和血柔肝方含药血清通过鞘氨醇激酶-1对肝星状细胞增殖与凋亡的作用

目的:和血柔肝方(HXRGF)含药血清调节鞘氨醇激酶-1(SphK1)对肝星状细胞(HSC)增殖与凋亡的作用。方法:采用Resistin处理HSC-T6细胞,建立纤维化HSC模型,采用LV-rSphK1-OE、LV-rSphk1-shRNA慢病毒方法构建SphK1过表达、低表达稳转细胞株,运用实时定量PCR、WB检测TGF-β、α-SMA、Col I、FN、Smad、SphK1mRNA及蛋白的表达、CCK8实验检测细胞活力、AnnexinV-APC/7-AAD流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,MF-HSC-T6细胞中可见TGF-β、α-SMA、Col I、FN、SphK1mRNA及蛋白表达水平升高,Smad mRNA水平降低(P<0.01);HSC-T6 SphK1过表达细胞株中SphK1及相关纤维化标志物的表达水平升高(P<0.01);HSC-T6 SphK1低表达细胞株中TGF-β、α-SMA、Col I、FN mRNA等纤维化相关标志物降低,Smad mRNA水平升高(P<0.01)。与模型组比较,中药复方HXRGF含药血清干预后,可见MF-HSC T6 SphK1mRNA及蛋白表达水平降低,并同时伴有α-SMA、Col I、FN表达水平的下降(P<0.01),HSC细胞增殖率下降(110.85%);shRNA-SphK1转染组细胞增殖率下降,凋亡率(12.14%)升高(P<0.01);HSC-T6 SphK1低表达组细胞凋亡率(16.48%)升高(P<0.01)。结论:SphK1可作为肝纤维化潜在治疗靶点。HXRGF干预通过抑制SphK1表达,下调TGF-β、α-SMA等促纤维化因子的表达水平,抑制活化的HSC增殖,诱导HSC凋亡,缓解肝纤维化。

鞘氨醇激酶1(Sphk1)抑制剂在肝纤维化大鼠模型中的作用机制

目的探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)抑制剂在不同肝纤维化大鼠模型中的治疗作用。方法170只SD大鼠随机分为4组:正常组(30只)、HFE组(给予高脂乳剂,45只)、CCl_(4)组(CCl_(4)诱导,45只)、CCl_(4)+HFE组(HFE联合CCl_(4),50只),经病理及实验室检查证实造模成功后,分别给予SphK1抑制剂PF-543,同组别以生理盐水作为对照,分别在第1、7、14天取肝组织进行Masson染色,比较肝纤维化面积占比、透射电镜下观察自噬小体形成情况、Real-time PCR检测肝纤维化及自噬相关标志物mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验。相关性分析采用Spearman相关分析。结果与正常组(0.57±0.13)相比,CCl_(4)组(6.93±5.81)和HFE+CCl_(4)组(10.89±2.67)肝纤维化面积占比均升高(P值均<0.01)。PF-543干预第7天可显著降低CCl_(4)组及HFE+CCl_(4)组纤维化病变面积(P值均<0.01)。与正常组相比,HFE组、CCl_(4)组和HFE+CCl_(4)组的SphK1表达水平均明显降低(P值均<0.01),HFE+CCl_(4)组的α平滑肌肌动蛋白、转化生长因子-β、α1-Ⅰ型胶原mRNA表达水平均明显升高(P值均<0.01),干预后各指标水平无明显变化(P值均>0.05)。Atg5、Atg12、Becn1的表达水平与肝纤维化病变面积均呈负相关(r分别为-0.715、-0.640、-0.632,P值均<0.01);SphK1的表达水平与Atg5、Atg12、Becn1、Map1lc3a的mRNA表达均呈正相关(r分别为0.603、0.561、0.510、0.498,P值均<0.01)。电镜示:CCl_(4)组肝组织轻微水肿,细胞器丰富,轻度肿胀,以粗面内质网扩张为主。该视野可见9个自噬溶酶体结构。在PF-543干预第7天后,未见典型自噬结构。HFE+CCl_(4)组肝组织轻度水肿,结构不清晰,粗面内质网数量丰富,明显扩张,表面附着核糖体颗粒较少。该视野可见6个自噬溶酶体结构。在PF-543干预第7天后,该视野未见典型自噬结构。结论PF-543对自噬有显著抑制作用,并同时伴有纤维化面积的减少。提示靶向SphK1,可影响到肝脏的自噬水平,并进而缓解两种肝纤维化模型的纤维化状态。

