靶向超声微泡介导VEGF基因转染对薄型子宫ER的影响研究

目的:研究靶向超声微泡介导血管内皮生长因子(VEGF)基因转染对薄型子宫内膜容受性(ER)的影响。方法:选择40只性成熟但未交配的具有动情周期的雌性SD大鼠进行研究。将其随机分为四组,包括正常组10只,模型组10只,阴性对照组10只,治疗组10只。其中模型组、阴性对照组及治疗组大鼠均自宫角处注入95%无水乙醇贮留5 min制备薄型子宫模型,正常组自宫角处注入生理盐水,贮留5 min。模型组予以生理盐水注射治疗,阴性对照组予以超声微泡+抗体(不含基因)治疗,治疗组则以靶向超声微泡介导VEGF基因转染治疗。比较四组大鼠子宫内膜厚度及腺体数量,子宫内膜血流灌注,子宫内膜VEGF及白血病抑制因子(LIF)水平。结果:正常组子宫内膜厚度及腺体数量均高于模型组、阴性对照组及治疗组,治疗组子宫内膜厚度及腺体数量均高于模型组、阴性对照组(P<0.05)。正常组阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、脐动脉收缩压与舒张压比值(S/D)均低于模型组、阴性对照组及治疗组,治疗组RI、PI、S/D均低于模型组、阴性对照组(P<0.05)。正常组子宫内膜VEGF、LIF水平均高于模型组、阴性对照组及治疗组,治疗组子宫内膜VEGF、LIF水平均高于模型组、阴性对照组(P<0.05)。结论:靶向超声微泡介导VEGF基因转染可有效修复子宫内膜,改善ER,值得临床重点关注。

靶向超声造影技术及其在心血管疾病中的应用

靶向超声造影技术是通过将拥有组织特异性的靶标分子连接到超声造影剂表面,继而使超声造影剂聚集在靶器官或组织处以增强声学信号,实现定性和定量分析活体组织细胞、分子水平的生理及病理变化过程或局部靶向治疗的目的,为疾病的早期诊断和治疗提供新方法。系统阐述超声造影技术、靶向超声造影剂的制备、种类和特征,并对超声造影剂在血栓溶解及心肌梗死、动脉粥样硬化等心血管疾病中的应用进行综述以期在心脏结构和功能评价、疾病诊断、疾病监测及靶向治疗等方面发挥更大的作用。

亲和素桥连构建携抗P-选择素单抗靶向超声微泡及体外荧光鉴定

目的体外荧光方法鉴定生物素-亲和素-生物素(BSB)桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-BSBp)的可靠性。方法不同荧光标记物分别标记MB-BSBp的不同部位,观测微泡荧光强度(0、1、2和3级),以普通脂质超声微泡(MB)作对照。结果加入FITC荧光亲和素孵育,生物素化脂质微泡(MB-B)呈现明亮的绿色荧光(3级),而MB无荧光显示(0级)。以两个浓度梯度(1∶4和1∶16)的DTAF荧光二抗(抗抗P-选择素单抗抗体)标记MB、MB-B、MB-BS和MB-BSBp,MB-BSBp在两个浓度梯度下均发出明亮的绿色荧光(3级);而MB-B、MB-BS仅在1∶4时显示微弱的绿色荧光(1级),MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级)。结论抗P-选择素单抗通过亲和素桥连有效装配在MB-B表面,体外荧光法是鉴定靶向微泡配体连接可靠性的简便方法。

