miR-141-3p、KLF9异常表达对前列腺癌细胞株药物敏感性和雄激素受体表达的影响及靶向关系

目的观察miR-141-3p、Krüppel样因子9(KLF9)对前列腺癌细胞株药物敏感性、雄激素受体(AR)表达的影响,验证miR-141-3p、KLF9之间的靶向关系,以探讨miR-141-3p、KLF9对PCa药物敏感性的调控作用及机制。方法选择雄激素敏感且表达AR的LNCaP细胞株。将细胞分为miR-141-3p低表达组、miR-141-3p正常组、KLF9过表达组、KLF9正常组,采用脂质体转染法分别转染miR-141-3p-inhibitor、inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、KLF9过表达质粒、空白质粒。上述各组细胞加入不同浓度(0、10、25、50、75、100µmol/L)比卡鲁胺或(0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L)多西他赛后培养48 h,检测各组细胞OD值,计算细胞增殖率(反映药物敏感性)。采用qRT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中AR及AR-V7。采用TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9是否存在结合位点,然后采用荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与KLF9的靶向调控关系[将LNCaP细胞株分别分为A、B、C、D组,A组先后转染野生型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-WT)、inhibitor-NC,B组先后转染KLF9-WT、miR-141-3p-inhibitor,C组先后转染突变型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-Mut)、inhibitor-NC,D组先后转染KLF9-Mut、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后检测各组荧光素酶活性]。通过细胞功能回复实验进一步验证miR-141-3p通过靶向调控KLF9抑制前列腺癌细胞药物敏感性[将LNCaP细胞株分别分为a、b、c、d组,a组先后转染si-KLF9阴性对照(si-Ctrl)、inhibitor-NC,b组先后转染si-Ctrl、miR-141-3p-inhibitor,c组先后转染si-KLF9、inhibitor-NC,d组先后转染si-KLF9、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后分别使用75µmol/L比卡鲁胺或2.5 nmol/L多西他赛处理细胞48 h,使用CCK-8法检测细胞OD值,并计算细胞增殖率]。结果LNCaP细胞培养48 h,在无药物加入时,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05);随着药物浓度升高,各组细胞增殖率呈下降趋势(P均<0.05);在同等药物浓度情况下,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05)。LNCaP细胞培养48 h,与不加入药物的miR-141-3p正常组相比,加入75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR相对表达量升高(P均<0.05),加入50、75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR-V7相对表达量升高(P均<0.05);加入0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L多西他赛的miR-141-3p正常组AR及AR-V7相对表达量升高(P均<0.05)。miR-141-3p低表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的KLF9正常组(P均<0.05)。TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,B组的相对荧光活性高于A组、C组及D组(P均<0.05)。功能回复实验结果显示,d组的细胞增殖率高于b组(P均<0.05),低于c组(P均<0.05),但与a组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-141-3p低表达、KLF9过表达均可增强LNCaP细胞株的药物敏感性,并可抑制LNCaP细胞株AR和AR-V7的表达,miR-141-3p和KLF9存在靶向关系,miR-141-3p可靶向KLF9抑制LNCaP细胞药物敏感性,可能是通过促进AR-V7的表达实现的。

雄激素受体、胰岛素生长受体1表达与三阴性乳腺癌的靶向治疗疗效及预后的相关性研究

目的 分析AR和IGF1R与三阴性乳腺癌的靶向治疗疗效及预后的相关性。方法 选择72例三阴性乳腺癌患者;患者均接受比卡鲁胺联合戈舍瑞林治疗;根据实体瘤的疗效评价标准对患者治疗疗效进行评估;采用S-P免疫组化法检测组织中AR和IGF1R表达水平;绘制卡米尔生存曲线分析AR阳性表达和IGF1R阳性表达患者生存期。结果 AR-IGF1R-、AR+IGF1R-、AR-IGF1R+、AR+IGF1R+亚组患者治疗疗效存明显差异,其中AR+IGF1R+组患者治疗疗效明显优于其他亚组(P<0.05);AR和IGF1R阳性表达与患者治疗疗效呈显著正相关关系(P<0.05);AR-IGF1R-、AR+IGF1R-、AR-IGF1R+、AR+IGF1R+亚组患者生存期间有明显差异,AR+IGF1R+组患者生存期最长(P<0.05)。结论 AR、IGF1R阳性表达与三阴性乳腺癌的靶向治疗疗效呈显著正相关关系,且AR、IGF1R阳性表达可有效改善患者生存期。

