右美托咪定通过沉默信息调节因子1/核转录因子信号通路调控脑梗死大鼠海马组织炎症机制研究

目的:探究右美托咪定(Dex)干预对脑梗死大鼠的治疗效果及潜在治疗机制。方法:将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、右美托咪定低剂量组、右美托咪定高剂量组,每组各12只。除对照组、假手术组外,其余各组选用Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,假手术组仅剥离肌肉血管。Dex治疗组分别腹腔注射盐酸右美托咪定溶液,其余各组注射等量0.9%氯化钠溶液。比较各组大鼠缺血脑组织的沉默信息调节因子1(SIRT1)、核转录因子(NK-κB)信使RNA(mRNA)和蛋白的相对表达水平及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,同时检测各组大鼠海马区炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:与对照组大鼠比较,Dex治疗组大鼠SIRT1mRNA和蛋白水平降低、NF-κBmRNA和蛋白水平升高,经Dex治疗后两组大鼠的SIRT1mRNA、蛋白水平升高,且Dex高剂量组更高;同时NF-κBmRNA、蛋白水平下降,且Dex高剂量组低于Dex低剂量组;与对照组、假手术组大鼠比较,其余各组大鼠TNF-α、IL-6、MDA水平升高,SOD水平下降,经Dex治疗后两组大鼠的炎性因子和氧化应激水平降低,且Dex高剂量组TNF-α、IL-6、MDA水平低于Dex低剂量组,同时SOD水平升高,且Dex高剂量组更高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:右美托咪定可能通过激活SIRT1/NF-kB信号通路,减轻炎性反应,缓解氧化应激,进而发挥脑保护作用。

沉默信息调节因子2对大肠癌细胞有氧糖酵解和生长增殖的调控作用及其机制

目的:探讨沉默信息调节因子2(SIRT2)对大肠癌细胞有氧糖酵解和生长增殖的影响,阐明其相关作用机制。方法:选择大肠癌HCT116细胞和SW480细胞进行培养,采用Western blotting法检测2种细胞中SIRT2蛋白表达情况。选择SIRT2蛋白表达高的大肠癌HCT116细胞进行后续RNA干扰实验,设立阴性对照组、SIRT2-siRNA#1组、SIRT2-siRNA#2组和SIRT2-siRNA#3组;选择SIRT2蛋白表达低的大肠癌SW480细胞进行后续过表达实验,构建SIRT2重组质粒,选取处于对数生长期的SW480细胞,设立空白组、空载体质粒转染组和SIRT2质粒转染组;采用HCT116细胞进行回复实验,设立对照组、SIRT2-siRNA和葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD)质粒共转染组和SIRT2-siRNA#3组。利用Lipofectamine2000将质粒和siRNA分别转染至SW480细胞和HCT116细胞,验证沉默和过表达SIRT2后,采用葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖水平,比色法检测培养液中乳酸水平,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,CCK-8实验检测细胞增殖活性。反转录PCR(RTPCR)法检测沉默和过表达SIRT2后细胞中G6PD mRNA表达水平,Western blotting法检测沉默和过表达SIRT2后细胞中G6PD蛋白表达水平。免疫组织化学法检测大肠癌组织中SIRT2和G6PD蛋白表达水平。共转染SIRT2-siRNA和G6PD质粒后检测HCT116细胞中葡萄糖水平、乳酸水平、克隆形成率和细胞增殖活性。结果:与阴性对照组比较,SIRT2-siRNA#3组培养液中葡萄糖水平明显升高(P<0.05),乳酸水平明显降低(P<0.05),细胞增殖活性和细胞克隆形成率明显降低(P<0.05),G6PD mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与空载体质粒转染组比较,SIRT2质粒转染组培养液中葡萄糖水平明显降低(P<0.05),乳酸水平明显升高(P<0.05),细胞增殖活性和克隆形成率明显升高(P<0.05),G6PD mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。在大肠癌组织中SIRT2和G6PD蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05)。与SIRT2-siRNA#3组比较,SIRT2-siRNA和G6PD质粒共转染组培养液中的葡萄糖水平明显降低(P<0.05),乳酸水平明显升高(P<0.05),细胞增殖活性和克隆形成率明显升高(P<0.05)。结论:SIRT2促进大肠癌细胞有氧糖酵解及细胞生长增殖,其机制可能与SIRT2调控G6PD基因表达有关。

