CD44抗体靶向绿色荧光蛋白质粒导入系统的构建及其特异性转染大鼠肾小管上皮细胞的观察

目的:以葡萄球菌A蛋白-多聚赖氨酸交联物(SPA-PLL交联物)为“桥”,构建CD44抗体靶向的质粒导入系统,观察该导入系统能否特异地将质粒导入细胞中并使之有效表达。方法:以免疫组织化学染色观察大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表面CD44受体的表达;以DNA凝胶阻滞实验测定SPA-PLL交联物与绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C1)结合的适宜质量比;以酶联中和抑制法测定SPA-PLL交联物与CD44抗体结合的适宜质量比;将SPA-PLL交联物与CD44抗体和pEGFP-C1质粒以适宜的质量比混合即可组装成CD44抗体靶向pEGFP-C1质粒复合物;将该复合物转染NRK52E细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达。结果:NRK52E细胞表面可表达构建型CD44分子;不同浓度的SPA-PLL交联物对pEGFP-C1质粒电泳的抑制作用不同,SPA-PLL交联物与pEGFP-C1质粒结合的适宜质量比为1∶0·89;SPA-PLL交联物呈浓度依赖性抑制CD44抗体与包被的SPA结合,SPA-PLL交联物与CD44抗体结合的适宜质量比为1∶0·5;CD44抗体靶向的pEGFP-C1质粒复合物对NRK52E细胞的转移效率为10%-25%并具有CD44抗体的特异性。结论:CD44抗体靶向的质粒导入系统的组装过程简单方便,各组份间为非共价结合;该靶向导入系统能将pEGFP-C1质粒特异性地导入NRK52E细胞中,并使该质粒在细胞中有效表达。

磁共振单克隆抗体免疫靶向对比剂McAb-PMP的制备

目的 探讨磁共振单克隆抗体靶向对比剂的制备方法。方法 以葡聚糖为载体 ,采用氧化法制备靶向磁性微粒。结果 制备的磁性纳米微粒与单抗相比保持了较高的结合活性和免疫活性。结论 合成CEA单克隆抗体标记磁性微粒 ,保证了结合活性免疫活性 ,为活体动物实验奠定了基础。

抗体靶向寡核苷酸复合物及SPA-PLL交联物对培养细胞的毒性作用

目的评价新型抗体靶向基因导入系统及其核心组分：葡萄球菌A蛋白．多聚赖氨酸交联物（SPA-PLL交联物）对细胞的毒性作用。方法将SPA-PLL交联物、CD44抗体和反叉寡核苷酸以适宜的质量比混合即可组装成抗体靶向寡核苷酸复合物；采用噻唑蓝比色法测定该靶向复合物或SPA-PLL交联物对培养细胞存活率的影响。结果该靶向复合物和交联物在低浓度范围内（0-62．5μg／mL）对细胞毒性作用较小，在高浓度（〉125μg／mL）时对细胞毒性作用显著增强；游离PLL对细胞的毒性作用较强，但游离SPA无毒性作用。结论抗体靶向寡核苷酸复合物和SPA-PLL交联物在常用浓度范围内对转染细胞无毒性作用。

PD-1靶向性肿瘤治疗抗体药物在消化道肿瘤中的应用价值

目的探讨PD-1靶向性肿瘤治疗抗体药物在消化道肿瘤中的应用价值。方法采用随机、对照与双盲研究方法,选择食管癌晚期患者116例作为本次研究的对象,根据随机数字表法原则分为观察组与对照组,各58例。对照组给予常规化疗,观察组在对照组治疗的基础上给予PD-1靶向治疗,2组都治疗观察4个周期。结果观察组与对照组的总有效率为65.5%和48.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。2组均有不同程度的不良反应,主要以心脏毒性、胃肠道反应、皮疹、白细胞减少等为主,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后观察组的社会关系、环境、生理、心理等领域评分都明显高于对照组(P<0.05)。随访至今,观察组与对照组中位总生存期为25月(18~32月)、33月(27~40月),观察组长于对照组(log-rankχ~2=32.426,P<0.05)。结论 PD-1靶向性肿瘤治疗抗体药物在食管癌中的应用能提高治疗效果,且不增加不良反应,可延长患者的生存时间,改善患者的生活质量。

抗肿瘤抗生素抗体靶向药物研究新进展

新近研究发现,卡里奇霉素、力达霉素等抗肿瘤抗生素对某些靶点显示高度活性,对癌细胞具有极强的杀伤作用,可以作为高效"弹头"药物,用于构建抗体靶向药物,包括化学免疫偶联物和融合蛋白。抗体靶向药物由于体内分布的特异性及作用的专一性,具有强大的抗肿瘤优势。本文主要对几类抗肿瘤抗生素抗体靶向药物的构建及作用特点等进行综述,并初步展望其未来研究方向。

