鞘氨醇激酶-1调控ERK和NF-κB通路促进HT-29细胞的增殖和侵袭

目的探讨鞘氨醇激酶-1(Sphk1)对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和侵袭转移的影响及其作用机制。方法采用(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)诱导人结肠癌HT-29细胞Sphk1的活化和表达,N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)抑制Sphk1的活化和表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测Sphk1的活性,Western杂交检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 PMA和DMS能分别有效地诱导和抑制HT-29细胞Sphk1活性和蛋白的表达;同时,PMA能促进细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡;DMS则抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞的凋亡。诱导Sphk1的活化以及表达可促进细胞ERK、p-ERK和NF-κBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,而抑制Sphk1则抑制ERK、p-ERK和NF-κBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论 Sphk1可能是通过激活ERK和NF-κB通路,上调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡。

鞘氨醇激酶-1、C-反应蛋白对急性胰腺炎严重程度的预测价值

目的比较C-反应蛋白(CRP)和鞘氨醇激酶-1(SphK1)在预测急性胰腺炎(AP)严重程度方面的价值。方法选取2012年12月—2013年7月收治的30例AP患者,分为轻型AP(MAP)组17例和重型AP(SAP)组13例,另外纳入10例健康者作为健康对照组。AP患者在症状发生后、健康者在被选入组后48 h、72 h、5 d、7 d时分别检测血清CRP、外周血白细胞中SphK1 mRNA及其活性。结果 MAP组和SAP组患者血清CRP的水平、外周血白细胞中SphK1 mRNA、SphK1活性4个时间都高于健康对照组(P<0.05),但血清CRP的含量在MAP组和SAP组之间均无统计学差异(P>0.05)。48 h、72 h、5 d时,SAP组外周血白细胞中SphK1 mRNA、SphK1活性都高于MAP组(P<0.05);7 d时SAP组和MAP组的SphK1 mRNA、SphK1活性均无统计学差异(P>0.05)。在48 h时,SphK1的诊断灵敏度和诊断准确性最高,而且ROC曲线下面积高达0.946。结论在早期预测AP严重程度方面,与血清CRP相比,测定外周血白细胞中的SphK1是一个更好的方法。

子宫内膜癌鞘氨醇激酶-1与1-磷酸鞘氨醇的表达和意义

目的探讨鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase 1,SphK1)与1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)在子宫内膜癌的表达和意义。方法收集正常子宫内膜和子宫内膜癌患者血浆,行子宫全切手术的子宫内膜癌和子宫肌瘤旁组织,ELISA法检测血浆或组织匀浆液S1P的表达,Western blot法检测组织SphK1的表达,组织SphK1激酶活性定量检测试剂盒测定SphK1酶活性。结果和正常对照组相比,子宫内膜癌患者血浆S1P的水平和组织S1P的表达明显增加(P<0.01),子宫内膜癌SphK1酶活性约是正常子宫组织的2.6倍。结论被激活的SphK1/S1P信号通路可能参与子宫内膜癌的发生发展。

siRNA下调鞘氨醇激酶-1对结肠癌LOVO细胞凋亡和侵袭的影响及其机制的研究

目的研究siRNA下调鞘氨醇激酶-1(Sphk1)的表达对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭以及ERK和p38通路的影响。方法采用siRNA抑制Sphk1的表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,Western杂交检测蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞Sphk1 mRNA表达,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 Sphk1 siRNA显著抑制Sphk1 mRNA和蛋白表达,并可诱导细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。抑制Sphk1的表达可降低ERK和磷酸化ERK蛋白的表达,并促进p38和磷酸化p38蛋白的表达,同时可抑制细胞MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论抑制Sphk1可能是通过抑制ERK并激活p38 MAPK通路,下调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭并促进细胞的凋亡。