血清白细胞介素-6、沉默信息调节因子-1与衰弱的相关性研究

目的研究血清白细胞介素(interleukin,IL)-6、沉默信息调节因子(silent information regulator,SIRT)-1与急诊科老年患者衰弱的相关性。方法本研究为横断面研究,收集2022年1月至12月于北京博爱医院急诊科治疗的60岁及以上患者。入院后24 h内检测血常规、生化、IL-6水平;同时采集空腹静脉血2 mL,离心后血清放置-80℃储存,采用酶联免疫吸附测定法检测SIRT-1水平。72 h内进行营养风险筛查2002评分,采用Barthel指数进行日常生活能力评定,测量握力。根据Fried衰弱表型(frailty phenotype,FP)评分,将患者分为衰弱与无衰弱组。比较衰弱与无衰弱组间临床资料及实验室指标的差异。采用多因素Logistic回归模型分析血清IL-6、SIRT-1与衰弱的相关性;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价血清IL-6、SIRT-1对衰弱的预测能力。结果本研究纳入患者316例,依据Fried FP标准,分为衰弱组(n=156)和无衰弱组(n=160)。单因素分析示,衰弱组血清IL-6[33.3(13.0,69.2)ng/L vs.20.0(9.2,41.3)ng/L,P=0.001]、SIRT-1[(9.98±1.23)μg/L vs.(8.98±1.65)μg/L,P<0.001]均高于无衰弱组。Logistic回归分析显示,调整年龄、性别、身体质量指数、Barthel指数、握力后,血清IL-6(OR=1.006,95%CI:1.001~1.011,P=0.036)和SIRT-1(OR=1.838,95%CI:1.475~2.290,P<0.001)与衰弱独立相关。IL-6预测衰弱的ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.671(95%CI:0.604~0.738,P<0.001),截点值为33.8 ng/L;SIRT-1预测衰弱的AUC为0.736(95%CI:0.674~0.799,P<0.001),截点值为9.13μg/L;二者联合模型的AUC为0.765(95%CI:0.707~0.823,P<0.001),敏感度为0.776,特异度为0.726,其预测效能优于单独应用IL-6(Z=2.119,P=0.034)。结论血清IL-6和SIRT-1可作为急诊科老年患者衰弱的独立预测因子。

沉默信息调节因子1/p53信号通路参与MPTP诱导的帕金森病小鼠多巴胺能神经元丢失

目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)和p53在MPTP诱导的帕金森病(PD)小鼠模型多巴胺能神经元凋亡中的可能作用。方法将健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、MPTP组,采用行为学方法检测行为学改变,高效液相色谱(HPLC)检测多巴胺(DA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量变化,免疫荧光染色法观察两组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目的变化及SIRT1表达情况,TUNEL法观察黑质细胞凋亡情况,Western blot法检测TH、SIRT1、p53、乙酰化p53(ac-p53)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bax的表达情况。结果行为学结果显示MPTP组小鼠爬杆转向时间及爬杆总时间均较对照组小鼠显著延长(P<0.01)。HPLC结果提示MPTP组的DA、DOPAC及HVA含量较对照组显著下降(P<0.01)。免疫荧光结果显示MPTP小鼠黑质区TH阳性神经元数目及SIRT1表达较对照组均显著减少。TUNEL检测结果显示,与对照组相比,MPTP组凋亡阳性细胞数明显增多。Western blot结果显示,与对照组相比,MPTP组的TH、SIRT1、Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.01),p53、ac-p53、Bax蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论MPTP模型小鼠行为学异常、TH阳性神经元减少、DA及其代谢产物下降提示成功复制PD动物模型,同时MPTP模型小鼠的SIRT1、p53及凋亡相关蛋白表达异常,提示该信号通路可能参与了PD的疾病过程。

MicroRNA-766-3p靶向调控SIRT6抑制肝癌进展的实验研究

目的:探究miR-766-3p是否可通过调节靶基因SIRT6影响肝细胞癌(HCC)的发生与发展进程。方法:RT-PCR及Western blot检测miR-766-3p及SIRT6在HCC组织及癌旁组织中的表达;CCK-8、流式凋亡检测技术、划痕实验及Trans well小室检测miR-766-3p/SIRT6对HCC细胞生长、凋亡、转移及侵袭能力的影响;荧光报告基因实验及western blot技术检测miR-766-3p对SIRT6表达的影响。结果:miR-766-3p在HCC组织中低表达,而SIRT6高表达。过表达miR-766-3p通过与SIRT6的3’UTR区结合降低SIRT6的表达。上调miR-766-3p明显抑制HepG2细胞增殖、转移及侵袭能力,促进细胞凋亡;但SIRT6过表达后终止miR-766-3p的以上作用。结论:miR-766-3p通过靶向负调控SIRT6的表达抑制HCC进展。

