靶向血栓蛋白(RGD)_3-tTF与肿瘤血管标志物α_vβ_3特异性结合能力的研究

背景与目的:研究靶向血栓蛋白(RGD)3-tTF融合蛋白结合肿瘤血管标志物整合素αvβ3的能力,旨在探讨融合蛋白的RGD多肽数量和化学结构与其结合整合素αvβ3能力的关系及其意义。材料与方法:用3个串联的RGD多肽与截短组织因子(truncated tissue factor,tTF)合成融合基因(RGD)3-tTF,表达于大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),用镍柱纯化融合蛋白。通过凝血实验检测融合蛋白tTF组分的活性,运用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)分析其特异性结合整合素αvβ3的能力,并与RGD-tTF融合蛋白的活性进行比较。结果:(RGD)3-tTF与RGD-tTF融合蛋白凝血活性相似(F=0.019,P>0.05),但(RGD)3-tTF融合蛋白特异性结合整合素αvβ3的能力明显升高(F=140.17,P<0.01)。当融合蛋白浓度为0.24μmol/L时,(RGD)3-tTF融合蛋白的OD405nm值是RGD-tTF融合蛋白的1.32倍(1.25/0.95)。结论:(RGD)3-tTF融合蛋白带有两个二硫键和3个RGD多肽,保留了组织因子凝血活性的同时,提高了与整合素αvβ3特异性结合的能力,为开展选择性肿瘤血管血栓靶向治疗的动物实验奠定了基础。