鞘氨醇-1-磷酸转运体在胃癌组织的表达及其对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的鞘氨醇-1-磷酸转运体(Spns2)与肿瘤相关研究报道较少。文中旨在比较Spns2在胃癌和癌旁组织中的表达,并探讨Spns2对人胃癌细胞SGC-7901增殖、克隆形成和迁移能力的影响。方法收集2016年2月至8月江苏省肿瘤医院消化内科胃癌术后病理标本20对(癌组织和癌旁组织)。通过免疫组化法比较Spns2蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达差异。构建过表达Spns2的p EX-1真核载体和小干扰RNA(siRNA),转染人胃癌SGC-7901细胞,根据转染的质粒载体不同分2组:p EX-1-Spns2组(转染p EX-1-Spns2真核表达载体)、p EX-1组(转染空载体p EX-1)。进行siRNA制备与转染,根据转染的siRNA不同分2组:siRNA-Spns2组(加入针对Spns2的脂质体介导的siRNA)、siRNA-NC组(加入不与人任何基因序列同源的siRNA)。采用RT-PCR和Western blot分别检测转染后各组Spns2 mRNA和蛋白的表达水平;采用CCK-8、克隆形成实验、Transwell小室和划痕实验检测Spns2过表达和下调对SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力的影响。结果胃癌组织Spns2蛋白表达(0.39±0.04)明显低于癌旁组织(0.45±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。p EX-1-Spns2组Spns2 mRNA(21.96±2.08)、蛋白表达(10.71±2.78)较p EX-1组[(0.88±0.12)、(0.83±0.16)]明显升高(P<0.05)。siRNA-Spns2组Spns2mRNA (0.35±0.07)、蛋白表达(0.53±0.07)较siRNA-NC组[(0.91±0.09)、(0.92±0.08)]明显降低(P<0.05)。转染后第48、72、96小时,p EX-1-Spns2组SGC-7901细胞增殖能力较p EX-1组明显降低(P<0.05)。siRNA-Spns2组SGC-7901细胞增殖能力较siRNA-NC组明显增强(P<0.05)。p EX-1-Spns2组克隆形成率较p EX-1组明显降低[(33.30±3.81)%vs (48.00±4.60)%],差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-Spns2组克隆形成率较siRNA-NC组明显升高[(48.38±4.22)%vs (26.25±4.88)%],差异有统计学意义(P<0.05)。p EX-1-Spns2组穿膜细胞数明显低于p EX-1组; siRNA-Spns2组穿膜细胞数则明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。p EX-1-Spns2组细胞迁移率较p EX-1组降低[(1.60±0.19)%vs (3.25±0.37)%],siRNASpns2组较siRNA-NC组升高[(3.16±0.40)%vs (1.41±0.15)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Spns2在胃癌组织中低表达,过表达Spns2可降低胃癌SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力;下调Spns2则可促进胃癌SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移,提示Spns2可能起着抑制胃癌发生发展的作用。

鞘氨醇-1-磷酸转运体Spns2的研究进展

鞘氨醇-1-磷酸(S1P)是一种鞘脂类信号分子,在细胞增殖、分化和迁移等诸多方面发挥重要的调节作用。S1P在细胞内生成,随后释放到细胞外与靶细胞膜上的S1PR受体结合。S1P的体内来源主要是造血细胞和血管内皮细胞。造血细胞中S1P的释放主要通过ABC转运蛋白家族,而血管内皮细胞中S1P的释放则是通过Spns2。Spns2是首个被发现并确认具有重要生理功能的S1P转运蛋白,属于主要协助转运蛋白超家族。应用Spns2基因敲除小鼠模型研究发现Spns2缺陷小鼠的血浆S1P水平较野生小鼠明显下降,淋巴细胞外迁受到抑制。本文将对Spns2的研究历史、结构特性、作用底物、生理功能,以及Spns2与免疫性疾病和癌症的相关性进行简要介绍,为进一步研究Spns2提供重要参考。