SIRT1、ATF4、KL-6蛋白在COPD患者肺组织中的表达及与气道重塑的相关性研究

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织标本的沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、活化转录因子4(ATF4)、涎液化糖链抗原-6(KL-6)蛋白水平差异及与气道重塑的相关性。方法 分别收集2020年1月至2021年5月在该院呼吸内科就诊的合并肺肿瘤的急性加重期COPD、稳定期COPD的肺叶切除组织蜡块标本各40例,分别纳入急性期组、稳定期组;另外选取40例该院实验室保存的行肺肿瘤肺叶切除术非COPD患者的组织蜡块标本作为对照组,采用Western blotting法检测3组肺组织标本的SIRT1、ATF4、KL-6蛋白水平并进行对比。绘制ROC曲线分析肺组织SIRT1、ATF4、KL-6蛋白在COPD患者病情诊断中的应用价值;以气道壁面积占总横截面积比(WA%)作为气道重塑评估指标,分为无气道重塑组、轻中度组、重度组,对比不同气道重塑程度COPD患者的肺组织SIRT1、ATF4、KL-6蛋白表达差异,分析肺组织SIRT1、ATF4、KL-6蛋白水平与COPD患者气道重塑程度的相关性。结果 (1)与对照组相比,急性期组、稳定期组的肺组织SIRT1蛋白水平均明显降低(P<0.05),急性期组、稳定期组的肺组织ATF4、KL-6蛋白水平明显升高(P<0.05);与稳定期组相比,急性期组的肺组织SIRT1蛋白水平明显降低(P<0.05),急性期组的肺组织ATF4、KL-6蛋白水平均明显升高(P<0.05)。(2)SIRT1、ATF4、KL-6蛋白单独检测以及联合检测诊断COPD的灵敏度、特异度均>70.00%,AUC均>0.740。(3)与无气道重塑组相比,轻中度组、重度组的肺组织ATF4、KL-6蛋白水平明显升高(P<0.05),且SIRT1蛋白水平明显降低(P<0.05);与轻中组相比,重度组的肺组织SIRT1蛋白水平明显降低(P<0.05),且ATF4、KL-6蛋白水平均明显升高(P<0.05)。(4)COPD患者肺组织的SIRT1蛋白表达与气道重塑WA%呈负相关(r=-0.635,P<0.001),ATF4、KL-6蛋白表达与气道重塑WA%呈正相关(r=0.768、0.892,P<0.001)。结论 SIRT1蛋白在COPD患者肺组织中呈低表达,ATF4、KL-6蛋白在COPD患者肺组织中呈高表达,SIRT1、ATF4、KL-6蛋白与COPD病情发展以及气道重塑有关。检测肺组织中SIRT1、ATF4、KL-6蛋白的表达对判断COPD病情发展均有良好的诊断效能,可将调控SIRT1、ATF4、KL-6蛋白在肺组织中的水平作为后续临床COPD、气道重塑治疗的新研究方向。

沉默信息调节因子1在心肌梗死中的研究进展

沉默信息调节因子1(SIRT1)是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的组蛋白脱乙酰酶,其可通过抑制氧化应激、炎症、细胞凋亡和纤维化发挥保护作用。大量研究证实,SIRT1与心肌梗死的发生和发展密切相关,SIRT1基因多态性是心肌梗死的易感因素之一。现综述SIRT1基因多态性及表达与心肌梗死的关系,同时总结目前以SIRT1为治疗靶点的研究,旨在为以SIRT1作为靶点的心肌梗死防治策略提供理论依据。

MLF1IP、SIRT6在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨人髓细胞白血病因子1相互作用蛋白基因(MLF1IP)、沉默信息调节因子6(SIRT6)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法选取2019年12月至2022年12月本院收治80例胃癌患者的临床病历资料。检测胃癌组织与癌旁组织中MLF1IP、SIRT6的表达情况,分析MLF1IP、SIRT6表达与胃癌临床病理特征的关系。随访并绘制生存曲线。结果癌组织中MLF1IP阳性表达率为65.0%(52/80),高于癌旁组织的31.3%(25/80),差异具有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中SIRT6阳性表达率为58.6%(47/80),低于癌旁组织的88.6%(71/80),差异具有统计学意义(P<0.05)。SIRT6表达、MLF1IP表达与年龄、性别、分型、BMI无相关(P>0.05);与TNM分期、病理学分级、肿瘤直径、淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润有关(P<0.05)。SIRT6阳性表达组生存率为85.11%(40/47),SIRT6阴性表达组生存率为63.64%(21/33),差异均有统计学意义(P<0.05);MLF1IP阳性表达组生存率为69.23%(36/52),MLF1IP阴性表达组生存率为89.29%(25/28),差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌组织中MLF1IP表达升高,SIRT6表达降低,且MLF1IP、SIRT6阳性表达与胃癌临床特征存在相关,且MLF1IP、SIRT6表达与胃癌预后生存相关密切。

沉默信息调节因子6对慢加急性肝衰竭糖异生的影响和机制探讨

目的探讨慢加急(亚急)性肝衰竭(ACLF)患者以及氧化应激损伤大鼠肝细胞沉默信息调节因子6(SIRT6)和糖异生限速酶表达的变化以及可能机制。方法选取2016年8月至2018年5月首都医科大学附属北京佑安医院10例ACLF患者纳入ACLF组,10例正常肝移植供者纳入正常对照组。收集入选者空腹血糖、总胆红素、白蛋白、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等资料。分离Sprague Dawley大鼠肝细胞,分为对照组(无任何干预)、模型组(H2O2干预6 h)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激活组(模型组基础上加入mTOR激活剂)、mTOR抑制组(模型组基础上加入mTOR抑制剂)。蛋白质电泳和聚合酶链反应检测葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、SIRT6以及mTOR的相对表达。结果ACLF组ALT、总胆红素高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ACLF组SIRT6含量(0.15±0.07)μg/L、空腹血糖(3.19±0.59)mmol/L,明显低于正常对照组(0.46±0.15)μg/L、(7.07±2.07)mmol/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ACLF组肝组织PEPCK、G6P蛋白相对表达明显低于正常对照组。模型组SIRT6、PEPCK、G6P mRNA相对表达低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。激活mTOR后PEPCK、G6P、SIRT6相对表达高于模型组,抑制mTOR后PEPCK、G6P、SIRT6相对表达低于模型组。结论ACLF时SIRT6可能与mTOR信号途径相互作用,抑制糖异生,并与低血糖的发生相关,降低SIRT6水平,可能起到延缓ACLF进展的作用。