在生理血流条件下靶向超声微泡对P-选择素的靶向黏附效能

目的平行板流动腔评价在生理血流条件下携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡（MBp）的靶向黏附效能。方法采用＂亲和素-生物素＂桥接法构建MBp;在3种浓度（10、100和1000ng/ml）小鼠P-选择素Fc段（PSFc）包被的平行板流动腔和固定剪切应力下,以及最大包被浓度和不同剪切应力（0.2-1.7dyn/cm^2）下分别检测MBp的每分钟结合数量（结合率）,以抗小鼠P-选择素单抗封闭组和空白组为对照。在3种包被浓度下检测MBp达半数解离的剪切应力。所有分组样本数均为3。结果两对照组均未见有明显的MBp结合。实验组MBp结合率随包被浓度的增高而增加（P〈0.05）,然而与剪切应力呈现双向性（P〈0.05）。MBp达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大（P〈0.05）。结论MBp在生理条件下可与PSFc特异有效地结合,体外对靶向超声微泡的靶向黏附效能评价将有助于判定超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境条件。

靶向超声造影剂在癌症诊疗中的应用前景

随着癌症发病率和死亡率的持续增加,靶向超声造影剂介导的超声诊断技术和治疗技术对癌症的二级预防和三级预防具有积极影响。尽管靶向超声造影剂目前仍然处于临床前实验阶段,但是已经初步展现出其突出的应用价值。它能够在癌症鉴别、疗效监测以及作为基因和药物载体介导癌症靶向治疗等方面发挥重要作用,最终得以实现癌症诊断治疗一体化。近期,国外研究还证实靶向超声造影剂具有抗肿瘤血管作用从而增强放疗效果。靶向超声造影剂介导的分子成像、精准化疗、靶向基因治疗、放疗增敏是实现"精准医疗"的重要支持技术,总结近年来靶向超声造影剂在肿瘤疾病中的研究进展和应用潜力能够进一步推进其向临床应用的转化。

动脉血栓靶向超声显像的体内实验研究

目的 探讨白蛋白血栓靶向超声造影剂体内增强动脉血栓超声显像的效果。方法 采用FeCl3 溶液诱发 3 0只健康新西兰大白兔腹主动脉非梗阻性新鲜血栓形成;经耳缘静脉团注 0.0 4ml/kg的白蛋白超声造影剂进行超声造影,分为靶向组(2 0只)和非靶向组(10只);采用视觉观察评价血栓显像增强效果。结果 2 9只(2 9/3 0 )兔模型建立成功;造影后视觉观察,靶向组 18例达到 2级增强效果,1例为 1级增强效果,1例死亡;非靶向组仅 2例达到 1级增强效果,两组比较差异显著(P <0.0 1)。结论 白蛋白血栓靶向超声造影剂可显著增强兔腹主动脉内新鲜血栓超声显像效果。

针刺结合靶向超声药物导入治疗脑卒中后肩-手综合征的临床观察

目的:观察针刺结合靶向超声药物导入疗法对脑卒中后肩-手综合征(SHS)的临床疗效。方法:脑卒中合并SHS的患者85例,分为观察组42例和对照组43例。对照组给予常规康复训练加针刺治疗,观察组在此基础上辅以靶向超声药物导入治疗。结果:治疗4周后,2组患者偏瘫上肢上肢简化的Fugl-Myeer运动功能评分(FMA)、改良Barthel指数(MBI)评分与治疗前比较均有明显提高(P<0.05),且观察组2项指标更高于对照组(P<0.05)。2组临床疗效比较,观察组的临床有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论:针刺结合靶向超声药物导入治疗可以明显改善脑卒中后SHS的临床症状,提高上肢运动及日常生活能力。