血清1-磷酸鞘氨醇联合透明质酸检测对结直肠癌的诊断及预后价值

目的:观察分析结直肠癌(CRC)患者血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)和透明质酸(HA)的水平变化及相关性,探讨其对结直肠癌诊断和预后评估的临床价值。方法:收集47例结直肠癌患者(结直肠癌组)、30例肠道良性疾病患者(良性疾病组)和38名健康的体检者(健康对照组)的临床资料,并检测所有受试者的血清S1P和HA水平。利用Spearman相关性分析评估两者相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估S1P、HA、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)单独和联合诊断CRC的效能。结果:血清S1P水平在健康对照组、良性疾病组及结直肠癌组中逐次升高(P<0.05)。结直肠癌组血清HA水平高于健康对照组(P<0.05),然而良性疾病组的血清HA水平与结直肠癌组和健康对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。根据Spearman相关性分析结果,结直肠癌组血清S1P水平和HA水平之间存在正相关关系(r=0.406,P<0.05)。ROC曲线结果显示,S1P、HA、CEA、CA19-9单独和联合诊断CRC的曲线下面积分别为0.871、0.642、0.694、0.593及0.916。术后CRC患者血清HA水平显著降低(P<0.001),但术后血清S1P水平与术前差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清S1P与HA结合检测在结直肠癌的辅助诊断及预后评估中具有一定的临床价值。

1-磷酸鞘氨醇受体2通过AKT/mTOR通路调节线粒体功能参与Aβ_(25-35)诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y损伤

阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种与年龄相关的认知功能下降的神经退行性疾病。1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1PR2)参与多种细胞过程,被证实在神经系统发育中发挥重要作用。本文旨在探究S1PR2对Aβ_(25-35)诱导的AD细胞模型损伤的作用及可能机制。研究通过Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞构建细胞损伤模型,并且构建靶向S1PR2的干扰序列用于干预细胞中S1PR2的表达。Western印迹及RT-PCR检测S1PR2蛋白及基因表达,发现Aβ_(25-35)诱导的细胞模型中S1PR2蛋白及基因表达均显著增加(P<0.01),S1PR2干预后模型组内S1PR2蛋白及基因表达显著降低(P<0.001)。CCK8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,结果显示,S1PR2干预后显著增加Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞的增殖活性,减少细胞凋亡(P<0.01)。Western印迹检测细胞中APP、Tau、p-Tau和PSD95的表达,结果显示,S1PR2干预后显著降低模型组细胞内APP、Tau和p-Tau的表达,增加突触蛋白PSD95的表达,可显著改善Aβ_(25-35)诱导的细胞损伤(P<0.001)。另外,试剂盒检测细胞中ATP的产生,流式细胞术检测ROS含量及线粒体膜电位以分析细胞的线粒体功能,结果显示,Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞显著降低了细胞中ATP的产生,增加了ROS含量,减少了线粒体膜电位(P<0.001)。S1PR2干预后显著增加Aβ_(25-35)诱导的细胞模型中ATP的产生,降低ROS含量,增加线粒体膜电位(P<0.001)。最后,通过Western印迹检测AKT/mTOR通路蛋白质表达,结果显示,Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞促进了p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR的表达,S1PR2干预后显著抑制AKT/mTOR通路的激活(P<0.001)。总而言之,S1PR2可能通过促进AKT/mTOR通路调节线粒体功能参与Aβ_(25-35)诱导的细胞损伤进程。