miR-338-3p对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化的调控作用

目的探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)过表达靶向沉默信息调节因子(SIRT)6对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法采用荧光素酶报告实验分析miR-338-3p与SIRT6的靶向关系。构建SIRT6 pcDNA载体过表达SIRT6,将miR-338-3p mimic与pcDNA-SIRT6单独或联合转染至TPC-1细胞,根据转染质粒的不同分为6组:对照组(不作处理)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-338-3p mimic组(转染miR-338-3p mimic)、pcDNA-SIRT6组(转染pcDNA-SIRT6)、mimic-NC+pcDNA-SIRT6组(共转染mimic-NC和pcDNA-SIRT6)和miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组(共转染miR-338-3p mimic和pcDNA-SIRT6)。分别检测各组TPC-1细胞的克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率及上皮型钙黏蛋白(E-cad)、神经型钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白的表达量。结果miR-338-3p的靶基因为SIRT6。与对照组比较,miR-338-3p mimic组克隆形成率、侵袭细胞数和划痕愈合率显著降低(P<0.05),E-cad蛋白表达显著升高(P<0.05),N-cad、波形蛋白表达显著降低(P<0.05);pcDNA+SIRT6组克隆形成率、侵袭细胞数和划痕愈合率显著升高,E-cad蛋白表达水平显著降低(P<0.05),N-cad、波形蛋白表达显著升高(P<0.05)。与pcDNA-SIRT6组比较,miR-338-3p mimic+pcDNA-SIRT6组克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率显著降低(P<0.05),E-cad蛋白表达显著升高(P<0.05),N-cad、波形蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论miR-338-3p过表达靶向SIRT6可抑制TPC-1细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT。

沉默信息调节因子2同源体1在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是女性最常见的三大恶性肿瘤之一,可发于任何年龄,多见于中老年妇女,很少发生在青春期前和婴幼儿,是女性癌症死亡的第五大原因。由于其发病隐匿,缺乏有效的筛查及早期诊断措施,致使其5年生存率仍徘徊在20%-30%,并有一个世界性的统计,每年约发生卵巢癌新病例225 500例,死亡140 200例。故对卵巢癌的发病机制、化疗耐药性及预后的研究至关重要。

六味地黄丸基于SIRT6/NF-κB信号通路对糖尿病伴肝损伤的保护作用

目的:从炎症角度探讨六味地黄丸对糖尿病伴肝损伤的保护机制。方法:选取自发性2型糖尿病动物模型db/db雄性小鼠18只,按空腹血糖(FBG)随机分模型组、六味地黄丸组(9. 75 g·kg-1·d-1,1次/d)、白藜芦醇组(42. 6 mg·kg-1·d-1,1次/d); 12只同窝野生型db/m小鼠,按FBG随机分正常组和六味地黄丸对照组(9. 75 g·kg-1·d-1,1次/d),正常组和模型组等量蒸馏水灌胃,各组给药16周后内眦静脉取血后处死小鼠,检测FBG,甘油三酯(TG)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)等变化,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织沉默信息调节因子6(SIRT6),核转录因子-κB p65(NF-κB p65),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠FBG,TG和ALT显著升高(P <0. 01),NF-κB p65,MCP-1,VCAM-1和ICAM-1蛋白表达显著升高(P <0. 01),SIRT6蛋白表达显著降低(P <0. 01);与模型组比较,六味地黄丸组和白藜芦醇组血FBG,TG显著降低(P <0. 01),NF-κB p65,MCP-1和VCAM-1蛋白表达明显降低(P <0. 05,P <0. 01),SIRT6蛋白表达明显升高(P <0. 05),改善小鼠肝组织的肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润。结论:六味地黄丸对糖尿病小鼠伴肝脏损伤有保护作用,其机制与调节血脂代谢,抑制炎症反应有关。

