溶性表达。方法 以引物PCR法和重叠延伸PCR法 ,对人源化抗肝癌hscFv2 5及hTNFα基因进行定点突变 ,构建重组表达载体 pGEX -hFvT ,并以IPTG在大肠杆菌中诱导表达。用免疫组化染色和MTT比色法 ,分别检测重组蛋白的抗体和hTNFα突变体的双重活性。结果 重组基因在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。表达产物具有抗体和hTNFα突变体的双重活性 ,重组蛋白的稳定性得到大幅度提高 ,抗体活性于 4℃放置 3个月活性无明显下降 ,抗肿瘤活性较天然hTNFα高 4倍。结论 重组基因在大肠杆菌中获得了高效功能性表达 ;重组蛋白稳定性及抗肿瘤活性得到大幅度提高 。

二硫键稳定的抗肝癌人源化Fv-突变体人TNFα融合基因的构建与表达

利用引物PCR和重叠延伸PCR法,将抗肝癌人源化抗体hscFv25重链可变区和轻链可变区各定点突变出一个半胱氨酸,将hTNFα改造成高抗肿瘤活性的突变体,分别原核表达重链可变区突变体、轻链可变区突变体-突变体hTNFα融合基因,然后将两种表达的产物混合进行复性,目的获得具有高稳定性和高抗肿瘤活性的抗肝癌靶向细胞因子。结果重链可变区突变体和轻链可变区突变体-突变体hTNFα融合基因在大肠杆菌中均获得高效表达表达产物以包涵体形式存在,混合复性结果未获得活性产物。

类风湿关节炎相关细胞因子及药物研究进展

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种导致关节破坏的慢性系统性自身免疫炎症性疾病,在关节滑膜中的免疫调节破坏、关节的进行性破坏、导致软骨和骨侵蚀的严重损伤是这种疾病的主要特征。细胞因子在其发病机制中起关键作用,细胞因子网络的不平衡可能诱导和维持炎症以及相应的组织损伤,从而提供治疗的靶点。RA中涉及许多细胞因子,文章综述了一些关键细胞因子,包括肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素家族(IL-6、IL-1、IL-17和IL-35)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。靶向TNF-α和IL-6都是公认的RA治疗方法,并且不断有新的生物制剂正在进入市场。IL-1是细胞因子网络中复杂的细胞因子,IL-1受体拮抗剂的临床治疗效果不如TNF-α抑制剂。IL-17、GM-CSF和IL-35是代表新靶标的细胞因子,其抑制剂作为RA治疗开发的第二代生物制剂。

葡萄膜炎分子机制及其生物治疗最新进展

葡萄膜炎是一种眼内炎症性疾病,其病因为传染性或自身免疫性,是世界可预防盲的主要原因之一。其病理改变为眼睛中持续产生炎症细胞、具有细胞毒性的细胞因子和其他免疫调节蛋白。该病最主要的治疗目标是下调免疫反应,减轻炎症反应,保持眼部结构的完整性,避免眼部永久性损伤。目前的治疗方法主要是在局部或全身皮质类固醇使用的基础上联合或不联合免疫调节药物。这些药物有严重的不良反应,所以需要我们进一步研究开发毒性较低的更具有针对性的葡萄膜炎治疗方式。本综述描述了葡萄膜炎的病理生理学,调节葡萄膜炎发生和发展的分子机制,并总结了治疗这类潜在致盲性疾病的新策略中的新兴生物制剂。

04075 2006年EULAR为自身免疫性疾病市场提供丰富的新药

2006年在荷兰阿姆斯特丹召开的欧洲抗风湿病联盟（EULAR）会议上，全球风湿病及自身免疫性疾病领域领先的制药公司与研究小组讨论了在诊断和治疗方面的最新进展，出现自身免疫性疾病更多使用靶向细胞因子的生物药的倾向。

二硫键稳定的抗肝癌人源化单链抗体-突变体人论著TNFα融合基因在CHO(dhf)细胞中的表达

目的 :提高抗肝癌靶向人肿瘤坏死因子 (hScFv2 5 hTNFα)的稳定性和杀伤活性 ,构建二硫键稳定的抗肝癌人源化单链抗体 突变体人TNFα融合基因 (ds ScFv hTNFα) ,并在CHO细胞中表达。方法 :常规构建ds ScFv hTNFα融合基因 ,并克隆入真核表达载体pCI(dhfr1) ,磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠卵巢细胞株 (CHO dhfr ) ,甲氨蝶呤 (MTX)高压筛选高表达细胞株 ,免疫荧光染色和MTT法检测重组蛋白的抗体和突变体hTNFα的双重活性。结果 :目的基因在CHO(dhfr )中获得了表达 ,表达产物具有抗体和突变体hTNFα的双重活性 ,且稳定性得到大幅度提高 ,达到 4℃放置 4个月活性无明显下降。结论 :抗肝癌人源化ds ScFv hTNFα融合基因在CHO细胞中获得功能性表达 ,为进一步的临床应用研究奠定了基础。