鞘氨醇激酶-1激活ERK通路介导人结肠癌细胞株LoVo侵袭与迁移的实验

目的研究Sphk1对人结肠癌LoVo细胞侵袭与迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法将人结肠癌LoVo细胞分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组。以Phorbol 12-myristate 13-ace-tate(PMA)为Sphk1激活剂(终浓度为100 nM),N,N-dimethyl-D-eryt-hro-sphingosine(DMS)为Sphk1抑制剂(终浓度为50μM),NaCl(终浓度为0.9%)为空白试剂处理LoVo细胞24 h后,用Transwell Boyden小室模型测定LoVo细胞的相对侵袭率与迁移率;用Western blot方法测定细胞Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2蛋白水平的变化;用ELISA方法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9及uPA的蛋白含量;用半定量RT-PCR检测细胞中MMP-2、MMP-9和uPA的mRNA水平。结果 Sphk1激活剂可促进LoVo细胞侵袭与迁移,同时明显增强LoVo细胞中Sphk1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达,并促进MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。Sphk1抑制剂则抑制LoVo细胞侵袭与迁移,同时抑制Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2的蛋白表达,并抑制MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。结论 Sphk1可促进人结肠癌细胞株LoVo细胞的侵袭与迁移,其机制可能与激活ERK1/2信号通路从而促进MMP-2、MMP-9及uPA mRNA表达与蛋白分泌有关。

鞘氨醇激酶-1在结肠癌中的作用研究进展

鞘氨醇激酶(Spk)是一种新近发现的脂类激酶。近年来的研究逐渐阐明了Spk结构特征及其功能,并发现Spk1对肿瘤尤其是结肠肿瘤的发生发展具有促进作用。抑制Spk1不但能促进肿瘤细胞的凋亡,还能提高结肠肿瘤对化疗药物的敏感性。

HT-29人结肠癌细胞缺氧对鞘氨醇激酶-1表达的影响

目的:研究体外缺氧对HT-29人结肠癌细胞鞘氨醇激酶-1(SK-1)表达及细胞迁移的影响。方法:模拟体外缺氧环境,应用RT-PCR及Western blot检测缺氧对HT-29细胞SK-1表达的影响,以及观察细胞迁移能力的情况。结果:缺氧状态下HT-29细胞SK-1 mRNA及蛋白表达增强,细胞迁移能力增强;且U0126具有抑制SK-1表达增强的作用。结论:缺氧状态下HT-29细胞迁移能力和SK-1基因表达存在一定关系。

siRNA靶向沉默鞘氨醇激酶-1对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响

目的探讨siRNA靶向沉默SPHK1基因对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响。方法使用脂质体介导的方法转染人前列腺细胞株PC-3细胞,通过RT-PCR和Western-blot方法分别检测特异性siRNA对SPHK1基因在mRNA和蛋白水平上的沉默效果,CCK-8法测定细胞生长曲线并观察细胞增殖被抑制情况,Annexin V-PI法检测细胞凋亡情况,采用Transwell小室法检测细胞在侵袭力方面的变化。结果经SPHK1siRNA转染后,PC-3细胞中SPHK1的表达均低于阴性对照组(NC)和空白组(P<0.05);并且SPHK1siRNA抑制细胞的增殖能力,使其凋亡率增加,侵袭力降低。结论通过抑制前列腺癌PC-3细胞SPHK1基因的表达,抑制细胞增殖并降低侵袭力,使其凋亡增加,显示出在前列腺癌的发生发展中SPHK1基因发挥着重要的作用。

真武汤调节鞘氨醇激酶1-磷酸鞘氨醇信号通路抗阿霉素肾病大鼠肾损伤的作用研究

目的:研究真武汤对阿霉素肾病(Adriamycin Nephropathy,AN)模型大鼠鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase 1,SphK1)-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)信号分子的影响,探讨真武汤治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:常规检测各试验组动物血脂、血浆白蛋白、24小时尿蛋白含量;实时聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RTPCR)检测肾组织中SphK1基因表达;免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织中SphK1蛋白表达;液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测SphK1、S1P活性。结果:模型组大鼠血脂水平、24小时尿蛋白含量显著升高,血浆白蛋白水平显著降低(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组血脂水平、24小时尿蛋白含量明显降低,血浆白蛋白水平明显升高(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、基因和蛋白表达及S1P含量明显下降(P<0.05),各治疗组之间差异无统计学意义。结论:真武汤可减少AN模型大鼠肾组织的SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量,改善其蛋白尿、血脂及血浆白蛋白水平。其作用可能与抑制SphK1、S1P信号分子的表达有关。

亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇信号轴的影响

背景:血管内皮细胞是砷毒作用的关键靶点,砷致内皮细胞损伤的分子机制有待进一步研究。目的:研究亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞的损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号轴的影响。方法:分离培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,将人脐静脉内皮细胞暴露于含0,5,10,15,20,25μmol/L亚砷酸钠的培养液24 h,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;荧光探针DCFH-DA染色检测细胞内活性氧含量;Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;ELISA检测细胞内1-磷酸鞘氨醇含量;实时荧光定量PCR、Western blot分别检测血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇受体1的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与对照组(0μmol/L亚砷酸钠)相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:细胞存活率逐渐降低,且呈剂量-效应关系;细胞融合率逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,脱落漂浮的细胞逐渐增多;细胞内活性氧含量逐渐升高;细胞凋亡率逐渐升高;细胞内1-磷酸鞘氨醇含量逐渐升高;血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1 mRNA和蛋白的相对表达量逐渐升高,1-磷酸鞘氨醇受体1 mRNA和蛋白相对表达量逐渐降低。②结果提示,亚砷酸钠诱导的人脐静脉内皮细胞损伤可能与SPHK1/S1P信号轴激活、1-磷酸鞘氨醇受体1下调有关。SPHK1/S1P信号轴可能成为砷致心血管损伤的新靶点。

敲低鞘氨醇激酶-1对非小细胞肺癌细胞增殖及线粒体凋亡途径的影响及机制

本文旨在探讨敲低鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,SPHK1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、周期和凋亡的影响,并探讨其可能机制。用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人胚肺成纤维细胞系(MRC-5)和4种NSCLC细胞中SPHK1 mRNA表达水平。利用SPHK1-shRNA和相应的阴性对照转染A549和H1299细胞。用CCK8法测定细胞增殖,用Annexin V-FITC/PI双重染色试剂盒评价细胞凋亡,用细胞周期检测试剂盒测定细胞周期分布,用JC-1线粒体膜电位测定试剂盒检测线粒体膜电位,用蛋白质印迹法检测细胞周期和线粒体凋亡途径相关蛋白、MEK/ERK信号通路的蛋白表达水平。结果显示,NSCLC细胞SPHK1 mRNA表达水平高于MRC-5细胞。SPHK1-shRNA显著抑制A549和H1299细胞的增殖,并促进线粒体途径的细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G0/G1期;与对照组相比,SPHK1-shRNA组MEK和ERK蛋白磷酸化水平显著下调。MEK/ERK抑制剂可抑制A549和H1299细胞增殖,并促进细胞凋亡。上述结果提示,SPHK1敲低可能通过抑制MEK/ERK信号通路来抑制NSCLC的增殖和促进线粒体途径的细胞凋亡。

抑制鞘氨醇激酶-1/1-磷酸鞘氨醇信号通路减少大鼠肢体缺血再灌注肺损伤

目的 建立肢体缺血再灌注肺损伤（URLI）动物模型,运用鞘氨醇激酶-1（S1P）特异性抑制剂FTY720预处理,观察S1P/1-磷酸鞘氨醇（Sphk-1）信号通路在LIRLI发病过程中的作用.方法 成年健康SD大鼠（300 ～350 g）采用随机数字表法分为5组（n=10）.A组：假手术组;B组：生理盐水灌胃7d预处理＋缺血再灌注（L/R）;C组：FTY720 3 mg[3 mg/（kg.d）]灌胃7d预处理＋I/R;D组FTY720 5 mg[5 mg/（kg·d）]灌胃7d预处理＋I/R;E组：FTY720 10 mg[10 mg/（kg.d）]灌胃7d预处理＋I/R.采用大鼠双下肢缺血3h再灌注4h制备URLI模型.结果 血气分析结果：E组pH（7.35 ±0.15）、氧分压[PaO2（253±58） mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）]、二氧化碳分压[PaCO2（48±5） mmHg];B组pH（7.18 ±0.11）、PaO2[（148±44）mmHg]、PaCO2[（70±10） mmHg].A组肺组织匀浆S1P和Sphk-1 mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）分别为0.17和0.19,而B组中S1P和Sphk-1 mRNA/GAPDH分别为0.63和0.68.A组湿/干重比（W/D）、中性粒细胞计数（PMN）分别为0.96和1.84;B组W/D、PMN计数分别为1.63和7.25;D组W/D、PMN计数分别为1.28和3.15;E组W/D、PMN计数分别为1.18和1.99.A组观察肺组织正常组织,而缺血再灌注组呈现严重的病变肺,表现为肺间质水肿,炎性细胞浸润,肺泡破裂出血.B组肺损伤评分为7.25分,D、E两组肺损伤评分分别为3.85和1.52分.结论 通过S1P特异性抑制剂FTY720下调S1P/Sphk-1表达能减少肢体缺血再灌注后小鼠肺部炎性细胞浸润,有效减轻肺间质水肿和肺泡破裂出血.