雄激素受体在肿瘤中的作用及机制研究进展

雄激素受体(androgen receptor, AR)是类固醇核受体超家族的成员之一。AR在正常生理和代谢过程以及在肿瘤等多种疾病的发生与发展中起着重要作用。AR在不同肿瘤中作用不同,如在前列腺癌、黑色素瘤及胃癌等肿瘤中发挥促进作用,而在雌激素受体阳性乳腺癌中发挥肿瘤抑制作用。AR通过调节免疫(抑制肿瘤浸润性CD8^(+)T细胞的活性和干性)间接发挥促进肿瘤发生发展。该文回顾并总结AR在肿瘤中的主要作用、分子机制与最新研究进展,阐明AR的研究前景,为AR的进一步研究提供思路。

基于雄激素受体通路的PROTAC分子研究进展

雄激素受体(androgen receptor,AR)在前列腺癌的发生和发展过程中扮演着至关重要的角色。在临床长期雄激素剥夺治疗中,AR过度表达、AR基因突变和AR剪接体等现象的出现,可能会导致雄激素受体通路再度激活,并不可避免地进展为去势抵抗性前列腺癌。蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis targetingchimera,PROTAC)在靶向AR降解方面进展显著,针对AR的PROTAC降解剂通过促进AR降解来阻断雄激素受体信号通路,有望为前列腺癌的临床治疗带来新的突 破。本文对基于雄激素受体通路的PROTAC分子进行论述。

去势抵抗性前列腺癌雄激素受体靶向药物治疗进展

前列腺癌（prostate cancer,PCa）是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤,在全球范围内其发病率在男性所有恶性肿瘤中位居第二,以欧美发病率最高[1],亚洲及北非地区发病率相对较低,但近年来亦呈现上升趋势,且增长较欧美更为迅速。

脱氢表雄酮经不依赖于雌、雄激素受体的MAPK信号途径抑制成骨细胞凋亡

脱氢表雄酮(DHEA)已成为防治绝经后骨质疏松症(PMO)的新策略,但其调控成骨细胞(OB)凋亡的具体分子机制和信号转导途径尚不清楚。我们通过颅骨酶解法原代培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,10-7mol/LDHEA分别作用0h、24h、48h、72h后,RT-PCR分析OB中ERα、ERβ和ARmRNA表达;原代OB去血清进一步培养24h,细胞以雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780(1μmol/L)、雄激素受体(AR)拮抗剂Flutamide(10μmol/L)或U0126(100μmol/L)预处理后给予系列浓度DHEA(10-10-10-5mol/L)孵育72h,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡;原代OB以1μmol/LICI182,780或10μmol/LFlutamide预处理25min后给予不同浓度DHEA孵育10min,Westernblotting分析ERK1/2的磷酸化状态。结果表明OBs经10-7mol/LDHEA体外处理24h、48h、72h后,ERβ和ARmRNA水平升高(分别为P<0.05和P<0.01);而ERαmRNA水平无明显变化。10-9-10-6mol/LDHEA可显著抑制血清饥饿诱导的OBs早期凋亡(分别为P<0.05及P<0.01),该抑制效应可被U0126阻滞,ICI182,780或Flutamide则不能阻滞DHEA对OB的抗凋亡效应;Westernblot也显示ICI182,780或Flutamide都不能有效地阻滞DHEA对OB中ERKs磷酸化的诱导作用。因此可认为DHEA经ER或AR非依赖途径抑制OB凋亡;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径,磷酸化ERK1/2参与介导这一作用。

抗雄激素分子靶向治疗前列腺癌药物的新进展

前列腺癌作为男性泌尿系统常见的恶性肿瘤,已经严重威胁我国男性健康。药物治疗作为转移性或局部晚期前列腺癌主要的治疗手段,对于延缓疾病进展、改善患者预后显得尤为重要。目前针对雄激素轴线进行的分子靶向治疗的新疗法,更加精确地针对雄激素或雄激素受体发挥作用,为延长患者存活率提供了可能。现就目前抗雄激素分子靶向治疗前列腺癌相关研究现状及药物做一综述。