SIRT2对脓毒症小鼠远期抑郁的影响及其机制研究

目的探讨沉默信息调节基因2(SIRT2)对脓毒症小鼠远期抑郁的影响及其机制。方法腹腔注射内毒素(LPS)制备脓毒症小鼠模型,实验动物随机分成3组:对照组(Control)、脓毒症组(LPS)、干预组(AGK2+LPS)。通过悬尾实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验来评估小鼠抑郁状况,Western blot法检测小鼠脑内海马组织SIRT2和乙酰化核因子-κB(NF-κB)蛋白表达,免疫荧光法检测小鼠脑内海马组织Iba1活性,ELISA法测定海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平。结果脓毒症小鼠远期出现明显的抑郁相关表现,脑组织SIRT2蛋白表达水平降低,乙酰化NF-κB p65蛋白表达明显增加,小胶质细胞活化增加,脑组织内TNF-α和IL-1β水平增加(P<0.05,P<0.01)。SIRT2特异性抑制剂AGK2抑制脑组织内SIRT2的表达(P<0.01),而且乙酰化NF-κB p65蛋白表达、小胶质细胞活化和脑组织内TNF-α和IL-1β水平均进一步增加(P<0.05,P<0.01),远期抑郁相关表现也明显加重(P<0.01)。结论在脓毒症小鼠中,SIRT2表达下降抑制NF-κB去乙酰化,进而加重大脑组织炎症反应和远期抑郁。

补肾除湿方联合自体富血小板血浆技术治疗中老年早中期膝骨关节炎的效果

目的探讨补肾除湿方联合自体富血小板血浆(PRP)技术治疗中老年早中期膝骨关节炎(KOA)的效果。方法选取2020年5月至2021年5月中国中医科学院望京医院门诊收治的中老年早中期KOA患者123例,采用随机数字表法分为PRP组(41例)、补肾除湿方组(41例)和补肾除湿方联合PRP组(41例)。PRP组患者予玻璃酸钠注射液关节腔内注射+自体PRP关节腔内注射治疗;补肾除湿方组患者予玻璃酸钠注射液关节腔内注射+补肾除湿方口服治疗;补肾除湿方联合PRP组患者予玻璃酸钠注射液关节腔内注射+补肾除湿方口服+自体PRP关节腔内注射治疗。3组患者均连续治疗5周,比较3组患者的疗效、膝关节疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、膝关节活动度、膝关节稳定性评分(KSS评分)、膝关节肿胀评分(Lequesne评分)、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)评分、血清葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)和沉默信息调节因子1(SIRT1)水平及不良反应发生情况。结果补肾除湿方联合PRP组总有效率高于PRP组和补肾除湿方组[92.7%(38/41)比80.5%(33/41)、75.6%(31/41)],差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,补肾除湿方联合PRP组膝关节疼痛VAS评分低于PRP组和补肾除湿方组[(2.9±0.8)分比(4.0±1.0)、(4.1±1.1)分],膝关节活动度大于PRP组和补肾除湿方组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后3组患者KSS评分、Lequesne评分比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后,补肾除湿方联合PRP组WOMAC评分低于PRP组和补肾除湿方组[(17±7)分比(29±9)、(34±10)分],血清GPI水平低于PRP组和补肾除湿方组,SIRT1水平高于PRP组和补肾除湿方组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P=0.860)。结论补肾除湿方联合自体PRP技术治疗中老年早中期KOA疗效确切,能减轻疼痛,改善关节僵硬,提高关节活动度,降低血清GPI水平及升高血清SIRT1水平,且安全可靠。

Sirt6基因脑特异性敲除对老年小鼠大脑皮层的影响

目的研究衰老基因沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,Sirt6)敲除后对于老年小鼠大脑皮层的影响。方法构建Sirt6-flox转基因小鼠,利用Emx1-Cre工具鼠对小鼠脑组织进行特异性Sirt6基因敲除。根据基因分型,将11只野生型小鼠作为对照组(WT组),10只Sirt6基因敲除小鼠作为条件敲除组(cKO组)。对老年小鼠的体型和体质量进行测量,HE染色比较大脑皮层厚度;EdU标记分析大脑神经再生,Western blot检测衰老相关RNA结合蛋白HuR和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,同时检测皮层内组蛋白乙酰化水平。结果成功构建Sirt6脑组织特异性敲除小鼠,12月龄组实验中,与WT组小鼠脑组织面积[(2.07±0.22)cm^(2)]和皮层厚度[(970.56±80.91)μm]相比,Sirt6 cKO组脑组织面积[(1.61±0.14)cm^(2)]和皮层厚度[(822.88±53.94)μm]均偏小,均差异有统计学意义(均P<0.05);EdU掺入神经细胞实验显示,与WT组每100个室管膜区神经细胞中EdU掺入细胞数目[(10.29±1.93)个]相比,Sirt6 cKO组室管膜区神经细胞EdU掺入数目偏少[(4.75±1.48)个],且差异具有统计学意义(P<0.001);在17月龄组实验中,与WT组体型、体质量[(35.25±4.17)g]和脑组织面积[(1.98±0.18)cm^(2)]相比,Sirt6 cKO组小鼠体型偏小、体质量[(29.00±1.08)g]偏低且脑组织面积[(1.54±0.55)cm^(2)]偏小,差异具有统计学意义(均P<0.05)。这两个月龄段小鼠脑皮层蛋白中Caspase-3、HuR表达降低(t=2.95,5.38,均P<0.05),且H3K9ac、H3K56ac的表达增高(t=3.53,2.78,均P<0.05),但同源基因Sirt1表达无变化(t=1.26,P>0.05)。结论Sirt6的脑组织特异性缺失会导致老年小鼠大脑神经再生减少,衰老加剧,凋亡增加,这可能是导致其大脑皮层变薄,脑组织萎缩的原因,推测其分子机制与Sirt6敲除后乙酰化水平升高有关。