鞘氨醇激酶-1在急性胰腺炎中的变化

目的 观察人外周血白细胞中鞘氨醇激酶-1（SphK1）在急性胰腺炎（AP）的炎性反应中的作用.方法 选取30例AP患者,分为轻型急性胰腺炎（MAP）组17例和重型急性胰腺炎（SAP）组13例,另外纳入10例健康者作为健康对照组.在AP症状发生48、72 h 、5、7 d时分别检测血清肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6、外周血白细胞中SphK1 mRNA水平及其活性.结果 在48、72 h、5 d时,外周血白细胞中SphK1 mRNA及其活性均呈健康对照组＜MAP组＜SAP组（3组SphK1 mRNA的相对表达量：48 h：0.888±0.724、2.807±1.542、6.433±1.955;72 h：0.842±0.434、2.523±1.460、4.857±1.870;5 d：0.751±0.329、2.335±1.469、3.791±1.851; SphK1的活性：48 h：0.051 ±0.024、0.132 ±0.070、0.303±0.102;72 h：0.049 ±0.023、0.112±0.061、0.223 ±0.092;5 d：0.050 ±0.019、0.115 ±0.072、0.191±0.106,P ＜0.05）;而且在48、72 h、5 d时,血清TNF-α、IL-6含量均呈健康对照组＜ MAP组＜SAP组[TNF-α（ng/L）：48 h：4.72±1.69、17.48 ± 10.74、50.79±15.44;72 h：3.67 ±1.84、18.73 ±12.12、40.64±13.28;5 d：4.44 ±2.13、17.31±10.33、33.37±14.96;IL-6（ng/L）：48 h：6.9±1.9、85.9±37.9、182.8±48.6;72 h：5.5 ±2.4、64.5 ±42.9、138.0±32.0;5 d：6.6±2.8、60.5 ±32.1、94.4 ±30.9,P＜0.05],这与外周血白细胞中SphK1的表达有相同的变化趋势.结论 SphK1的激活可能与AP的炎性反应密切相关.

鞘氨醇激酶1抑制剂的研究进展

鞘氨醇激酶1(SphK1)是调控细胞膜脂质微环境的重要蛋白,在神经酰胺,鞘氨醇和鞘氨醇-1-磷酸的动态平衡中发挥重要作用。SphK1的过度表达与肿瘤的发生,发展和迁移过程以及产生耐药性有着密切的联系。SphK1抑制剂可以诱导多种肿瘤细胞凋亡,并且可以逆转肿瘤耐药性,具有良好的药物开发前景。本文综述了SphK1的结构生物学以及SphK1抑制剂的结构类型和构效关系研究进展。

鞘氨醇激酶1对结肠癌细胞血管生成拟态的影响及其机制

目的:研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,Sphk1)对人结肠癌HT-29细胞生成血管拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响及其可能的机制.方法:将人结肠癌HT-29细胞分为Sphk1抑制组、Sphk1激活组、对照组.Sphk1抑制组加入N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl-D-erythro-sphingosine,DMS)50μmol/L;Sphk1激活组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol12-myristate-13-acetate,PMA)100nmol/L;对照组加入等量的培养基.采用MTT法检测细胞生长增殖;透射电镜观察细胞形态学变化;Matrigel三维培养法观察VM形成能力;Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力的变化,QT-PCR、Western blot及ELISA技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:DMS显著抑制细胞的增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡;透射电镜可见典型的凋亡特征;三维培养中不能形成管状VM;明显减弱VEGFmRNA及蛋白表达.PMA则显著促进HT-29细胞的增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡;透射电镜可观察到细胞增殖特征;促进三维培养中管状VM的形成;明显增强VEGFmRNA及蛋白表达.对照组、DMS组及PMA组的侵袭细胞数:112.00±6.25vs57.00±8.00,142.00±5.57;迁移细胞数:69.33±4.04vs42.00±4.16,111.00±8.03;VEGFmRNA表达量:1.000vs0.740±0.122,1.220±0.075;VEGF蛋白表达:0.39±0.05vs0.23±0.02,0.65±0.06;VEGF蛋白分泌:103.00±8.96vs63.89±8.44,201.01±17.93,均P<0.05.结论:Sphk1可促进HT-29细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡,诱导VM的形成,其机制可能是通过增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力并促进VEGF表达而发挥作用.