血清1-磷酸鞘氨醇联合透明质酸检测对结直肠癌的诊断及预后价值

目的:观察分析结直肠癌(CRC)患者血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)和透明质酸(HA)的水平变化及相关性,探讨其对结直肠癌诊断和预后评估的临床价值。方法:收集47例结直肠癌患者(结直肠癌组)、30例肠道良性疾病患者(良性疾病组)和38名健康的体检者(健康对照组)的临床资料,并检测所有受试者的血清S1P和HA水平。利用Spearman相关性分析评估两者相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估S1P、HA、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)单独和联合诊断CRC的效能。结果:血清S1P水平在健康对照组、良性疾病组及结直肠癌组中逐次升高(P<0.05)。结直肠癌组血清HA水平高于健康对照组(P<0.05),然而良性疾病组的血清HA水平与结直肠癌组和健康对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。根据Spearman相关性分析结果,结直肠癌组血清S1P水平和HA水平之间存在正相关关系(r=0.406,P<0.05)。ROC曲线结果显示,S1P、HA、CEA、CA19-9单独和联合诊断CRC的曲线下面积分别为0.871、0.642、0.694、0.593及0.916。术后CRC患者血清HA水平显著降低(P<0.001),但术后血清S1P水平与术前差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清S1P与HA结合检测在结直肠癌的辅助诊断及预后评估中具有一定的临床价值。

鞘氨醇-1-磷酸受体4在口腔鳞状细胞癌中的表达及生物学功能

目的 :探讨鞘氨醇-1-磷酸受体4(sphingosine-1-phosphate receptor 4,S1PR4)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及生物学功能。方法 :通过实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、免疫印迹实验(Western blot)和免疫组织化学染色,分析OSCC组织样本及细胞系(WSU-HN4、WSU-HN6、CAL27、WSU-HN30)中S1PR4的表达。通过S1PR4拮抗剂(CYM50358)抑制S1PR4活性,利用CCK-8以及克隆形成实验检测CYM50358对OSCC细胞增殖的影响。通过流式细胞术分析CYM500358对OSCC细胞凋亡的影响。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:OSCC中的S1PR4转录及表达显著上调,CYM50358处理组OSCC细胞增殖活性显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞克隆形成能力显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞凋亡比例显著高于空白对照组(P<0.05)。结论:S1PR4在OSCC中表达上调,S1PR4拮抗剂可抑制OSCC细胞生长并促进细胞凋亡,或为OSCC的治疗提供新的潜在靶点。

1-磷酸鞘氨醇受体3对脂多糖处理大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)对脂多糖(LPS)处理大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法将培养好的大鼠肾小管细胞(NRK-52E)分为对照组、LPS组、S1PR3激动剂+LPS组。对照组不做处理;LPS组予LPS(20μg/ml)刺激12h后做离心收集待检;S1PR3激动剂+LPS组先用S1PR3激动剂KRX-725预处理2 h后再予LPS(20μg/ml)刺激12 h后做离心收集待检。流式细胞术检测各组细胞凋亡率、钙离子表达及caspase-3表达的差异,ELISA试剂盒检测Calpain 1、Calpain 2的表达差异,Western Blot检测各组细胞中S1PR3的表达差异。结果LPS处理后脓毒症NRK-52E细胞模型成功建立,相比于对照组,LPS组和S1PR3激动剂+LPS组的细胞凋亡率、S1PR3表达、钙离子浓度、Calpain 1与Calpain2的表达、caspase-3表达均显著增加(均P<0.05);与LPS组相比,S1PR3激动剂+LPS组的细胞凋亡率、钙离子浓度、Calpain 1与Calpain2的表达、caspase-3表达均显著增加(均P<0.05),S1PR3表达显著增加(P<0.05)。结论S1PR3的激活能够增加肾小管上皮细胞内的钙离子浓度,从而激活caspase-3细胞凋亡信号通路,导致脓毒症肾小管上皮细胞凋亡增加。

