基于靶细胞萃取法的增液汤降糖作用的药效物质基础研究

目的采用靶细胞萃取法联合质谱手段,通过靶细胞萃取法遴选增液汤发挥降糖作用的物质基础。方法以增液汤提取物为研究对象,选取与增液汤降糖效应相关的关键靶细胞HepG2细胞、C2C12细胞和MIN6细胞,采用HPLC-Q-TOF-MS/MS对增液汤与相应靶细胞的结合成分进行分析,通过对比空白组、模型组、给药组的总离子流图,提取离子流对比文献与数据库鉴定增液汤降糖作用的潜在药效成分。结果遴选增液汤中能与相关靶细胞结合的活性成分,发现其中能和HepG2肝癌细胞结合的成分有4个,分别为Aucubin、Harpagide、p-coumaric acid、Harpagoside,4个成分均来自于君药玄参。有5个成分能和C2C12骨骼肌细胞结合,其中有4个成分来自于君药玄参,分别为Harpagide、p-coumaric acid、Cinnamic acid、Harpagoside;有1个成分Catalpol来源于生地。有4个成分能和MIN6胰岛细胞结合,分别为Aucubin、Harpagide、p-coumaric acid、Harpagoside,这4个成分均来自于君药玄参。结论Aucubin、Harpagide、p-coumaric acid、Harpagoside、Cinnamic acid、Catalpol可能为增液汤发挥降糖作用的潜在物质基础。

靶细胞萃取联用UPLC/Q-TOF-MS方法分析川芎中的药效成分

目的:建立靶细胞萃取联用UPLC/Q-TOF-MS技术分析川芎中药效成分的方法。方法:选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞,萃取川芎中的药效成分。在细胞对数生长期加入川芎供试品溶液,孵育2 h收集细胞并用液氮迅速冷冻,反复冻融使细胞破碎,离心得到萃取药物后的细胞样品。采用UPLC/Q-TOF-MS对其进行检测,分析川芎化学成分中与细胞结合的物质,即川芎中与细胞结合进一步发挥药效的可能有效成分。结果:从川芎中筛选到2个可能的药效成分,分别为阿魏酸和藁本内酯。结论:本研究建立的方法可以通过化合物与细胞中靶点(受体、通道、酶等)之间的特异性结合作用,筛选出川芎中药效活性成分,从而为药物活性成分的筛选以及药物机制的研究提供思路,同时推动了中药安全性的快速发展。

基于靶细胞萃取的延胡索药效成分的筛选和含量测定

目的建立靶细胞萃取延胡索Corydalis Rhizoma中的药效成分并采用HPLC法进行定量分析的方法。方法选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞,萃取延胡索中的药效成分。在细胞对数生长期加入延胡索冻干粉,孵育2 h收集细胞并用液氮裂解,得到萃取药物后的细胞样品。采用UPLC/Q-TOF-MS对其进行检测,分析萃取进入细胞内的物质,即延胡索中进入细胞进一步发挥药效的有效成分。最后,用HPLC法对进入细胞中的有效成分进行定量分析。结果 HUVEC萃取到5个药效成分,分别为延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素、盐酸小檗碱、去氢延胡索甲素。同时建立5个成分的含量测定方法。结论靶细胞萃取的分析方法可以通过化合物与细胞之间的相互作用,反映出药物中发挥药效的活性物质,在中药复杂体系的研究中起到重要的作用。