雄激素受体有望成为乳腺癌中新的生物标志物

生物标志物可用于靶向治疗的诊断、预后和预测。雌激素受体(ER)和人类表皮生长因子-2(HER-2)已经成为指导乳腺癌治疗的标准生物标志物。雄激素受体(AR)是一种属于核受体超家族中的类固醇受体,与前列腺癌的发展有关。越来越多的证据表明AR在乳腺癌中起着重要的作用,AR被认为是乳腺癌中有用的生物标志物。现有的生存分析表明,AR在ER+乳腺癌中起到肿瘤抑制作用,是一种有利的预后标志物,而AR在ER-乳腺癌中起肿瘤启动子作用,包括在HER-2阳性型和三阴性乳腺癌(TNBC),是一种不良预后因素。AR还被证明可以预测ER+乳腺癌对辅助激素治疗和TNBC中新辅助化疗的反应潜力。然而,也有相关研究得出与以上相互矛盾的结果,这可能是肿瘤和AR阳性评分方法之间的内在差异导致的。有人建议应用AR表达状态来指导不同乳腺癌亚型的治疗。在未来,AR将成为乳腺癌的可行生物标志物,在乳腺癌中使用AR拮抗剂的临床试验是活跃的,单独靶向AR或其他治疗剂为乳腺癌的现有疗法提供了替代方案。因此,如果要使用AR靶向治疗,AR表达将是必要的。

雌激素受体低表达早期乳腺癌的研究进展

内分泌治疗是雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性早期乳腺癌重要的辅助治疗手段。ER低表达(免疫组织化学染色1%~10%)人群近年来受到广泛关注,该群体占乳腺癌总体人群的3%~9%,辅助内分泌治疗效果相对有限。虽然ER低表达患者在乳腺癌人群中占比较低,但由于乳腺癌患者整体人群数量庞大,该群体的临床需求不容忽视。多项研究提示,ER低表达乳腺癌在肿瘤的分子生物学特征、临床病理学特征及患者预后等方面与ER阳性乳腺癌差异较大,更类似于ER阴性乳腺癌。对于ER低表达早期乳腺癌的内分泌治疗获益及疗程界定仍存在争议,缺乏大型前瞻性临床研究的证据。多项回顾性研究及meta分析结果显示,该人群接受辅助内分泌治疗可能获益有限,应慎重考虑;联合细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4/6抑制剂行辅助治疗的获益仍有待未来数据佐证。部分ER低表达乳腺癌患者可综合考虑其他危险因素进行辅助化疗。除传统化疗外,抗体药物偶联物(如戈沙妥珠单抗、Dato-DXd)、多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂、免疫治疗ER低表达早期乳腺癌的临床研究也正在进行中。其中包括:评估戈沙妥珠单抗联合帕博利珠单抗辅助治疗术后高危的人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阴性、ER和孕激素受体(progesterone receptor,PR)<10%患者的Ⅲ期ASCENT-05研究,评估戈沙妥珠单抗辅助治疗术后高危HER2阴性患者的Ⅲ期SASCIA研究,以及评估Dato-DXd联合度伐利尤单抗新辅助治疗的Ⅲ期TROPION-Breast04研究;此外,一项针对奥拉帕利联合度伐利尤单抗新辅助治疗三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)及ER低表达乳腺癌的研究(NCT03594396)正在探索中,结果值得期待。本文介绍ER低表达乳腺癌的定义、临床病理学特征及患者预后,并阐述HER2阴性、ER低表达早期乳腺癌的治疗现状以及未来潜在的治疗策略。