不同来源的人血清白蛋白对1-磷酸鞘氨醇的结合运载作用研究

目的研究不同来源的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)的结合运载作用。方法以人血浆来源HSA(plasma derived HSA,pHSA)和基因重组HSA(recombinant HSA,rHSA)样本为研究对象,首先利用LC-MS/MS技术,比较分析上述样本中S1P含量的差异;其次,在生理浓度条件下,向HSA样本中直接添加S1P进行负载处理,比较不同来源的HSA对S1P结合作用;在无血清培养条件下,将不同来源HSA样本与HUVEC细胞进行共培养,分析不同处理组的细胞培养上清中S1P含量的变化,比较不同来源的HSA对细胞中S1P的运载作用。利用表面等离子体共振SPR技术分析不同来源HSA与S1P分子的相互作用情况并计算其亲和力大小。利用AutoDock Vina软件和Molprophet平台,对HSA和S1P进行分子对接分析,并预测HSA中S1P的关键结合口袋域。结果S1P含量检测结果显示,所有pHSA样本中均含有一定水平的S1P(3.31±0.03~30.35±0.07)μg/L,且不同厂家生产的pHSA样本中的S1P含量差异显著(P<0.001);然而所有rHSA样本中均未检测出S1P。负载处理结果显示,不同来源HSA对S1P的结合作用存在显著差异(P<0.001),且rHSA对S1P平均负载量约为pHSA的2倍(ΔC_(rHSA)=801.75±142.45μg/L vsΔC_(pHSA)=461.94±85.73μg/L;P<0.001,t=5.006)。共培养处理结果显示,所有HSA样本处理组与HUVEC细胞共培养处理6h后上清中的S1P浓度均明显升高,而空白对照组上清中S1P浓度无变化;处理6 h、12 h和24 h后各处理组间上清中S1P浓度均存在显著差异(P<0.001)。SPR分析结果显示,与rHSA相比,pHSA与S1P之间的亲和力更高(KD_(pHSA-S1P):2.38E-06,KD_(rHSA-S1P):3.72E-06)。分子对接分析和结合口袋预测发现,HSA与S1P的关键结合口袋可能位于HSA分子的IB亚结构域。结论不同来源的HSA对S1P均具有一定的结合运载作用,但这种作用差异具有统计学意义,与HSA分子的IB亚结构域存在关联。

1-磷酸鞘氨醇通过提高心脏微血管密度缓解压力负荷诱导的小鼠心力衰竭

目的:探究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate, S1P)通过调节心脏微血管密度对压力负荷诱导的小鼠心力衰竭的作用及相关机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术(sham)组、sham+2-乙酰基-5-四羟基丁基咪唑(2-acetyl-5-tetrahydroxybutyl imidazole, THI;S1P裂解酶抑制剂)组、主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction, TAC)组和TAC+THI组。TAC手术后1周给予THI灌胃处理,实验终点检测各组小鼠血浆和心脏匀浆组织中S1P水平;心脏超声和Millar导管检测心功能;HE染色检测各组小鼠心脏肥大程度,Masson染色观察各组小鼠心脏间质和管周纤维化程度,CD31和麦胚凝集素免疫荧光染色观察各组小鼠心肌细胞横截面积和心脏微血管密度;RT-qPCR检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)、I型胶原蛋白(collagen type I)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ)、CD31、血管性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)和血管生成素1(angiopoietin 1, Ang1)的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠心脏组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、VEGF受体(VEGF receptor, VEGFR)、磷酸化VEGFR、蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)和磷酸化Akt的蛋白水平。结果:TAC小鼠体内S1P水平明显降低,给予THI可显著升高小鼠血浆和心脏匀浆组织中S1P水平。S1P能显著改善心衰小鼠心功能,减轻心肌肥大和纤维化表型,抑制ANP、BNP、collagen type I和collagen type Ⅲ的表达,上调血管内皮标志物CD31、Ang1和vWF的表达,激活VEGF-VEGFR-Akt信号通路,促进心脏微血管生成。结论:S1P通过VEGF-VEGFR-Akt信号通路提高心衰小鼠心脏微血管密度,从而缓解压力负荷诱导的心力衰竭。