卵巢癌移植瘤靶向超声造影成像与不同病理分期CXCL12表达量的相关性研究

目的研究和分析不同病理分期人卵巢癌移植瘤组织趋化因子CXCL12表达量和携CXCL12靶向超声造影成像参数的关系。方法50只裸鼠用于制备人卵巢癌移植瘤模型,造模成功后每间隔10 d,随机取10只行非靶向及靶向超声造影成像,用造影分析软件获得造影参数;随后处死裸鼠行病理检查和RT-PCR技术得到各组卵巢癌组织CXCL12因子mRNA相对表达量,根据病理Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分3组;分析不同病理分期靶向与非靶向超声造影时间强度曲线参数与卵巢癌组织中CXCL12因子RNA表达量的相关性。结果明确病理分期的37例移植瘤纳入本研究;时间强度曲线参数峰值强度(PI)和达峰时间(TTP)在CXCL12靶向微泡组于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ病理分期差异有统计学意义(P<0.05);与普通造影剂比较,靶向超声造影PI值在Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌移植瘤组中较高,差异有统计学意义(P<0.05),靶向超声造影TTP值在Ⅰ期卵巢癌移植瘤组较小,差异有统计学意义(P<0.05);CXCL12靶向超声微泡PI与Ⅱ、Ⅲ期癌组织中CXCL12表达量呈正相关(P<0.05),参数TTP与Ⅰ、Ⅲ期癌组织中CXCL12表达量呈正相关(P<0.05),其余参数在各病理分期与瘤组织CXCL12 mRNA表达量无相关性(P>0.05)。结论携CXCL12抗体靶向微泡超声造影参数PI和TTP在人卵巢癌移植瘤不同病理分期存在差异,且与人卵巢癌移植瘤中CXCL12 mRNA相对表达量具有相关性。

自制靶向超声造影剂兔肾炎症组织显像实验研究

为探讨自制靶向超声造影剂对兔肾炎症组织显像的增强效果,建立兔缺血再灌注损伤肾模型,用自制靶向超声造影剂行声学造影,谐波显像观察造影前后6只兔缺血再灌注损伤肾和6只对照兔正常肾实质回声强度变化.结果表明:造影后两组兔肾实质回声均增强,造影前后缺血再灌注损伤肾和对照组正常肾实质灰阶值(GS)差值分别为25.88±4.04和9.98±1.96(p<0.001).自制靶向超声造影剂可显著增强兔肾炎症组织显像.

血管内皮生长因子受体2单抗的靶向超声造影剂制备及体外评价

目的探讨携血管内皮生长因子受体2(KDR)单抗的靶向脂质微泡的制备方法,并对其物理特性、生物活性、靶向黏附稳定性进行体外测定。方法采用声振仪制备生物素化脂质微泡(MB-B),再应用生物素-亲和素桥连技术构建携KDR单抗的靶向微泡(MB-BAB-KDR)。荧光显微镜下观察MB-B、单纯单抗微泡(MB-B-KDR)、MB-BAB-KDR与荧光二抗孵育后荧光强度。利用平行板流动腔技术体外模拟生理血流剪切力条件,评价靶向微泡的黏附效能。结果制备的靶向微泡MB-BAB-KDR呈圆球形,粒度分布均匀。与荧光二抗孵育后,MB-BAB-KDR发出明亮的绿色荧光(Ⅱ级),而MB-B-KDR显示微弱的绿色荧光(Ⅰ级)、MB-B无荧光(0级)。体外黏附实验显示,MB-BAB-KDR结合数目随着小鼠KDR Fc包被浓度的增高而增加(P<0.05),相同浓度下,随着时间的增加,MB-BAB-KDR结合数目增加。结论成功构建生物素-亲和素桥连的靶向脂质体微泡MB-BABKDR,体外黏附实验显示MB-BAB-KDR具有黏附稳定性,且与时间、浓度呈正相关。