独活寄生汤口服联合富血小板血浆关节腔内注射治疗膝骨关节炎的临床研究

目的:探讨独活寄生汤口服联合富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)关节腔内注射治疗膝骨关节炎(kneeoste oarthritis,KOA)的临床疗效和安全性,并初步探讨其作用机制。方法:将104例KOA患者随机分为2组,每组52例。单纯PRP注射组采用PRP关节腔内注射治疗,每2周注射1次,3次为1个疗程,共2个疗程;联合治疗组在PRP注射的基础上联合独活寄生汤口服治疗,每天1剂,早晚分服,6周为1个疗程,共2个疗程。分别于治疗前以及治疗1个、2个疗程后,记录并比较2组患者膝关节疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分,西安大略和麦克马斯特大学(Western Ontario and McMaster Universities,WOMAC)骨关节炎指数,5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、β内啡肽(β-endorphin,β-EP)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、MMP-13血清含量,以及抗沉默因子1a(anti-silencing factor 1a,ASF1a)、沉默信息调节因子1(silent mating-type information regulation 2 homolog1,SIRT1)mRNA表达量,并观察并发症发生情况。结果:①膝关节疼痛VAS评分。2组患者的膝关节疼痛VAS评分均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(5.48±1.34)分,(2.27±0.48)分,(1.03±0.31)分,F=34.667,P=0.001;单纯PRP注射组:(5.63±1.27)分,(3.02±0.61)分,(2.51±0.28)分,F=14.657,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组膝关节疼痛VAS评分低于单纯PRP注射组(t=6.968,P=0.001;t=25.549,P=0.002)。②WOMAC骨关节炎指数。2组患者的WOMAC骨关节炎指数均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(43.25±10.16)分,(24.69±9.07)分,(17.42±8.15)分,F=24.368,P=0.001;单纯PRP注射组:(44.07±12.48)分,(30.74±7.65)分,(23.14±10.03)分,F=41.572,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组WOMAC骨关节炎指数低于单纯PRP注射组(t=3.677,P=0.001;t=3.192,P=0.002)。③5-HT血清含量。2组患者的5-HT血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(876.59±46.59)μg·L^(-1),(677.59±19.79)μg·L^(-1),(635.22±15.80)μg·L^(-1),F=246.729,P=0.001;单纯PRP注射组:(881.34±41.52)μg·L^(-1),(701.25±20.61)μg·L^(-1),(676.34±17.18)μg·L^(-1),F=158.776,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组5-HT血清含量低于单纯PRP注射组(t=5.971,P=0.001;t=12.686,P=0.002)。④β-EP血清含量。2组患者的β-EP血清含量均随时间呈升高趋势[联合治疗组:(157.68±24.49)ng·L^(-1),(233.69±34.27)ng·L^(-1),(276.58±31.78)ng·L^(-1),F=56.724,P=0.001;单纯PRP注射组:(160.05±23.18)ng·L^(-1),(198.57±30.50)ng·L^(-1),(237.64±35.39)ng·L^(-1),F=84.172,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组β-EP血清含量高于单纯PRP注射组(t=5.520,P=0.001;t=5.904,P=0.001)。⑤PGE2血清含量。2组患者的PGE2血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(368.18±25.16)μg·L^(-1),(254.48±16.27)μg·L^(-1),(211.35±15.09)μg·L^(-1),F=78.642,P=0.001;单纯PRP注射组:(371.05±22.79)μg·L^(-1),(285.69±13.78)μg·L^(-1),(246.79±14.63)μg·L^(-1),F=67.744,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组PGE2血清含量低于单纯PRP注射组(t=10.556,P=0.001;t=12.159,P=0.001)。⑥IL^(-1)β血清含量。2组患者的IL^(-1)β血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(24.51±7.69)ng·L^(-1),(10.24±4.79)ng·L^(-1),(8.17±2.15)ng·L^(-1),F=65.338,P=0.001;单纯PRP注射组:(23.15±9.16)ng·L^(-1),(15.04±5.33)ng·L^(-1),(12.34±3.07)ng·L^(-1),F=57.428,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组IL^(-1)β血清含量低于单纯PRP注射组(t=4.830,P=0.001;t=8.023,P=0.001)。⑦IL-6血清含量。2组患者的IL-6血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(40.24±14.17)ng·L^(-1),(13.52±3.50)ng·L^(-1),(11.10±2.24)ng·L^(-1),F=146.387,P=0.001;单纯PRP注射组:(41.97±12.01)ng·L^(-1),(19.52±4.27)ng·L^(-1),(16.28±3.59)ng·L^(-1),F=89.387,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组IL-6血清含量低于单纯PRP注射组(t=7.837,P=0.001;t=8.829,P=0.001)。⑧TNF-α血清含量。2组患者的TNF-α血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(36.78±11.25)ng·L^(-1),(14.15±6.05)ng·L^(-1),(10.15±3.97)ng·L^(-1),F=36.743,P=0.001;单纯PRP注射组:(34.97±10.11)ng·L^(-1),(18.52±7.10)ng·L^(-1),(15.26±4.88)ng·L^(-1),F=8.739,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组TNF-α血清含量低于单纯PRP注射组(t=3.365,P=0.001;t=5.858,P=0.001)。⑨LTB4血清含量。2组患者的LTB4血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(54.89±15.26)ng·L^(-1),(35.26±8.25)ng·L^(-1),(18.66±6.19)ng·L^(-1),F=26.432,P=0.001;单纯PRP注射组:(55.63±13.18)ng·L^(-1),(41.67±9.78)ng·L^(-1),(24.98±7.52)ng·L^(-1),F=18.731,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组LTB4血清含量低于单纯PRP注射组(t=3.613,P=0.001;t=4.679,P=0.001)。⑩ASF1amRNA表达量。2组患者的ASF1amRNA表达量均随时间呈降低趋势(联合治疗组:1.12±0.25,0.62±0.20,0.58±0.11,F=41.965,P=0.001;单纯PRP注射组:1.09±0.23,0.78±0.16,0.69±0.14,F=39.756,P=0.001);治疗1个、2个疗程后联合治疗组ASF1amRNA表达量低于单纯PRP注射组(t=4.505,P=0.001;t=4.455,P=0.001)。⑾SIRT1mRNA表达量。2组患者的SIRT1mRNA表达量均随时间呈升高趋势(联合治疗组:0.91±0.11,1.29±0.20,1.47±0.15,F=246.388,P=0.001;单纯PRP注射组:0.89±0.14,1.15±0.23,1.26±0.13,F=187.654,P=0.001);治疗1个、2个疗程后联合治疗组SIRT1mRNA表达量高于单纯PRP注射组(t=3.313,P=0.001;t=7.629,P=0.001)。⑿MMP-9血清含量。2组患者的MMP-9血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(785.59±132.14)ng·L^(-1),(574.63±89.77)ng·L^(-1),(402.83±51.24)ng·L^(-1),F=72.915,P=0.001;单纯PRP注射组:(790.17±127.68)ng·L^(-1),(611.25±81.65)ng·L^(-1),(457.85±47.19)ng·L^(-1),F=59.155,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组MMP-9血清含量低于单纯PRP注射组(t=2.176,P=0.032;t=5.696,P=0.001)。⒀MMP-13血清含量。2组患者的MMP-13血清含量均随时间呈降低趋势[联合治疗组:(806.77±145.76)ng·L^(-1),(651.14±91.66)ng·L^(-1),(415.49±38.72)ng·L^(-1),F=16.728,P=0.001;单纯PRP注射组:(813.28±150.07)ng·L^(-1),(707.29±88.57)ng·L^(-1),(468.35±33.50)ng·L^(-1),F=14.365,P=0.001];治疗1个、2个疗程后联合治疗组MMP-13血清含量低于单纯PRP注射组(t=3.177,P=0.002;t=7.445,P=0.001)。⒁并发症。单纯PRP注射组4例出现轻度局部肿胀不适,联合治疗组1例出现轻度局部肿胀不适,均未经任何处理肿胀自行消失。联合治疗组1例出现胃肠道反应,调整饮食后胃肠道反应消失。2组并发症发生率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.177,P=0.674)。结论:独活寄生汤口服联合关节腔内注射PRP治疗KOA,安全可靠,能有效缓解疼痛和促进膝关节功能恢复,疗效优于单纯关节腔内注射PRP治疗,其作用机制可能与其能抑制关节炎症反应和保护关节软骨有关。