前列腺癌细胞核内雄激素受体靶基因的筛选

目的筛选雄激素依赖性前列腺癌(PC)和雄激素非依赖性PC细胞核内的雄激素受体靶基因。方法取雄激素依赖性PC细胞株LNCaP和雄激素非依赖性PC细胞株LNCaP-AI进行培养,使用染色质免疫共沉淀技术在全基因组水平上筛选LNCaP、LNCaP-AI细胞中的雄激素受体结合位点,联合高通量测序技术寻找雄激素受体靶基因。采用RT-PCR法检测并比较LNCaP、LNCaP-AI细胞中雄激素受体差异靶基因表达水平。结果LNCaP、LNCaP-AI细胞中分别发现9021、4949个基因组测序数据富集区域,其中4143、2380个落在雄激素受体结合位点,将这些位点定位到基因组后分别得到2796、1854个雄激素受体相关基因(相同的基因有789个)。多数靶基因集中在肌动蛋白细胞骨架的调节、紧密连接、血管平滑肌收缩信号通路;LNCaP与LNCaP-AI细胞的差异靶细胞通路为黏着斑通路。从LNCaP与LNCaP-AI细胞测序得到的雄激素受体差异靶基因中筛选出富集程度较高的雄激素受体差异靶基因2个,即LIFR、PSMA6。LNCaP-AI细胞中LIFR、PSMA6 mRNA表达水平均明显高于LNCaP细胞(均P<0.05)。结论LIFR、PSMA6为PC细胞核内雄激素受体靶基因。

基于生物信息学分析管腔/雄激素受体亚型三阴性乳腺癌的生物学靶点及其与预后的关系

目的利用生物信息学方法筛选管腔/雄激素受体(LAR)亚型三阴性乳腺癌(TNBC)的特异性生物学靶点,并分析其与患者预后的关系。方法从TCGA数据库下载乳腺癌患者转录组测序数据,包括113例TNBC患者和597例非TNBC患者。筛选TNBC中差异表达上调的基因,然后采用多尺度嵌入式基因共表达网络分析技术筛选核心模块和核心基因。使用数据集GSE76245和UALCAN数据库对核心基因在不同亚型TNBC中的表达进行验证,使用CCLE数据库探索该基因在泛癌细胞系和乳腺癌亚组细胞系中的表达差异。使用Shao数据集分析核心基因与LAR亚型TNBC患者预后的关系。结果与非TNBC患者相比,TNBC患者中存在1903个差异表达上调,这些基因被聚类为21个模块,其中C3模块是核心模块,催乳素诱导蛋白(PIP)基因是核心基因。GSE76245数据集和UALCAN验证结果均提示PIP基因在LAR亚型TNBC中的表达高于其他亚型TNBC(均P<0.05),CCLE数据库分析结果提示PIP在泛癌细胞系和乳腺癌亚组细胞系中的表达存在差异(均P<0.05)。预后分析结果提示,PIP基因表达量降低是LAR亚型TNBC患者预后的独立危险因素,低表达的LAR亚型患者的3年和5年疾病累计复发风险均高于高表达者(均P<0.05)。结论PIP基因在LAR亚型TNBC中的表达高于其他亚型,其或可成为LAR亚型TNBC的特异性生物学靶点,上调该基因的表达或有助于改善此类型乳腺癌患者的预后。

雄激素受体阻断促进BRAF/MEK靶向治疗的反应

以BRAF和MEK(BRAF/MEK)为靶点的治疗彻底改变了黑色素瘤和其他癌症的治疗;然而,治疗耐药性很常见,需要创新的治疗策略。在此,科研人员对一组接受新辅助BRAF/MEK靶向治疗的黑色素瘤患者(NCT02231775,n=51)进行了研究。相对于男性患者,在女性患者中观察到主要病理缓解率显著提高(MPR;切除时存活肿瘤≤10%),无复发生存(RFS)得到改善(MPR,66%与14%,P=0.001;RFS,2年时为64%与32%,P=0.021)。

我国科学家发现新型雄激素受体拮抗剂有望成为专一有效的前列腺癌治疗药物

据东方网2008年5月1日援引科学网消息，2008年5月7日《自然·中国》杂志刊登了国家新药筛选中心和四川大学华西药学院合作完成的相关研究论文。

三阴性乳腺癌雄激素受体表达与X线和超声影像特征关系研究

目的:探讨三阴性乳腺癌(TNBC)是否因雄激素受体(AR)不同表达而具有特征性的X线及超声表现。方法:回顾性分析101例TNBC患者的临床及影像学资料,比较AR表达状况及AR不同表达在钼靶X线摄影、超声上的差异。结果:在乳腺钼靶X线上,AR阳性TNBC多表为现肿块伴钙化或局灶不对称,AR阴性TNBC多表现为单纯肿块,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。AR阳性TNBC肿块形态以不规则形为主,而AR阴性TNBC肿块表现为不规则形、分叶状、圆形或椭圆形,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。AR阳性TNBC肿块边缘模糊多见,AR阳性TNBC钙化较多见,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。与AR阴性TNBC比较,AR阳性TNBC多表现为不规则肿块影或毛刺状边缘、Ki-67低表达,较少表现为浸润性导管癌和Ⅲ级组织学分级(P<0.05)。结论:AR阳性TNBC和AR阴性TNBC具有不同的影像学特征,特征性的影像学表现有助于预测AR表达状况。