鞘氨醇-1-磷酸受体4在口腔鳞状细胞癌中的表达及生物学功能

目的 :探讨鞘氨醇-1-磷酸受体4(sphingosine-1-phosphate receptor 4,S1PR4)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及生物学功能。方法 :通过实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、免疫印迹实验(Western blot)和免疫组织化学染色,分析OSCC组织样本及细胞系(WSU-HN4、WSU-HN6、CAL27、WSU-HN30)中S1PR4的表达。通过S1PR4拮抗剂(CYM50358)抑制S1PR4活性,利用CCK-8以及克隆形成实验检测CYM50358对OSCC细胞增殖的影响。通过流式细胞术分析CYM500358对OSCC细胞凋亡的影响。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:OSCC中的S1PR4转录及表达显著上调,CYM50358处理组OSCC细胞增殖活性显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞克隆形成能力显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞凋亡比例显著高于空白对照组(P<0.05)。结论:S1PR4在OSCC中表达上调,S1PR4拮抗剂可抑制OSCC细胞生长并促进细胞凋亡,或为OSCC的治疗提供新的潜在靶点。

1-磷酸鞘氨醇受体3对脂多糖处理大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)对脂多糖(LPS)处理大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法将培养好的大鼠肾小管细胞(NRK-52E)分为对照组、LPS组、S1PR3激动剂+LPS组。对照组不做处理;LPS组予LPS(20μg/ml)刺激12h后做离心收集待检;S1PR3激动剂+LPS组先用S1PR3激动剂KRX-725预处理2 h后再予LPS(20μg/ml)刺激12 h后做离心收集待检。流式细胞术检测各组细胞凋亡率、钙离子表达及caspase-3表达的差异,ELISA试剂盒检测Calpain 1、Calpain 2的表达差异,Western Blot检测各组细胞中S1PR3的表达差异。结果LPS处理后脓毒症NRK-52E细胞模型成功建立,相比于对照组,LPS组和S1PR3激动剂+LPS组的细胞凋亡率、S1PR3表达、钙离子浓度、Calpain 1与Calpain2的表达、caspase-3表达均显著增加(均P<0.05);与LPS组相比,S1PR3激动剂+LPS组的细胞凋亡率、钙离子浓度、Calpain 1与Calpain2的表达、caspase-3表达均显著增加(均P<0.05),S1PR3表达显著增加(P<0.05)。结论S1PR3的激活能够增加肾小管上皮细胞内的钙离子浓度,从而激活caspase-3细胞凋亡信号通路,导致脓毒症肾小管上皮细胞凋亡增加。

1-磷酸鞘氨醇在免疫性炎症疾病中的研究进展

1-磷酸-鞘氨醇(Sphingosine-1-Phosphate,S1P)是在人体内广泛存在的生物活性脂质分子,其作用涉及合成、降解、转运,S1P/1-磷酸鞘氨醇受体(Sphingosine 1-Phosphate Receptors,S1PRs)介导信号通路等多个方面。经过数十年的研发,目前已经用于治疗数种炎症免疫性疾病。本文综述了S1P的基本代谢、作用机制,其在临床自身免疫炎症性疾病与在皮肤病中的应用,以及对其未来应用前景的展望。

不同来源的人血清白蛋白对1-磷酸鞘氨醇的结合运载作用研究

目的研究不同来源的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)的结合运载作用。方法以人血浆来源HSA(plasma derived HSA,pHSA)和基因重组HSA(recombinant HSA,rHSA)样本为研究对象,首先利用LC-MS/MS技术,比较分析上述样本中S1P含量的差异;其次,在生理浓度条件下,向HSA样本中直接添加S1P进行负载处理,比较不同来源的HSA对S1P结合作用;在无血清培养条件下,将不同来源HSA样本与HUVEC细胞进行共培养,分析不同处理组的细胞培养上清中S1P含量的变化,比较不同来源的HSA对细胞中S1P的运载作用。利用表面等离子体共振SPR技术分析不同来源HSA与S1P分子的相互作用情况并计算其亲和力大小。利用AutoDock Vina软件和Molprophet平台,对HSA和S1P进行分子对接分析,并预测HSA中S1P的关键结合口袋域。结果S1P含量检测结果显示,所有pHSA样本中均含有一定水平的S1P(3.31±0.03~30.35±0.07)μg/L,且不同厂家生产的pHSA样本中的S1P含量差异显著(P<0.001);然而所有rHSA样本中均未检测出S1P。负载处理结果显示,不同来源HSA对S1P的结合作用存在显著差异(P<0.001),且rHSA对S1P平均负载量约为pHSA的2倍(ΔC_(rHSA)=801.75±142.45μg/L vsΔC_(pHSA)=461.94±85.73μg/L;P<0.001,t=5.006)。共培养处理结果显示,所有HSA样本处理组与HUVEC细胞共培养处理6h后上清中的S1P浓度均明显升高,而空白对照组上清中S1P浓度无变化;处理6 h、12 h和24 h后各处理组间上清中S1P浓度均存在显著差异(P<0.001)。SPR分析结果显示,与rHSA相比,pHSA与S1P之间的亲和力更高(KD_(pHSA-S1P):2.38E-06,KD_(rHSA-S1P):3.72E-06)。分子对接分析和结合口袋预测发现,HSA与S1P的关键结合口袋可能位于HSA分子的IB亚结构域。结论不同来源的HSA对S1P均具有一定的结合运载作用,但这种作用差异具有统计学意义,与HSA分子的IB亚结构域存在关联。