老年男性初发2型糖尿病患者鞘氨醇-1-磷酸与骨代谢的相关性

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)与骨转换标志物、骨密度和骨折发生风险的相关性。方法 纳入59例老年男性初发2型糖病患者作为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)组,49例非糖尿病居民作为非糖尿病(non diabetes mellitus, NDM)组,收集临床资料,采集静脉血,检查骨密度,计算FRAX评分,比较两组一般资料、糖脂代谢和骨代谢生化指标、骨密度、骨折发生风险及S1P水平的差异,分析S1P与骨转换标志物、骨折发生风险和糖代谢指标的相关性。结果 与NDM组比较,T2DM组空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin Alc, HbAlc)、游离脂肪酸(free fatty acids, FFA)显著升高(P<0.01),总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglycerides, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组甲状旁腺激素(parathyroid hormone, PTH)显著降低(P<0.01),钙(calcium, Ca)、磷(phosphorus, P)差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组骨钙素(osteocalcin, OC)、骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、β-Ⅰ型胶原C端肽(β cross-linked c-telopeptide, β-CTX)显著降低(P<0.01),Ⅰ型胶原氨基端延长肽(procollagen type 1 n-terminal propetide, PlNP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate-resistant acid phosphatase-5b, TRACP-5b)和不同部位骨密度差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组10年内主要骨质疏松性骨折风险FRAX评分(FRAX 10-year major osteoporotic fracture risk score, FRAXM)和10年内髋部骨折风险FRAX评分(FRAX 10-year hip fracture risk score, FRAXH)显著升高(P<0.01);T2DM组血清S1P显著高于NDM组(P<0.01)。NDM组S1P与TRACP-5b呈正相关(P<0.05);T2DM组S1P与5种传统骨代谢标志物均无相关性(P≥0.05)。两组血清S1P与骨密度、FRAXM和FRAXH均无相关性(P≥0.05)。两组血清S1P与FPG和HbAlc均无相关性(P≥0.05)。结论 老年男性T2DM组血清S1P水平升高,S1P与传统骨转换标志物、骨密度、FRAXM和FRAXH无相关性。NDM组血清S1P与TRACP-5b呈正相关。

血清簇集蛋白、1-磷酸鞘氨醇水平对脓毒症急性肝损伤患者的预后价值

目的 探讨血清簇集蛋白(Clusterin)、1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平对脓毒症急性肝损伤患者预后的评估价值。方法 选择2019年3月—2022年5月徐州医科大学附属连云港医院收治的脓毒症急性肝损伤患者127例,根据患者治疗28 d预后情况分为死亡组35例、存活组92例。计量资料两组间比较采用成组t检验,计数资料两组间比较采用χ^(2)检验,对可能影响患者预后的各因素进行单因素及多因素Logistic回归分析,相关性分析采用Pearson相关性分析,采用受试者工作特征曲线分析血清Clusterin、S1P对患者预后评估价值。结果 两组患者肝损伤程度、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评分(SOFA)、合并急性肾损伤、凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、Child-Pugh肝功能分级以及C反应蛋白比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。死亡组患者血清Clusterin、S1P水平均显著低于存活组(t值分别11.094、10.390,P值均<0.05)。重度肝损伤患者血清Clusterin、S1P水平显著低于轻、中度肝损伤患者(t值分别为9.825、11.418,P值均<0.05)。多因素回归分析显示,肝损伤程度(OR=1.260,95%CI:1.081~1.468)、APACHEⅡ评分(OR=1.031,95%CI:1.019~1.044)、SOFA评分(OR=1.066,95%CI:1.039~1.094)、Clusterin(OR=0.899,95%CI:0.859~0.940)和S1P(OR=0.824,95%CI:0.749~0.908)为影响脓毒症患者预后的独立危险因素(P值均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Clusterin、S1P与二者联合对患者预后评估价值的曲线下面积分别为0.864、0.861、0.949。脓毒症急性肝损伤患者血清Clusterin、S1P与ALT、TBil、PT、INR均呈显著负相关关系(P值均<0.05)。结论 与存活组相比,脓毒症急性肝损伤死亡患者血清Clusterin以及S1P显著降低,且Clusterin以及S1P水平与患者肝损伤程度密切相关,二者联合对脓毒症急性肝损伤患者预后具有着较好的预测价值,有望成为脓毒症急性肝损患者预后预测的潜在标志物。