抗体靶向超抗原的抗肿瘤作用研究进展

作为一种强大的T细胞激活剂,超抗原具有激活T细胞杀伤HLA-DR+肿瘤细胞的能力,但这种杀伤作用无特异性。抗体靶向超抗原通过抗肿瘤抗体与超抗原偶联,既具有超抗原活性,又具有肿瘤靶向性,从而可以选择性地结合到目标细胞,进行有效的特异性杀伤,因此,抗体靶向超抗原在肿瘤的生物治疗领域具有广泛的应用前景。

单克隆抗体靶向药物联合化疗对结直肠癌患者免疫功能的影响

目的观察单克隆抗体靶向药物联合化疗对结直肠癌患者免疫功能的影响。方法 65例结直肠癌患者分成两组化疗组(35例)和单克隆抗体靶向药物联合化疗组(30例),健康体检者(30例)为对照组,流式细胞术检测2组患者和对照组外周血淋巴细胞亚群的表达。结果化疗组和靶向药物联合化疗组患者的CD3、CD4值,化疗组CD4/8的比值均低于对照组(P<0.05);两组的CD8、NK细胞、CD19值与对照组比较无统计学意义(P>0.05);2组的淋巴细胞亚群值比较均无统计学意义(P>0.05)。靶向药物联合化疗组患者治疗有效率63%,化疗组患者治疗有效率23%。结论单克隆抗体靶向药物联合化疗在增加疗效的同时并未加重抑制结直肠癌患者的细胞免疫功能。

单克隆抗体靶向抗肿瘤药的临床评价

伴随生态环境、遗传基因、生活和精神因素的改变,肿瘤已经成为威胁中国人健康和生命的"头号杀手"。其发病率和病死率逐年攀升,成为人类所必须应对的一项严峻挑战,同时也为新药的研发和问世带来了契机。鉴于抗肿瘤药作用的非特异性和非专一性,其在带来化疗效果和临床获益的同时,也给人体带来各种器官损伤和药品不良反应。因此,必须提高用药的安全意识,把防范风险的意识前移,从药品临床应用的各个方面进行反思,防微杜渐,以追求药物治疗的最大获益。

儿童复发霍奇金淋巴瘤的治疗及抗体靶向治疗进展

随着诊治水平的不断进展，国际上儿童霍奇金淋巴瘤（hodgkin lymphoma，HL）的治疗和管理已经进入了一个崭新时期，当代的治疗与以前传统的治疗方法比较已经明显改进，普遍采用了适于危险度、基于治疗反应分层治疗的策略以维持高疗效同时令其近、远期并发症最小化。在发达国家约95％的早期HL及80％以的上中、晚期HL患儿得以长期存活，目前已认为HL是一组恶性程度相对低、可治愈的肿瘤。

放射性核素标记单克隆抗体靶向治疗血液系统恶性肿瘤

血液系统恶性肿瘤,包括急性白血病（AL）、慢性白血病、恶性淋巴瘤等,是严重威胁人类健康和生命的疾病。虽然骨髓移植是目前根治恶性血液疾病最先进的方法,但由于人类白细胞抗原（HLA）配型成功几率小,无法满足临床的需要,而且并不是所有的血液系统恶性肿瘤患者都可以接受骨髓移植,所以目前对血液系统恶性肿瘤的治疗仍以传统的放疗和化疗为主,再辅以分子靶向治疗。

CD71抗体靶向转移系统的构建及对细胞的生长抑制作用

目的:构建肝癌靶向性的Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统,并研究其在体外对肝癌细胞的生长抑制作用。方法:体外培养抗转铁蛋白受体(CD71)抗体的杂交瘤细胞株D2C5.6,诱导裸鼠产生腹水并纯化,以水溶性碳二亚胺介导CD71抗体与多聚左旋赖氨酸(PLL)的连接,再与Survivin反义RNA/HSP70双基因载体按比例混匀,得到-PLL-载体系统;转染人肝癌细胞株HepG2后,采用MTT法观察细胞的生长情况。结果:分析型酸性尿素凝胶电泳实验证实抗CD71抗体与PLL成功连接;MTT试验显示,Ab-PLL-Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统处理的HepG2细胞生长明显受到抑制。结论:CD71抗体介导的肝癌靶向转移系统已经成功构建,为肝癌的基因治疗提供了一定的实验基础。

