Sphk1基因对间充质干细胞诱导结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨鞘氨醇激酶1(sphigosine kinase 1,SphK1)基因下调对间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)诱导的结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:采用MSC条件培养液(MSC-CM)和对照培养液(Control-CM)分别干预RKO细胞,CCK-8法检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力,Western blotting法检测Ki-67抗原(Ki-67)、MMP-2/9、肿瘤干细胞标志物CD44和CD133蛋白的表达。用慢病毒shRNA载体转染RKO细胞抑制SphK1的表达,观察抑制SphK1的表达对MSC-CM诱导的RKO细胞增殖、迁移以及MMP-2/9、CD44和CD133蛋白表达的影响。结果:MSC-CM可时间依赖性促进RKO细胞的增殖(P<0.05),并明显增强细胞的迁移能力(P<0.01)和细胞中Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达(均P<0.05或P<0.01)。慢病毒shRNA转染明显抑制RKO细胞SphK1的表达,抑制SphK1的表达可显著抑制MSC-CM对RKO细胞增殖和迁移的促进作用(均P<0.05或P<0.01),且明显抑制MSC-CM诱导的Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达。结论:MSC-CM可促进RKO细胞的增殖和迁移,下调SphK1可通过抑制MMP-2/9、CD44和CD133的表达逆转MSC-CM诱导的细胞增殖和迁移。

SPK1基因转染脂肪间充质干细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的考察SPK1基因转染脂肪间充质干细胞(ADMSC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡的影响。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55对小鼠进行EAE诱导,将44只小鼠随机分为4组:空白对照组(NC组)、模型组(EAE组)、ADMSC组和ADMSC-鞘氨醇激酶1(SPK1)组。在免疫后40 d时,对小鼠进行脑与脊髓的病理学观察、脑组织Th17/Treg相关炎症指标检测、脑和脊髓组织中白细胞介素17和叉头框蛋白P3蛋白表达检测以及脾脏免疫细胞的流式细胞术分析。结果免疫后40 d时,EAE组小鼠脑和脊髓组织发生严重炎性细胞浸润髓鞘脱失严重,ADMSC组与ADMSC-SPK1组脱髓鞘和轴突损伤得到改善;与EAE组比较,ADMSC组和ADMSC-SPK1组的脑组织IL-17A(Z=1.021,P=0.017;Z=1.193,P=0.009)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(Z=2.540,P=0.004;Z=3.005,P=0.006),与ADMSC组比较,ADMSC-SPK1组的脑组织IL-17A与TNF-α水平显著降低(Z=1.223,P=0.011;Z=2.364,P=0.010);小鼠脑和脊髓组织中IL-17A在ADMSC组的表达水平显著降低(t=10.323,P=0.013;t=7.422,P=0.008),且ADMSC-SPK1组显著低于ADMSC组(t=14.244,P=0.017;t=16.865,P=0.006);Foxp3在ADMSC组的表达水平显著升高(t=14.544,P=0.008;t=9.420,P=0.002),且ADMSC-SPK1组显著高于ADMSC组(t=9.654,P=0.005;t=11.535,P=0.009);ADMSC-SPK1组小鼠脾脏中的IL-17+IFN-γ+T细胞比例降低,CD25+Foxp3+Treg细胞比例升高。结论SPK1转染ADMSC对EAE小鼠具有理想的治疗效果,且该效果优于未经SPK1转染的ADMSC,其机制可能与ADMSC-SPK1能显著降低EAE小鼠Th17/Treg细胞比率并减少相关炎症细胞因子的释放有关。