灰葡萄孢鞘脂代谢通路基因Bcsphl1克隆及功能分析

为明确灰葡萄孢Botrytis cinerea鞘脂代谢通路基因Bcsphl1的生物信息学特征及其在菌核发育中的潜在功能,采用CTAB法和Trizol法提取灰葡萄孢菌丝、菌核的gDNA和总RNA,利用PCR技术克隆其Bcsphl1基因,运用生物信息学软件对其进行鉴定和分析,并利用半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction,SqRT-PCR)技术测定其在灰葡萄孢菌核不同形成阶段的表达情况。结果表明:Bcsphl1基因序列全长1833 bp,编码360个氨基酸;Bcsphl1基因编码蛋白的分子质量为40.94 kD,理论等电点为7.73,分子式为C_(1889)H_(2868)N_(492)O_(507)S_(11),不稳定系数为31.19,脂肪指数为100.47,亲水性平均指数为0.160,属于结构稳定的疏水性蛋白。该基因编码的蛋白质无信号肽,定位于细胞质膜,含有3个跨膜结构域和1个脂肪酸羟化酶保守结构域。氨基酸序列同源性比对发现Bcsphl1氨基酸序列与灰葡萄孢T4菌株鞘氨醇羟化酶类蛋白的一致性达98.23%。Bcsphl1基因在灰葡萄孢菌核形成初期(6 d)、中期(9 d)和后期(12 d)均有较高水平表达,其中在中期表达水平最高,表明其可能参与灰葡萄孢菌核形成的调控。