抗磷脂抗体靶抗原-β_2糖蛋白的原核表达和鉴定

目的 构建 β2 糖蛋白 (β2 - GPI)的原核表达载体并诱导其表达。方法 利用 PCR技术从 β2 - GPI昆虫表达载体中扩增出编码β2 - GPI目的 DNA片段 ,将其插入 GST融合表达载体 p GEX- 2 T多克隆位点 ,以 IPTG诱导 GST融合 β2 - GPI的表达。结果 凝胶电泳显示昆虫表达载体的 PCR扩增产物的分子量大小与目的片段大小相符。对重组质粒 (p GEX- 2 T- β2 - GPI)分析表明 ,插入片段的序列与发表的 β2 - GPI基因编码序列一致。在 IPTG的诱导下 ,BL 2 1重组菌高效表达出一个分子量约为 6 4 k Da产物 ,与预期相符。结论 β2 - GPI编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T。

MR抗体靶向探针成像的研究进展

心血管系统疾病及恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病。有临床症状的病人通常已处于疾病的中晚期阶段,不利于疾病的治疗,而且病人的预后不容乐观。因此,早期诊断并早期治疗对于疾病的发生、发展及预后至关重要。传统的放射学检查方法尚无法在疾病的早期阶段进行诊断。而分子成像在疾病早期诊断方面显示出巨大的潜力,就近年来MR靶向抗体探针在心血管系统疾病及肿瘤的分子成像研究中的合成、应用及进展予以综述。

MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物对胃癌治疗的研究

目的探讨MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物治疗人胃癌裸鼠移植瘤的疗效。方法采用裸鼠BGC-823胃腺癌动物模型,每组6只,随机分配至设立的生理盐水对照组、载体材料组、紫杉醇常规药物组、非靶向紫杉醇纳米药物组、MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组。采用尾静脉给药方式,动态观察并测定肿瘤的体积、瘤质量抑瘤率,评价治疗效果,并观察实验期间动物的全身情况及相对体质量变化,评价毒副作用。结果 MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组人胃癌移植瘤表现出明显的体积抑制和瘤质量抑制,抑瘤率分别为84.6%和84.5%,显著高于紫杉醇常规药物组(45.1%,48.7%)和非靶向紫杉醇纳米药物组38.7%,42.2%),而且MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组的小鼠体质量与其它各组比较相对平稳,且饮食活动正常,对正常组织的毒副作用明显减轻。结论 MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物具有良好的高效低毒体内抗肿瘤作用,作为一种新型药物载体显示了良好的应用前景。

M2抗体人源靶抗原三联体的克隆表达及其在原发性胆汁性肝硬化中的应用

目的 设计克隆表达抗原蛋白三联体 BPO,利用纯化的重组 BPO,建立原发性胆汁性肝硬化 ( primary biliarycirrhosis,PBC)特异性免疫学诊断方法。方法 利用基因工程方法克隆表达 M2抗原及其三联体 BPO,并加以鉴定。纯化BPO,建立 ELISA法。应用 ELISA法检测 1 7例 PBC患者血清 M2抗体 ,以 1 67例非 PBC患者和 1 2 2 5例健康人作对照。结果 1 7例临床诊断为 PBC的患者 ,M2抗体均为阳性 ,而对照组 M2抗体均为阴性。结论 本法检测 M2抗体有较好的敏感性及特异性 ,为 PBC的临床诊断提供了有效手段。

特异性靶抗原的抗中性粒细胞胞质抗体的临床价值研究

目的研究不同特异性靶抗原的抗中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)阳性患者与疾病诊断的关系。方法回顾性分析四川大学华西医院2017年1月至2019年1月652例ELISA检测不同靶抗原的ANCA结果为阳性患者的临床资料。结果652例ANCA阳性患者对应的单个靶抗原抗体阳性率分别为:抗髓过氧化物酶(MPO)抗体52.91%(345/652),抗蛋白酶3(PR3)抗体8.59%(56/652),抗杀菌/通透性增加蛋白(BPI)抗体4.14%(27/652),抗弹性蛋白酶(EL)抗体3.37%(22/652),抗乳铁蛋白(LF)抗体4.91%(32/652),抗组织蛋白酶G(Cat-G)抗体0.77%(5/652)。抗MPO抗体对应的主要疾病为ANCA相关性血管炎88.28%(211/239),ANCA相关性肾炎12.97%(31/239),系统性红斑狼疮(SLE)6.69%(16/239)(因疾病统计有重叠,故阳性率超过100.00%);抗PR3抗体对应的主要疾病为ANCA相关性血管炎75.86%(22/29),结缔组织病13.79%(4/29),周围神经炎6.90%(2/29);抗BPI抗体对应的主要疾病为ANCA相关性血管炎66.67%(6/9);抗LF抗体对应的主要疾病为SLE92.31%(24/26),狼疮性肾炎73.08%(19/26);抗EL抗体对应的主要疾病为ANCA相关性血管炎30.77%(4/13),SLE 30.77%(4/13),肺间质纤维化30.77%(4/13)。肺部和肾脏是ANCA各类靶抗原抗体阳性患者常累及的器官。结论抗Cat-G抗体阳性率非常低,临床开展应用价值有限;抗MPO抗体、抗PR3抗体、抗BPI抗体、抗EL抗体和抗LF抗体主要与ANCA相关性血管炎和自身免疫性疾病(如SLE、结缔组织病、狼疮性肾炎等)有关,可为疾病诊断提供依据。