推拿㨰法对兔骨骼肌急性钝挫伤组织TNF-α及SphK1、S1PR3表达的影响

目的观察推拿㨰法干预对骨骼肌急性钝挫伤兔肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及鞘氨醇激酶-1(SphK1)、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)表达的影响,探讨㨰法治疗骨骼肌钝挫伤的作用机制。方法将15只新西兰兔随机分为空白组、模型组和㨰法组,每组5只。模型组和㨰法组采用自制重力锤打击装置制备兔股四头肌急性钝挫伤模型。造模成功后第7日开始干预,㨰法组用自制㨰法按摩器在股四头肌损伤处进行㨰法按摩,3 min/次,每日上下午各1次,连续3 d,空白组和模型组捆绑相同时间。HE、Masson染色观察股四头肌损伤部位病理变化,ELISA检测股四头肌组织TNF-α含量,Western blot检测股四头肌组织SphK1、S1PR3蛋白表达。结果模型组肌纤维变形断裂,肌细胞坏死严重,肌膜模糊、不完整,且有肌纤维溶解后形成的空泡结构,炎性细胞浸润较明显,可见少量核居中的新生肌纤维,有大量胶原纤维;与空白组比较,模型组股四头肌组织TNF-α含量明显增加(P<0.01),SphK1、S1PR3蛋白表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,㨰法组炎性细胞浸润明显减轻,可见大量细胞核居中且大小不等的新生肌纤维及多核肌管,胶原纤维明显减少;股四头肌组织TNF-α含量明显减少(P<0.05),SphK1、S1PR3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论㨰法干预能通过下调骨骼肌急性钝挫伤兔受损组织TNF-α含量及SphK1、S1PR3表达,降低组织炎症反应,减缓纤维化,进而促进骨骼肌损伤修复。

阿芬太尼调节SphK1/S1P信号通路保护心肌缺血再灌注损伤大鼠

[目的]探究阿芬太尼对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的作用及在该过程中对鞘氨醇激酶1(SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)信号通路的调节机制。[方法]将SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药物组(复方丹参组)和阿芬太尼低剂量组、阿芬太尼高剂量组、阿芬太尼高剂量+SphK1激动剂组(阿芬太尼+PMA组),每组20只。除假手术组,其余组均利用结扎左前降支冠状动脉后再灌注复制MIRI模型。全自动生物化学分析仪检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和谷草转氨酶(AST)的活性;TTC检测大鼠心肌梗死面积;HE染色观察大鼠心肌组织形态学特征;TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)及S1P的水平;试剂盒检测心肌组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blot检测心肌组织SphK1蛋白表达。[结果]相较于假手术组,模型组大鼠心肌组织病理损伤严重,血清中心肌损伤标志物LDH、CK和AST的活性,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、S1P水平及SphK1蛋白表达均升高,SOD活性降低(P<0.05);相较于模型组,阳性药物组和阿芬太尼低、高剂量组大鼠心肌组织损伤减轻,血清中心肌损伤标志物LDH、CK和AST的活性,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、S1P水平及SphK1蛋白表达均降低,SOD活性升高(P<0.05)。SphK1激动剂可逆转高剂量阿芬太尼对上述指标的影响(P<0.05)。[结论]阿芬太尼对MIRI大鼠发挥保护作用,其机制可能与抑制SphK1/S1P信号通路有关。