WTAP通过调控SIRT1诱导小胶质细胞M1型极化的研究

目的探讨Wilms肿瘤抑制因子1相关蛋白(Wilms’tumor 1-associating protein,WTAP)在小胶质细胞活化调控中的作用及其可能的分子机制。方法用100 ng/mL IFNγ联合1μg/mL LPS诱导HMC3小胶质细胞M1极化作为实验组,以未处理的细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中促炎细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的表达,在HMC3小胶质细胞中转染RNAi慢病毒敲低WTAP,使用实时荧光定量PCR和Western blot检测敲低效率,Western blot检测敲低HMC3小胶质细胞WTAP后促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达,Western blot检测敲低WTAP后HMC3小胶质细胞沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating-type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、COP1、USP18、EP4、促炎转录因子和部分炎症相关通路受体的表达,使用SIRT1激动剂SRT1720和SIRT1抑制剂EX527分别处理空载病毒组和敲低WTAP组HMC3细胞后,Western blot检测c/EBPβ的表达。结果与空白对照组比较,100 ng/mL IFNγ联合1μg/mL LPS诱导的HMC3细胞IL-6、IL-1β、TNF-α表达上调(P<0.05)。M1极化的HMC3小胶质细胞中WTAP高表达(P<0.05)。敲低WTAP后,HMC3细胞促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达降低(P<0.05),SIRT1表达升高(P<0.05),且促炎转录因子c/EBPβ表达降低(P<0.05)。SIRT1激动剂SRT1720使空载病毒组相对高表达的c/EBPβ降低(P<0.01)。SIRT1抑制剂EX527使敲低WTAP的HMC3细胞相对低表达的c/EBPβ升高(P<0.05)。结论WTAP促进HMC3小胶质细胞M1极化,其作用机制可能与通过调控SIRT1表达进而影响c/EBPβ信号通路有关。