血清1-磷酸鞘氨醇水平对老年急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成有一定预测价值

目的:探讨血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平对老年急性脑梗死(ACI)患者颈动脉粥样硬化(CAS)斑块形成的预测价值。方法:采用横断面法选取入院24 h内接受颈部血管超声检查的老年ACI患者223例,根据有无CAS斑块分为内膜增厚组(72例)和斑块组(151例),另选取同期健康体检者70例作为对照组。检测3组受试者血清S1P水平,采用单因素和多因素Logistic回归分析S1P与老年ACI患者CAS斑块形成的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析S1P对颈动脉不稳定斑块的预测价值。结果:单因素分析显示,患者年龄、胆固醇(TC),甘油三酯(TG)、血清S1P水平与CAS斑块的形成有关(P均<0.05)。斑块组S1P水平显著高于内膜增厚组[(712.63±132.34)ng/mL vs.(656.86±130.58)ng/mL,P<0.05]。多因素Logistic回归显示,S1P是影响CAS斑块形成的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,当S1P截断值为685 ng/mL时,曲线下面积为0.97(95%CI:0.970~0.980,P=0.001),敏感度为95.8%,特异性为89.4%。结论:血清S1P水平是老年ACI患者CAS斑块形成的独立危险因素。

真武汤调节鞘氨醇激酶1-磷酸鞘氨醇信号通路抗阿霉素肾病大鼠肾损伤的作用研究

目的:研究真武汤对阿霉素肾病(Adriamycin Nephropathy,AN)模型大鼠鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase 1,SphK1)-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)信号分子的影响,探讨真武汤治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:常规检测各试验组动物血脂、血浆白蛋白、24小时尿蛋白含量;实时聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RTPCR)检测肾组织中SphK1基因表达;免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织中SphK1蛋白表达;液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测SphK1、S1P活性。结果:模型组大鼠血脂水平、24小时尿蛋白含量显著升高,血浆白蛋白水平显著降低(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组血脂水平、24小时尿蛋白含量明显降低,血浆白蛋白水平明显升高(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、基因和蛋白表达及S1P含量明显下降(P<0.05),各治疗组之间差异无统计学意义。结论:真武汤可减少AN模型大鼠肾组织的SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量,改善其蛋白尿、血脂及血浆白蛋白水平。其作用可能与抑制SphK1、S1P信号分子的表达有关。

亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇信号轴的影响

背景:血管内皮细胞是砷毒作用的关键靶点,砷致内皮细胞损伤的分子机制有待进一步研究。目的:研究亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞的损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号轴的影响。方法:分离培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,将人脐静脉内皮细胞暴露于含0,5,10,15,20,25μmol/L亚砷酸钠的培养液24 h,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;荧光探针DCFH-DA染色检测细胞内活性氧含量;Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;ELISA检测细胞内1-磷酸鞘氨醇含量;实时荧光定量PCR、Western blot分别检测血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇受体1的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与对照组(0μmol/L亚砷酸钠)相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:细胞存活率逐渐降低,且呈剂量-效应关系;细胞融合率逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,脱落漂浮的细胞逐渐增多;细胞内活性氧含量逐渐升高;细胞凋亡率逐渐升高;细胞内1-磷酸鞘氨醇含量逐渐升高;血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1 mRNA和蛋白的相对表达量逐渐升高,1-磷酸鞘氨醇受体1 mRNA和蛋白相对表达量逐渐降低。②结果提示,亚砷酸钠诱导的人脐静脉内皮细胞损伤可能与SPHK1/S1P信号轴激活、1-磷酸鞘氨醇受体1下调有关。SPHK1/S1P信号轴可能成为砷致心血管损伤的新靶点。