KGDS血栓靶向超声造影剂的制备及其初步评价

目的:探讨制备靶向结合活化血小板的脂质超声造影剂的新方法,评价制备的靶向超声造影剂体外与血栓靶向结合的能力。方法:首先合成荧光标记的,能与血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合的赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸多肽-棕榈酸化合物(KGDS-Palm)。采用"超声-高速剪切"法,以带荧光FITC的KGDS-Palm为主要原料之一,制备靶向脂质超声造影剂。马尔文公司粒径测定仪检测微泡大小及分布;Coulter计数仪分析浓度;荧光显微镜下观察KGDS多肽与微泡的结合情况;流式细胞仪评价多肽与微泡的结合效率;观察靶向微泡在体外的稳定性;采用体外血栓模型,检测靶向微泡与血栓靶向结合的特异性。结果:KGDS靶向超声造影剂呈淡黄色混悬液,微泡浓度约为1.5×109/mL,平均粒径为1.5μm,98%的微泡小于5μm。荧光显微镜显示靶向超声造影剂表面呈明亮的绿色荧光;流式细胞仪检测KGDS结合效率为90.04%;体外4℃保存48h后微泡浓度及粒径无显著改变;体外靶向及其拮抗实验证实,靶向超声造影剂与血栓特异性结合。结论:采用"超声-高速剪切法"制备靶向超声造影剂,方法简单易行,有利于靶向造影剂的制备及纯化;KGDS靶向超声造影剂稳定性好、靶向结合特异性强。

靶向超声微泡在肿瘤诊断与治疗领域的研究进展

近年来靶向超声微泡在肿瘤诊断和治疗方面的研究进展十分迅速。实验研究表明,靶向超声微泡用于评价肿瘤血管新生和肿瘤血管内皮分子的变化,具有无创性的优势,并且能够大大提高肿瘤诊断的准确性。同时,靶向超声微泡作为一种新的基因或药物运载的有效工具,通过携带基因和药物对肿瘤组织实现靶向性释放,介导肿瘤细胞坏死、凋亡以及肿瘤微血管的栓塞和阻断,从而起到靶向治疗的作用。

靶向超声介导血管内皮生长因子基因转染对兔损伤动脉血管内皮功能的影响

目的研究超声造影剂SonoVue携带血管内皮生长因子(VEGF)基因靶向转染兔损伤动脉后血管内皮功能的恢复及程度。方法构建真核表达质粒pCDNA3.1(-)/hVEGF165。建立兔髂外动脉的球囊损伤模型,并随机分为两组:损伤后血管腔内注射携带VEGF基因质粒的造影剂并接受超声辐照的为实验组,损伤后无任何干预为对照组。2周后超声检测髂外动脉内皮依赖性舒张功能,完成后将兔处死取损伤处血管,HE染色计算血管内膜与中膜面积比值,免疫组化了解血管壁平滑肌细胞的增殖和VEGF的表达情况。结果实验组髂外动脉血管内皮依赖性舒张功能较对照组改善(P<0.05),但实验组的血管内膜面积与中膜面积比值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化显示实验组血管壁平滑肌细胞增殖核抗原表达明显减低,且见大量VEGF阳性反应的棕褐色颗粒。结论靶向超声介导VEGF基因转染损伤的动脉管壁2周即可有效改善局部血管的内皮功能,有效增强VEGF的表达,并且抑制平滑肌细胞增殖,提示携基因靶向超声可以为早期改善介入治疗后血管内皮功能并由此防治再狭窄提供新途径。

靶向超声介导VEGF165基因治疗左向右分流肺动脉高压兔模型的实验性研究

目的探讨靶向超声介导VEGF165基因治疗左向右分流兔模型肺动脉高压的可行性.方法将30只肺动脉高压兔随机分为实验1组、实验2组和对照组各10只,实验1组采用超声破坏微泡造影剂的方法将VEGF165基因转染兔,实验2组静脉输入同等量携带VEGF165基因的造影剂,对照组静脉输入同等量单纯造影剂,14 d后处死.处死后免疫组织化学检测肺组织中的VEGF蛋白表达及毛细血管记数.结果实验1组中可见大量VEGF阳性反应的棕褐色颗粒,而实验2组、照组肺组织中仅有极少量的VEGF阳性反应的颗粒,其差异具有明显统计学意义(P<0.05).实验1组平均毛细血管密度(MDV)为(387.35±12.80)个/高倍视野,组间比较有显著差异.实验1组(WT%)、(WA%)比对照组和实验2组明显减小,其差异有统计学意义(P<0.05).结论超声介导微泡造影剂携带VEGF165基因能提高基因转染率,促进肺内毛细血管再生.