鞘氨醇-1-磷酸在肿瘤转移中的调控机制研究进展

鞘氨醇-1-磷酸(S1P)是鞘磷脂代谢产生的一种生物活性脂类,广泛存在于多种组织、血液及淋巴液中。作为一种分泌型的溶血磷脂,S1P在肿瘤发生时异常增高,通过结合其特定受体(S1P受体1~5)参与肿瘤的发生发展。S1P除可通过促进肿瘤细胞侵袭、迁移、上皮-间充质转化外,还可通过调控肿瘤微环境中诸多基质细胞促进肿瘤转移。因此,S1P可作为肿瘤转移的诊断标志物,并具有药物治疗靶点的潜能。未来,设计靶向S1P及其信号通路的方案将成为肿瘤治疗的新思路。

真武汤调节鞘氨醇激酶1-磷酸鞘氨醇信号通路抗阿霉素肾病大鼠肾损伤的作用研究

目的:研究真武汤对阿霉素肾病(Adriamycin Nephropathy,AN)模型大鼠鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase 1,SphK1)-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)信号分子的影响,探讨真武汤治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:常规检测各试验组动物血脂、血浆白蛋白、24小时尿蛋白含量;实时聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RTPCR)检测肾组织中SphK1基因表达;免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织中SphK1蛋白表达;液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测SphK1、S1P活性。结果:模型组大鼠血脂水平、24小时尿蛋白含量显著升高,血浆白蛋白水平显著降低(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组血脂水平、24小时尿蛋白含量明显降低,血浆白蛋白水平明显升高(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、基因和蛋白表达及S1P含量明显下降(P<0.05),各治疗组之间差异无统计学意义。结论:真武汤可减少AN模型大鼠肾组织的SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量,改善其蛋白尿、血脂及血浆白蛋白水平。其作用可能与抑制SphK1、S1P信号分子的表达有关。

1-磷酸鞘氨醇调控血管功能在动脉粥样硬化中的研究进展

在日常生活中,高血压、代谢综合征、吸烟和缺乏运动等条件可能诱发血管内皮细胞障碍^([1]),具体表现为内皮舒张功能受损、血管通透性增加、氧化应激和炎症等病理现象^([2]),正常内皮细胞的一个关键功能是防止血管黏附,内皮屏障异常导致内膜中形成包括各种细胞、脂质和组织碎屑在内的斑块,推动动脉粥样硬化的发展^([1])。

1-磷酸鞘氨醇及其信号传导在中枢神经系统疾病中的研究进展

1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)作为一种鞘脂代谢物已成为调节各种生理过程的关键物质,参与分化、增殖、迁移、形态发生、细胞骨架形成、黏附、凋亡等过程。1-磷酸鞘氨醇既可以与细胞膜上相应的受体结合激活S1P-S1PR信号通路,也可以在细胞内发挥作用。近年来研究发现其水平变化与中枢神经系统疾病的发生发展存在一定的联系。本文综述了1-磷酸鞘氨醇在神经系统疾病发生及治疗中的最新认识,并进一步阐明其在中枢神经系统疾病治疗及发展中的分子机制。

1-磷酸鞘氨醇在缺血性卒中中的作用研究进展

脑组织缺血坏死后释放出炎性因子诱发炎症反应,并激活神经胶质细胞参与损伤后的级联免疫反应,1-磷酸鞘氨醇(sphingosine1-phosphate,S1P)代谢与缺血性卒中具有相关性,神经胶质细胞在炎症状态下上调1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine1-phosphatereceptors,S1PRs)的表达,S1PRs发出S1P信号参与脑组织中炎症介质的上调,S1P与S1PRs结合参与缺血性卒中后炎症和免疫反应、内皮细胞的黏附和血管生成以及改善血脑屏障功能。本文就S1P的代谢和生理功能及其与S1PRs结合后改善缺血性卒中的潜在机制进行综述,以期为寻找缺血性卒中相关药物新靶点提供依据。

亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇信号轴的影响

背景:血管内皮细胞是砷毒作用的关键靶点,砷致内皮细胞损伤的分子机制有待进一步研究。目的:研究亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞的损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号轴的影响。方法:分离培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,将人脐静脉内皮细胞暴露于含0,5,10,15,20,25μmol/L亚砷酸钠的培养液24 h,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;荧光探针DCFH-DA染色检测细胞内活性氧含量;Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;ELISA检测细胞内1-磷酸鞘氨醇含量;实时荧光定量PCR、Western blot分别检测血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇受体1的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与对照组(0μmol/L亚砷酸钠)相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:细胞存活率逐渐降低,且呈剂量-效应关系;细胞融合率逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,脱落漂浮的细胞逐渐增多;细胞内活性氧含量逐渐升高;细胞凋亡率逐渐升高;细胞内1-磷酸鞘氨醇含量逐渐升高;血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1 mRNA和蛋白的相对表达量逐渐升高,1-磷酸鞘氨醇受体1 mRNA和蛋白相对表达量逐渐降低。②结果提示,亚砷酸钠诱导的人脐静脉内皮细胞损伤可能与SPHK1/S1P信号轴激活、1-磷酸鞘氨醇受体1下调有关。SPHK1/S1P信号轴可能成为砷致心血管损伤的新靶点。

过表达磷脂转运蛋白对小鼠脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸含量的影响

目的:探讨血浆脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和磷脂转运蛋白(PLTP)的相互作用及机制。方法:检测雄性10周龄PLTP转基因(PLTP-Tg)及野生型(WT)小鼠血浆S1P和脂蛋白上S1P含量,转运实验检测PLTP对S1P的转运作用,免疫印迹检测S1P载体载脂蛋白M(apoM)含量。结果:PLTP-Tg小鼠血浆S1P含量较WT小鼠下降21.1%(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL)组分上S1P含量下降约35.1%,而低密度脂蛋白(LDL)组分上S1P比例则增加了127.4%。转运实验表明,在37℃时D-Hanks缓冲液中PLTP能够促进S1P从红细胞转运至重组脂质体。PLTP-Tg小鼠血浆中apoM含量与WT小鼠比较无变化。结论:生理水平PLTP对保持HDL上S1P含量有重要意义,过表达PLTP可显著降低HDL上S1P,同时升高LDL上S1P,其机制可能与PLTP介导S1P转运有关。

磷脂转运蛋白缺乏降低小鼠血浆及高密度脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸含量

目的循环中鞘磷脂信号分子鞘氨醇-1-磷酸（s1P）主要富集于高密度脂蛋白（HDL）颗粒并对HDL功能产生重要影响。HDL上S1P来自何处并通过何种途径富集于HDL上对分析HDL功能具有重要意义。磷脂转运蛋白（PLTP）通过介导磷脂转运引起HDL重构及功能改变的分子机制很可能与S1P的转运有关。本研究采用液相-串联质谱（LC-Ms／MS）检测C57BL／6小鼠（WT）和相同遗传背景下PIJTP缺陷（PLTP-/-）小鼠脂蛋白上的S1P含量，分析PI胛对血浆S1P分布的影响，并通过体外转运实验分析PLTP介导S1P在红细胞与脂蛋白之间的转运作用。方法选用普通饲料喂养下的wT和PLTP-/-小鼠，收集血浆并采用超速离心法分离脂蛋白，抽提脂质，采用LC—Ms／MS方法进行S1P定量。

1-磷酸-神经鞘氨醇预防化疗大鼠卵巢功能损害的实验研究

【目的】探讨1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)导致的大鼠卵巢功能损害的保护作用及可能机制。【方法】40只雌性SD大鼠随机分为4组,即实验对照组(生理盐水组)、CTX组、S1P+NS组及S1P+CTX组,每组10只,于结束用药的第1～2周内的动情间期处死,观察卵泡数量的变化,并采用半定量RT-PCR检测卵巢组织Bcl-2及Bax的mRNA变化。【结果】S1P+CTX组的原始卵泡、初级卵泡和生长卵泡数与S1P+NS组、对照组的差别不显著(P>0.05),而CTX组的所有卵泡数均少于其余3组,其差异均有显著性意义(P<0.01)。卵巢组织中,S1P两组Bcl-2 mRNA的表达明显高于对照组及CTX组(P<0.01),Bax mRNA表达明显低于对照组及CTX组(P<0.01);而CTX组的Bcl-2 mRNA表达明显低于对照组及S1P两组(P<0.01),BaxmRNA表达明显高于对照组及及S1P两组(P<0.01)。【结论】S1P能预防CTX导致的大鼠卵巢功能损害,其抗凋亡作用可能是通过调节Bcl-2家族成员表达而实现。