山姜素调节VEGF/SphK1/S1P信号通路对膝骨关节炎大鼠血管生成的影响

目的探讨山姜素(APT)调节血管内皮生长因子/鞘氨醇激酶1/1磷酸鞘氨醇(VEGF/SphK1/S1P)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠血管生成的影响。方法采用改良的Videman法构建KOA大鼠模型,将90只大鼠分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、山姜素低剂量组(L-APT组)、山姜素高剂量组(H-APT组)、山姜素高剂量组+慢病毒阴性对照组(APT+NC组)、山姜素高剂量组+过表达SphK1慢病毒组(APT+SphK1组),每组15只。HE染色观察大鼠软骨组织病理变化;酶联免疫吸附试验测定软骨组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平;TUNEL检测软骨组织细胞凋亡情况;免疫组化检测血管内皮生长因子(VEGF)、CD31蛋白表达情况;Western blot检测血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、磷酸化VEGFR2(p-VEGFR2)、SphK1、S1P蛋白水平。结果与Control组比较,Model组大鼠出现病理损伤,细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-13、VEGF阳性表达、CD31阳性表达和p-VEGFR2、SphK1、S1P蛋白表达水平增加(P<0.05);与Model组比较,L-APT组、H-APT组病理损伤明显减轻,细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-13、VEGF阳性表达、CD31阳性表达和pVEGFR2、SphK1、S1P蛋白表达水平降低(P<0.05);与APT+NC组比较,APT+SphK1组软骨组织病理损伤加重,细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-13、VEGF阳性表达、CD31阳性表达和p-VEGFR2、SphK1、S1P蛋白表达水平增加(P<0.05)。结论APT通过抑制VEGF/SphK1/S1P信号通路抑制KOA大鼠血管生成。

1-磷酸鞘氨醇通过提高心脏微血管密度缓解压力负荷诱导的小鼠心力衰竭

目的:探究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate, S1P)通过调节心脏微血管密度对压力负荷诱导的小鼠心力衰竭的作用及相关机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术(sham)组、sham+2-乙酰基-5-四羟基丁基咪唑(2-acetyl-5-tetrahydroxybutyl imidazole, THI;S1P裂解酶抑制剂)组、主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction, TAC)组和TAC+THI组。TAC手术后1周给予THI灌胃处理,实验终点检测各组小鼠血浆和心脏匀浆组织中S1P水平;心脏超声和Millar导管检测心功能;HE染色检测各组小鼠心脏肥大程度,Masson染色观察各组小鼠心脏间质和管周纤维化程度,CD31和麦胚凝集素免疫荧光染色观察各组小鼠心肌细胞横截面积和心脏微血管密度;RT-qPCR检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)、I型胶原蛋白(collagen type I)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ)、CD31、血管性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)和血管生成素1(angiopoietin 1, Ang1)的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠心脏组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、VEGF受体(VEGF receptor, VEGFR)、磷酸化VEGFR、蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)和磷酸化Akt的蛋白水平。结果:TAC小鼠体内S1P水平明显降低,给予THI可显著升高小鼠血浆和心脏匀浆组织中S1P水平。S1P能显著改善心衰小鼠心功能,减轻心肌肥大和纤维化表型,抑制ANP、BNP、collagen type I和collagen type Ⅲ的表达,上调血管内皮标志物CD31、Ang1和vWF的表达,激活VEGF-VEGFR-Akt信号通路,促进心脏微血管生成。结论:S1P通过VEGF-VEGFR-Akt信号通路提高心衰小鼠心脏微血管密度,从而缓解压力负荷诱导的心力衰竭。