SphK1高表达肝癌细胞株的筛选及PF-543对其增殖能力的影响

目的检测鞘氨醇激酶-1(Sph K1)在正常肝细胞系L02,肝癌细胞Hep G2、Huh7、Bel7402中的表达,筛选Sph K1高表达株,并探讨Sph K1拮抗剂PF-543对其高表达株细胞增殖能力的影响。方法体外培养正常肝细胞系L02,肝癌细胞Hep G2、Huh7、Bel7402,每组设6个复孔,选对数生长期的细胞提取RNA,通过RT-PCR测定各细胞系Sph K1的表达情况;体外培养Sph K1高表达株细胞,分为5组:10-7、10-6、2.5×10-6、10-5mol/L PF-543组及空白组,实验组加入含药培养液,空白组加入等量含0.5%FBS的培养液,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活力。简单线性相关分析药物剂量依赖性。结果以正常人肝细胞系L02为参照标准,Hep G2细胞中Sph K1的表达量最高,是正常肝细胞L02中Sph K1表达量的(3.28±0.64)倍(P<0.01);Huh7细胞中Sph K1的表达量是正常肝细胞L02中Sph K1表达量的(2.07±0.26)倍(P<0.01),BEL7402细胞中Sph K1的表达量是正常肝细胞L02中Sph K1表达量的(0.22±0.04)倍(P<0.01);10-6、2.5×10-6、10-5mol/L PF-543组的OD450均低于空白组(P均<0.01),且具有剂量依赖性。10-7mol/L PF-543对Hep G2细胞增殖未见影响。结论 Hep G2细胞系是Sph K1高表达株,10-6~10-5mol/L浓度的PF-543可剂量依赖性地抑制Hep G2细胞增殖。

鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇信号通路在糖尿病及其并发症中作用的研究进展

全球糖尿病及其并发症发病率不断增加, 对公共卫生构成重大威胁, 开发对糖尿病及其并发症有效的治疗方法十分必要。鞘氨醇激酶(SphK)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号轴是鞘脂代谢途径中重要的信号通路。越来越多的证据表明, SphK/S1P信号通路在糖尿病和相关并发症中起着关键作用。该文就SphK/S1P信号通路在糖尿病及其并发症中作用的研究进展作一综述, 以期为其治疗靶点提供思路。

鞘氨醇激酶1调控p38和c—Jun氨基末端激酶通路影响结肠癌HT-29细胞的凋亡迁移与侵袭

目的探讨鞘氨醇激酶1（SphK1）对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）和N，N-二甲基鞘氨醇（DMS）诱导和抑制人结肠癌HT-29细胞SphK1的活化和表达，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖，流式细胞术分析细胞凋亡，γ-^32P—ATP掺入法检测SphK1的活性，Western blot检测蛋白的表达，Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PMA和DMS能分别诱导和抑制SphK1活性和表达，在24h内呈一定的时间依赖性。PMA能抑制细胞的凋亡，100nmol／LPMA作用0、6、12、24h后，细胞凋亡率分别为（9．35±0．84）％、（7．61±0．48）％、（5．53±0．76）％和（0．56±0．33）％。DMS能显著抑制细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，50μmol／LDMS作用0、6、12、24h后，细胞凋亡率分别为（9．18±0．94）％、（12．06±1．41）％、（19．80±2．36）％和（31．85±3．60）％。对照组、PMA组和DMS组的迁移细胞数分别为68．75±6．15、109．33±11．63和10．83±2．48，侵袭细胞数分别为55．42±4．50、90．58±7．06和9．58±2．39，与对照组比较，PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多，而DMS组则显著减少。对照组、PMA组和DMS组的p38表达强度分别为0．20±0．03、0．08±0．02和0．31±0．03，磷酸化p38（p-p38）表达强度分别为0．19±0．02、0．09±0．02和0．38±0．05，应激活化蛋白激酶／c-Jun氨基末端激酶（SAPK／JNK）的表达强度分别为0．26±0．03、0．12±0．03和0．43±0．06，PMA显著抑制p38、p-p38和SAPK／JNK蛋白的表达，而DMS则促进p38、p-p38和SAPK／JNK蛋白的表达。结论SphK1可促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并抑制细胞的凋亡，其机制可能是通过抑制p38和SAPK／JNK通路而发挥作用。