1-磷酸鞘氨醇后适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)后适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)缺血30 min/再灌120 min的方法建立在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。60只大鼠随机分为5组(每组12只),即①假手术组(sham group);②缺血/再灌注组(I/R group);③S1P 0.5 mg·kg-1;④S1P 1 mg·kg-1;⑤S1P 2 mg·kg-1剂量组。四氮唑染色法观察心肌梗死面积;ELISA法测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;比色法测定血浆丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)含量;光学显微镜及透射电子显微镜技术观察心肌组织形态学变化。结果与I/R组比较,S1P 0.5、1、2 mg·kg-1可降低心肌梗死面积(P<0.05),降低血浆CKMB活性(P<0.01)及MPO含量(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。S1P 1、2 mg·kg-1可降低血浆MDA水平(P<0.01)。并可改善心肌坏死、炎细胞浸润、组织水肿以及线粒体损伤程度。结论 S1P后适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,该作用可能与抑制炎症反应、拮抗氧化应激、保护线粒体结构功能有关。

1-磷酸鞘氨醇受体1-3(S1P1-3)在去势雄性大鼠阴茎海绵体组织中的表达

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体1-3(S1P1-3)在去势雄性大鼠阴茎海绵体内的表达,及其与NOS/NO/c GMP、Rho A/Rho激酶等信号通路的关系。方法:18只8周龄健康雄性SD大鼠,随机分为去势组、对照组及去势后睾酮替代组(替代组)各6只,去势组和替代组大鼠切除双侧睾丸、附睾,替代组大鼠去势术后给予生理剂量丙酸睾酮3 mg/(kg·d)皮下注射4周,对照组为假手术组,去势组及对照组大鼠术后给予等量植物油皮下注射4周,12周龄时,测定各组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICPmax/MAP)、采用免疫组化和Western印迹分析S1P1-3、e NOS、P-e NOS、ROCK1、ROCK2在阴茎海绵体内的表达变化。结果:去势组大鼠血清睾酮水平[(0.41±0.04)nmol/L]显著低于对照组[(16.01±1.02)nmol/L]及替代组[(15.84±1.32)nmol/L](P<0.01),而替代组与对照组睾酮水平无显著差异。去势组ICPmax/MAP比值在0 V、3 V和5 V电刺激盆神经节时(0.088±0.014、0.323±0.014、0.432±0.012)均显著低于对照组(0.155±0.011、0.711±0.010、0.819±0.024)及替代组(0.153±0.012、0.696±0.017、0.763±0.027)(P<0.01),而对照组与替代组无显著差异。去势组S1P1、e NOS、P-e NOS的蛋白表达量[以目的蛋白占内参GAPDH的百分率表示:S1P1(49.99±3.39)%,e NOS(46.82±3.81)%,P-e NOS(45.42±4.35)%]显著低于对照组[S1P1(72.57±3.06)%,e NOS(89.76±3.98)%,P-e NOS(82.53±8.92)%]和替代组[S1P1(71.77±4.43)%,e NOS(87.19±4.23)%,P-e NOS(79.82±7.38)%](P<0.01),去势组S1P2、S1P3、ROCK1、ROCK2蛋白表达量[以目的蛋白占内参GAPDH的百分率表示:S1P2(82.35±4.13)%,S1P3(61.03±5.14)%,ROCK1(74.50±4.02)%,ROCK2(69.83±5.75)%]显著高于对照组[S1P2(41.67±1.68)%,S1P3(31.66±2.67)%,ROCK1(35.69±5.56)%),ROCK2(39.85±7.17)%]和替代组[S1P2(42.80±3.87)%,S1P3(32.25±4.22)%,ROCK1(38.06±5.21)%,ROCK2(42.36±4.44)%](P<0.01)。结论:雄激素缺乏导致大鼠ICPmax/MAP显著降低,可能与阴茎海绵体内S1P1表达下调、抑制e NOS/NO/c GMP信号通路,S1P2、S1P3表达升高、激活Rho A/Rho激酶信号通路有关。