抗体偶联药物维迪西妥单抗对HER-2不同表达水平胃癌细胞抑制效应的体外研究

目的 评估抗体偶联药物维迪西妥单抗(RC48)对不同HER-2蛋白表达水平胃癌细胞的体外抑制效应。方法 使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting技术结合细胞免疫荧光共聚焦显微镜,检测胃癌细胞系(NCI-N87、MKN45、MKN7、HGC27、MGC803)HER-2表达情况及细胞定位。随后对上述不同HER-2表达程度的细胞系分别经不同浓度RC48处理,CCK-8技术检测杀伤效应并计算半数抑制浓度(IC50),采用qRT-PCR和Western blotting技术检测胃癌细胞经RC48处理后,不同胃癌细胞株的HER-2 mRNA及蛋白质表达情况。结果 所检测的胃癌细胞系中,NCI-N87细胞的HER-2表达量最高,其余细胞系均呈HER-2低表达,荧光共聚焦显示HER-2蛋白主要为细胞膜定位。RC48在体外可明显抑制HER-2强阳性胃癌细胞(NCI-N87)增殖,48 h及72 h的IC50分别为0.32μg/ml及2.359e-010μg/ml,该效应呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性;而在HER-2低表达胃癌细胞(MKN45、MKN7、HGC27、MGC803)中,RC48同样显示了一定的体外抑制肿瘤细胞增殖的效应,48 h的IC50分别为331.90、24.20、35.32及9.449μg/ml。不论基线时的HER-2蛋白表达高低,经RC48处理后胃癌细胞的HER-2蛋白表达量均呈明显下降。结论 RC48对体外培养的HER-2不同表达胃癌细胞均显示了抑制增殖的效应,呈时间依赖性和剂量依赖性。RC48作用后可抑制胃癌细胞表面的HER-2蛋白表达,且该效应并不完全依赖于胃癌细胞基线HER-2蛋白表达量的高低。

对消化道肿瘤行PD-1靶向性肿瘤治疗抗体药物的效果及不良反应发生率分析

目的:分析PD-1靶向性肿瘤治疗抗体药物应用在消化道肿瘤中的效果以及不良反应发生情况。方法:选择2019年4月至2021年4月在本院进行消化道肿瘤治疗的70例患者作为此次研究的对象,在电脑随机分组方法的指导下,患者被分为参照组、研究组,35例/组,常规方式治疗用于参照组,在此基础上研究组采取PD-1靶向抗体药物开展治疗,分析对比两组治疗效果、生活质量以及不良反应发生率。结果:较参照组而言,研究组治疗有效率更高(P<0.05);较参照组而言,研究组生活质量评分更高(P<0.05);较参照组而言,研究组不良反应发生率更低(P<0.05)。结论:在消化道肿瘤的治疗过程中,采用PD-1靶向性肿瘤治疗抗体药物,临床效果较为显著,用药后的不良反应发生率较低,可以有效延长患者的日常生存时长,对患者的生活质量情况改善有显著价值。

抗体靶向性和高增强分辨率的多重散射无花果式纳米造影剂的构建及验证

目的在有限纳米尺寸内最大化增强超声造影剂成像对比度,同时,通过特异性靶向抗体修饰增强成像准确度。方法构建以磷脂纳米囊泡为外壳,沿内壁负载中空自解离二氧化硅纳米粒子,表面修饰葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)特异性抗体的多重散射“无花果”式纳米造影剂,并在体内外模型中探究该纳米造影剂成像准确度和对比度。结果体外脱气水指套模型成像结果显示,抗体靶向和非靶向的纳米造影剂成像效果相当,但二者的成像效果均优于声诺维(Sonovue);体内成像结果显示,抗体靶向的纳米造影剂成像效果优于非靶向造影剂,且二者均优于Sonovue。结论抗体靶向的多重散射“无花果”式纳米造影剂兼具高靶向性和高增强分辨率特性。