携带抗白细胞介素-2受体α单抗靶向超声微泡和对比超声结合评价肾缺血-再灌注损伤

目的探讨携带抗白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)单抗靶向超声微泡和对比超声结合评价肾缺血再灌注损伤(IRI)的可行性。材料与方法采用"亲和素-生物素"桥接法构建携抗IL-2Rα靶向超声微泡(MBIL-2Rα)和携同型抗体对照微泡(MB)。10只左肾缺血50min的小鼠,再灌注24h后,随机先后注入MBIL-2Rα和MB(间隔30min),分别于注入5min后行对比超声检查,并测量肾的声强度(VI)。结果对比超声图像显示MBIL-2Rα组左肾造影显著增强,VI值高达21.6±4.8U,而在MB组左肾仅见轻度造影增强,VI值为9.7±2.9U,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。但无论是MBIL-2Rα组还是MB组左肾VI值均明显高于右侧肾脏VI值(3.8±1.5U,3.7±1.7U,P<0.05)。两组右侧肾脏之间VI值未见明显差异。结论 MBIL-2Rα和对比超声相结合能够有效评价肾IRI,从而对肾移植后的排斥反应提供有价值的信息。

靶向超声造影剂在心血管领域的研究现状与展望

靶向超声造影剂是指将特异性配体连接到超声造影剂表面,使其能主动地与靶器官或靶组织上相应的受体结合,并通过超声造影技术显示靶器官或组织分子水平的病理变化,产生特异性超声靶向分子显影。近年来,靶向超声造影剂在心血管疾病的诊断与治疗中的应用已成为研究热点,并取得了可喜成果。本文就靶向超声造影剂的显影原理、组成及理化特性、制备及超声靶向分子成像、在心血管疾病诊断与治疗中的应用等研究现状与展望做一述评,以供基础与临床的广泛、深入研究与应用提供参考与借鉴,使靶向超声造影剂在心血管疾病的诊断治疗中发挥更大的作用。

液态氟碳造影剂——一种极具潜力的靶向超声造影剂

靶向超声造影剂是超声分子显像的重要物质基础。本文就液态氟碳造影剂作为靶向超声造影剂的优势及其在超声分子显像领域的应用和展望作一综述。

肿瘤新生血管靶向超声造影剂的实验研究

目的制备分别携带VEGF和CD34抗体以及同时携带2种抗体的靶向超声造影剂,并对其体外寻靶能力及免疫活性进行鉴定。方法采用吸附法制造3种靶向超声造影剂,每种靶向超声造影剂又根据微泡与抗体的配比比例及pH值具体各分为6组,共18组(实验组)。使用荧光免疫法,在体外鉴定每个实验组的寻靶能力及免疫活性。同时,设普通造影剂对照组、二抗代替一抗对照组。在电镜下计算靶向超声造影剂的结合率,并进行比较。结果电镜及光镜下观察,靶向超声造影剂为圆形,大小及分布较均匀,无任何聚集现象。荧光显微镜下观察,MBV实验组、MBC实验组、MBB实验组与靶向超声微泡结合的内皮细胞胞浆表达为绿色,而未与靶向超声微泡结合的内皮细胞及其他实验组、普通造影剂对照组与二抗代替一抗对照组均未表达。电镜下观察,靶向超声微泡组部分内皮细胞与靶向微泡结合,MBV实验组的结合率为3.475 5%±0.139 2%,MBC实验组的结合率为3.544 4%±0.214 5%,MBB实验组的结合率为3.682%±0.124 6%,各组比较差异无统计学意义(P>0.05),而其他实验组及对照组未见与微泡结合的内皮细胞。结论自制的3种靶向超声造影剂在体外有寻靶能力及免疫活性,可用于动物肿瘤模型新生血管的体内特异性靶向显影的实验研究。