阿芬太尼调节SphK1/S1P信号通路保护心肌缺血再灌注损伤大鼠

[目的]探究阿芬太尼对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的作用及在该过程中对鞘氨醇激酶1(SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)信号通路的调节机制。[方法]将SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药物组(复方丹参组)和阿芬太尼低剂量组、阿芬太尼高剂量组、阿芬太尼高剂量+SphK1激动剂组(阿芬太尼+PMA组),每组20只。除假手术组,其余组均利用结扎左前降支冠状动脉后再灌注复制MIRI模型。全自动生物化学分析仪检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和谷草转氨酶(AST)的活性;TTC检测大鼠心肌梗死面积;HE染色观察大鼠心肌组织形态学特征;TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)及S1P的水平;试剂盒检测心肌组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blot检测心肌组织SphK1蛋白表达。[结果]相较于假手术组,模型组大鼠心肌组织病理损伤严重,血清中心肌损伤标志物LDH、CK和AST的活性,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、S1P水平及SphK1蛋白表达均升高,SOD活性降低(P<0.05);相较于模型组,阳性药物组和阿芬太尼低、高剂量组大鼠心肌组织损伤减轻,血清中心肌损伤标志物LDH、CK和AST的活性,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、S1P水平及SphK1蛋白表达均降低,SOD活性升高(P<0.05)。SphK1激动剂可逆转高剂量阿芬太尼对上述指标的影响(P<0.05)。[结论]阿芬太尼对MIRI大鼠发挥保护作用,其机制可能与抑制SphK1/S1P信号通路有关。

1-磷酸鞘氨醇及其信号传导在中枢神经系统疾病中的研究进展

1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)作为一种鞘脂代谢物已成为调节各种生理过程的关键物质,参与分化、增殖、迁移、形态发生、细胞骨架形成、黏附、凋亡等过程。1-磷酸鞘氨醇既可以与细胞膜上相应的受体结合激活S1P-S1PR信号通路,也可以在细胞内发挥作用。近年来研究发现其水平变化与中枢神经系统疾病的发生发展存在一定的联系。本文综述了1-磷酸鞘氨醇在神经系统疾病发生及治疗中的最新认识,并进一步阐明其在中枢神经系统疾病治疗及发展中的分子机制。

1-磷酸鞘氨醇调控血管功能在动脉粥样硬化中的研究进展

在日常生活中,高血压、代谢综合征、吸烟和缺乏运动等条件可能诱发血管内皮细胞障碍^([1]),具体表现为内皮舒张功能受损、血管通透性增加、氧化应激和炎症等病理现象^([2]),正常内皮细胞的一个关键功能是防止血管黏附,内皮屏障异常导致内膜中形成包括各种细胞、脂质和组织碎屑在内的斑块,推动动脉粥样硬化的发展^([1])。

1-磷酸鞘氨醇在缺血性卒中中的作用研究进展

脑组织缺血坏死后释放出炎性因子诱发炎症反应,并激活神经胶质细胞参与损伤后的级联免疫反应,1-磷酸鞘氨醇(sphingosine1-phosphate,S1P)代谢与缺血性卒中具有相关性,神经胶质细胞在炎症状态下上调1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine1-phosphatereceptors,S1PRs)的表达,S1PRs发出S1P信号参与脑组织中炎症介质的上调,S1P与S1PRs结合参与缺血性卒中后炎症和免疫反应、内皮细胞的黏附和血管生成以及改善血脑屏障功能。本文就S1P的代谢和生理功能及其与S1PRs结合后改善缺血性卒中的潜在机制进行综述,以期为寻找缺血性卒中相关药物新靶点提供依据。