基于SIRT6/NF-κB信号通路研究复方桃仁丹参汤对急性肝损伤大鼠的保护作用

目的:研究复方桃仁丹参汤对四氯化碳(CCl4)诱导急性肝损伤大鼠的保护作用,并初步探索其作用机制。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型对照组、联苯双酯0.1 g/kg组、复方桃仁丹参汤12 g/kg、6 g/kg、3 g/kg组,每组10只。除正常对照组和模型对照组给予相应体积蒸馏水灌胃,其余各组给予相应剂量的药物干预,灌胃体积7.5 mL/kg,每天2次,连续10 d。末次给药后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射25%CCl4溶液(2 mL/kg),建立急性肝损伤模型。禁食不禁水16 h后,摘除眼球,收集血液和肝组织。生化法检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的活性或含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测肝组织中沉默信息调节因子6(SIRT6)、p-核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达情况。苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病变情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组血清中ALT、AST、ALP、TBIL、γ-GT活性及MDA含量明显升高(P<0.05或P<0.01),T-SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.01),肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显升高(P<0.01),SIRT6蛋白表达明显下调(P<0.01),p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型对照组比较,复方桃仁丹参汤呈剂量依赖性地降低大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBIL、γ-GT活性及MDA含量,增加T-SOD、GSH-Px活性,降低肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平(P<0.05或P<0.01),上调SIRT6蛋白表达,下调p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.01)。HE染色显示复方桃仁丹参汤能不同程度的改善肝组织病变。结论:复方桃仁丹参汤对CCl4诱导的急性肝损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与调控SIRT6/NF-κB信号通路和抑制氧化应激、炎症反应有关。

甘草次酸对SIRT6介导的小鼠肠黏膜更新的影响

目的:探讨沉默信息调节因子蛋白-6(SIRT6)介导的肠黏膜更新变化及甘草次酸对其的影响。方法:采用SIRT6抑制剂小鼠模型,HE染色观察小肠黏膜病理变化;Q-PCR和Western-blot检测小肠组织SIRT6、小肠上皮细胞标志物(Ck20、Lyso和Synap)及凋亡蛋白(Caspase3)的基因、蛋白变化。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠肠绒毛及隐窝高度显著减少(P<0.01);Ck20、Caspase3的基因及蛋白表达显著上调(P<0.01),Synap、Lyso的基因及蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组相比,甘草次酸10、20 mg/kg可显著增加小肠绒毛和隐窝高度(P<0.01),甘草次酸20 mg/kg显著上调小肠SIRT6基因、蛋白表达(P<0.01),并逆转上述肠黏膜细胞标记物的基因及蛋白变化(P<0.05或P<0.01)。结论:SIRT6抑制可导致肠黏膜形态受损,甘草次酸可促进肠黏膜修复,其机制与上调SIRT6表达并促进肠黏膜细胞更新有关。

漆黄素激活SIRT1/Nrf2信号通路改善急性呼吸窘迫综合征大鼠铁死亡的研究

目的 探究漆黄素通过激活沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠铁死亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组以及漆黄素1、2、4 mg/kg组和漆黄素(4 mg/kg)+SIRT1抑制剂(10 mg/kg EX-527)组,每组各14只。漆黄素、SIRT1抑制剂于造模前30 min ip给药,对照组、模型组ip给予等量生理盐水。除对照组外,其余各组大鼠均采用气管内滴注脂多糖法建立急性呼吸窘迫综合征模型。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;测定肺组织湿/干质量比(W/D);HE染色观察肺组织病理改变;检测肺组织中铁死亡相关指标活性氧(ROS)、铁、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平;免疫印迹法检测肺组织中SIRT1/Nrf2信号通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较,漆黄素各剂量组BALF中IL-6、TNF-α水平降低,肺组织W/D比值降低,肺组织中ROS、铁、MDA水平降低,GSH水平升高,肺组织中SIRT1、核Nrf2蛋白水平升高(P<0.05),且4 mg/kg漆黄素干预的改善效果更显著;在4 mg/kg漆黄素干预的基础上增加SIRT1抑制剂后,漆黄素的改善作用被削弱。结论 漆黄素对脂多糖诱导的急性呼吸窘迫综合征有保护作用,能够改善铁死亡,可能是通过激活SIRT1/Nrf2信号通路实现的。