药物靶向、分子靶向、激素靶向及干细胞靶向与骨质疏松症的治疗

背景:骨质疏松症引起的骨折及其他并发症严重影响中老年人生活质量。目的:探讨靶向疗法治疗骨质疏松的进展,以促进其临床应用。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI)中1997-05/2011-12相关文献。在标题、摘要、关键词中以"targeted therapy,bone target,stem cell,osteoporosis,treatment"或"靶向治疗,骨靶向,干细胞,骨质疏松,治疗"为检索词进行检索。选择文章内容与靶向疗法治疗骨质疏松有关者,同一领域则选择近期发表在权威杂志上的文章。结果与结论:初检得到148篇文献,根据纳入标准选择38篇文献进行综述。靶向治疗骨质疏松已成为骨质疏松治疗中的研究热点。目前研究领域涉及药物靶向、分子靶向、激素靶向、受体靶向及干细胞靶向治疗等,其中药物、分子及激素靶向疗法为目前常用的治疗方法,常用药物有四环素、双膦酸盐类、Denosumab等。但目前靶向治疗骨质疏松尚未完全成熟,所导致的临床不良反应限制其应用进展,仍有许多问题有待解决。

雄激素受体蛋白降解药物在前列腺癌治疗中的研究进展

雄激素受体(AR)是一种对前列腺癌生长和进展至关重要的转录因子。生理条件下手术或药物去势降低雄激素水平会导致前列腺萎缩和前列腺癌消退。因此,转移性前列腺癌的首选疗法是雄激素剥夺。但是,去势治疗后绝大多数前列腺癌患者会复发并进展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。目前,CRPC的临床治疗主要采用抑制AR活性的拮抗剂或减少雄激素产生的阿比特龙。由于AR基因突变或剪接变异,生成超级活化的AR变体蛋白,目前的临床治疗药物已经无法对CRPC患者有满意的疗效。最新的研究结果表明,消除前列腺癌细胞中的AR蛋白是一种有前景的解决方案,有潜在治愈前列腺癌的效果。多种降低AR蛋白水平的小分子化合物可通过不同的机制消除前列腺癌细胞中的AR蛋白,显著抑制动物模型中异种移植肿瘤生长。此外,部分化合物已与现有的AR拮抗剂联合应用,进入临床试验阶段。

核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节

目的:探讨位于雄激素受体(androgen receptor,AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor,NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法:绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合蛋白表达载体p EGFP-AR(1-918aa),p EGFP-NESAR(743-817aa),p EGFP-NAR(1-665aa)和p EGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体(赖氨酸K突变为精氨酸R)p EGFPNESAR K776R,p EGFP-NESAR K807R和p EGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节。结果:在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平。在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h。融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加。GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照。赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基。结论:核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解。本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控。

雄激素受体对肝细胞癌发生发展作用的研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,病死率极高,虽然HCC的治疗在过去的几十年中一直在进步,但预后不良。研究表明,与女性相比,男性患HCC的风险更高。长期以来,确定导致HCC发病率性别差异的因素一直被认为是揭示HCC发生的分子机制的重要手段。遗传学研究已经证实,雄激素受体(AR)可能是造成HCC性别差异的原因之一。AR是核受体超家族的成员之一,在人HCC和非HCC组织中均有表达,雄激素/AR信号通路通过多种机制促进HCC的发生、发展,可作为HCC潜在的治疗靶点。

药物治疗雄激素非依赖型前列腺癌的研究进展

雄激素非依赖型前列腺癌是一高度恶性肿瘤，其药物治疗已有大量实验研究。本文总结了近年来治疗雄激素非依赖型前列腺癌的四大类药物，即酶抑制剂、抗增生药、抗转移药和促凋亡药，仅供广大医药科研工作者参考。