血清簇集蛋白、1-磷酸鞘氨醇水平对脓毒症急性肝损伤患者的预后价值

目的 探讨血清簇集蛋白(Clusterin)、1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平对脓毒症急性肝损伤患者预后的评估价值。方法 选择2019年3月—2022年5月徐州医科大学附属连云港医院收治的脓毒症急性肝损伤患者127例,根据患者治疗28 d预后情况分为死亡组35例、存活组92例。计量资料两组间比较采用成组t检验,计数资料两组间比较采用χ^(2)检验,对可能影响患者预后的各因素进行单因素及多因素Logistic回归分析,相关性分析采用Pearson相关性分析,采用受试者工作特征曲线分析血清Clusterin、S1P对患者预后评估价值。结果 两组患者肝损伤程度、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评分(SOFA)、合并急性肾损伤、凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、Child-Pugh肝功能分级以及C反应蛋白比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。死亡组患者血清Clusterin、S1P水平均显著低于存活组(t值分别11.094、10.390,P值均<0.05)。重度肝损伤患者血清Clusterin、S1P水平显著低于轻、中度肝损伤患者(t值分别为9.825、11.418,P值均<0.05)。多因素回归分析显示,肝损伤程度(OR=1.260,95%CI:1.081~1.468)、APACHEⅡ评分(OR=1.031,95%CI:1.019~1.044)、SOFA评分(OR=1.066,95%CI:1.039~1.094)、Clusterin(OR=0.899,95%CI:0.859~0.940)和S1P(OR=0.824,95%CI:0.749~0.908)为影响脓毒症患者预后的独立危险因素(P值均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Clusterin、S1P与二者联合对患者预后评估价值的曲线下面积分别为0.864、0.861、0.949。脓毒症急性肝损伤患者血清Clusterin、S1P与ALT、TBil、PT、INR均呈显著负相关关系(P值均<0.05)。结论 与存活组相比,脓毒症急性肝损伤死亡患者血清Clusterin以及S1P显著降低,且Clusterin以及S1P水平与患者肝损伤程度密切相关,二者联合对脓毒症急性肝损伤患者预后具有着较好的预测价值,有望成为脓毒症急性肝损患者预后预测的潜在标志物。

鞘氨醇-1-磷酸在肿瘤转移中的调控机制研究进展

鞘氨醇-1-磷酸(S1P)是鞘磷脂代谢产生的一种生物活性脂类,广泛存在于多种组织、血液及淋巴液中。作为一种分泌型的溶血磷脂,S1P在肿瘤发生时异常增高,通过结合其特定受体(S1P受体1~5)参与肿瘤的发生发展。S1P除可通过促进肿瘤细胞侵袭、迁移、上皮-间充质转化外,还可通过调控肿瘤微环境中诸多基质细胞促进肿瘤转移。因此,S1P可作为肿瘤转移的诊断标志物,并具有药物治疗靶点的潜能。未来,设计靶向S1P及其信号通路的方案将成为肿瘤治疗的新思路。

老年男性初发2型糖尿病患者鞘氨醇-1-磷酸与骨代谢的相关性

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)与骨转换标志物、骨密度和骨折发生风险的相关性。方法 纳入59例老年男性初发2型糖病患者作为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)组,49例非糖尿病居民作为非糖尿病(non diabetes mellitus, NDM)组,收集临床资料,采集静脉血,检查骨密度,计算FRAX评分,比较两组一般资料、糖脂代谢和骨代谢生化指标、骨密度、骨折发生风险及S1P水平的差异,分析S1P与骨转换标志物、骨折发生风险和糖代谢指标的相关性。结果 与NDM组比较,T2DM组空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin Alc, HbAlc)、游离脂肪酸(free fatty acids, FFA)显著升高(P<0.01),总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglycerides, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组甲状旁腺激素(parathyroid hormone, PTH)显著降低(P<0.01),钙(calcium, Ca)、磷(phosphorus, P)差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组骨钙素(osteocalcin, OC)、骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、β-Ⅰ型胶原C端肽(β cross-linked c-telopeptide, β-CTX)显著降低(P<0.01),Ⅰ型胶原氨基端延长肽(procollagen type 1 n-terminal propetide, PlNP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate-resistant acid phosphatase-5b, TRACP-5b)和不同部位骨密度差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组10年内主要骨质疏松性骨折风险FRAX评分(FRAX 10-year major osteoporotic fracture risk score, FRAXM)和10年内髋部骨折风险FRAX评分(FRAX 10-year hip fracture risk score, FRAXH)显著升高(P<0.01);T2DM组血清S1P显著高于NDM组(P<0.01)。NDM组S1P与TRACP-5b呈正相关(P<0.05);T2DM组S1P与5种传统骨代谢标志物均无相关性(P≥0.05)。两组血清S1P与骨密度、FRAXM和FRAXH均无相关性(P≥0.05)。两组血清S1P与FPG和HbAlc均无相关性(P≥0.05)。结论 老年男性T2DM组血清S1P水平升高,S1P与传统骨转换标志物、骨密度、FRAXM和FRAXH无相关性。NDM组血清S1P与TRACP-5b呈正相关。