肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白2(FhSAP-2)的原核表达及分离纯化

目的建立肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白2(FhSAP-2)原核表达系统。方法用生物信息学软件OptimumTMCodon优化密码子适应指数(CAI)、最优密码子频率(FOP)及GC含量以获得适合大肠杆菌BL-21表达的FhSAP-2基因序列,并克隆到原核表达载体pET22b和pET28a中,经IPTG诱导其表达并经亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的蛋白。结果 OptimumTMCodon获得优化后的FhSAP-2序列,经测序及酶切鉴定结果表明重组质粒pET22b-FhSAP-2、pET28a-FhSAP-2构建成功,进一步实验结果表明FhSAP-2在pET28a中包涵体部位表达,可溶部位不表达;在pET22b中可溶部位表达量低,包涵体部位无表达。继而经Ni-NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得电泳纯的FhSAP-2蛋白。结论成功建立FhSAP-2的原核表达系统。

日本血吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白的基因克隆表达与免疫原性分析

目的克隆并表达日本血吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白(SLP),并对其免疫原性进行分析。方法根据华支睾吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白序列,采用tblastn法比对,在基因库中找出与之同源的日本血吸虫EST片段,并经过DNAStar、Sig-nalP3.0分析获得Sj-SLP基因序列,经PCR扩增从日本血吸虫cDNA中获得的目的基因克隆入原核表达载体pET15b,转化至大肠埃希菌BL21,异丙基巯基半乳糖诱导表达并纯化;采用Westernblot分析其抗原性;用纯化的SLP重组蛋白免疫兔,ELISA检测免疫原性。结果 PCR扩增获得Sj-SLP基因,约296bp,并成功地进行了原核表达,纯化的表达产物重组Sj-SLP(rSj-SLP)能被感染兔血清识别,而不能被正常兔血清识别。rSj-SLP免疫兔可产生1∶12800的特异性抗体。结论日本血吸虫存在鞘脂激活蛋白样蛋白,rSj-SLP具有较强的免疫原性和抗原性。

寄生虫鞘脂激活蛋白样蛋白的研究进展

鞘脂激活蛋白样蛋白（saposin-like proteins,SAPLIP）是一大类蛋白家族,广泛存在于从最原始的生物变形虫类到高等的哺乳动物等生物体内,发挥着各种生物学作用.对寄生虫的SAPLIP的研究,可以进一步解释其进化过程以及与宿主之间的关系,为寄生虫病的防治提供理论基础.

锡兰钩虫SLP-1基因的克隆表达与免疫学特性分析

为了研究锡兰钩虫鞘脂激活蛋白样蛋白(Ace-SLP-1)的免疫学特性,本研究以锡兰钩虫成虫cDNA为模板,根据GenBank中Ace-SLP-1基因序列(DQ855414.1)设计特异性引物,采用RT-PCR扩增Ace-SLP-1基因,结果显示,PCR扩增了Ace-SLP-1基因,其ORF全长315 bp,编码104个氨基酸;利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且有跨膜结构域等;根据AceSLP-1基因编码氨基酸序列信息将其成熟肽编码基因序列(Ace-XL-SLP-1)克隆至原核表达载体pET-28a中,构建的重组质粒鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示重组Ace-XL-SLP-1蛋白(r Ace-XL-SLP-1)以包涵体形式表达,分子质量为14.4 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可以分别被鼠His标签MAb及锡兰钩虫感染犬的阳性血清所识别,具有较好的反应原性。将r Ace-XL-SLP-1分别以0~40μg/mL体外刺激健康犬的外周血淋巴细胞(PBMC),采用CCK-8试剂盒检测其对PBMC增殖的影响,结果显示,与对照组相比,20μg/mL与40μg/mL的r Ace-XL-SLP-1均可显著刺激犬PBMC的增殖(P<0.05),表明该重组蛋白能够诱导宿主细胞产生免疫应答反应,免疫原性较好。本研究首次克隆表达了锡兰钩虫成虫Ace-XL-SLP-1基因,并对其免疫学特性做了初步研究,为锡兰钩虫血清学诊断方法的建立和疫苗的研制提供参考数据。