藏药余甘子鞣质部位主要药效成分在人工胃肠液中的稳定性研究

目的:研究余甘子鞣质部位主要药效成分在人工模拟胃、肠液中的稳定性,为余甘子体内代谢研究提供依据。方法:采用人工模拟胃液、肠液,体外温孵,HPLC-UV法测定余甘子鞣质部位中主要药效成分的含量变化情况;分别考察余甘子鞣质部位主要药效成分在人工胃肠液中的稳定性。结果:余甘子鞣质部位中主要药效成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在人工胃液中比较稳定,含量变化不明显,降解剩余量在100%左右波动,半衰期大于90 h;在人工肠液中不稳定,含量先增加后减少,降解剩余量在100-300%之间波动,半衰期大于10 h。结论:余甘子鞣质部位主要药效成分在人工胃液中比较稳定,各成分含量变化不明显;余甘子鞣质部位主要药效成分在人工肠液中不稳定,主要成分含量先增加后减少,推测大分子可水解鞣质可以转化成小分子成分,但是随着时间延长所有成分均在降解。

藏药余甘子鞣质部位对人肿瘤细胞凋亡与周期的影响

目的研究藏药余甘子鞣质部位的体外抗肿瘤作用机制。方法余甘子鞣质部位40、80、160μg·m L-1作用于人肿瘤A549及BEL-7402细胞48 h,MTT法测定剂量反应曲线;倒置相差显微镜下观察两种细胞形态学的变化;流式细胞术测定细胞周期及凋亡的情况。结果不同浓度的余甘子鞣质部位作用48 h对A549和BEL-7402细胞均表现明显的细胞毒作用;倒置镜下可见加药组细胞生长受到明显抑制,细胞收缩变小;流式细胞术测定发现余甘子鞣质部位具有显著的诱导细胞早期凋亡和G2/M期阻滞作用。结论余甘子鞣质部位可通过诱导肿瘤细胞凋亡和对细胞周期阻滞而发挥其体外抗肿瘤作用。

藏药余甘子鞣质部位对HT1080细胞迁移与侵袭能力的影响研究

目的探讨藏药余甘子鞣质部位对人纤维肉瘤细胞(HT1080)迁移和侵袭能力的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测余甘子鞣质部位对HT1080细胞活力的影响。分别采用划痕实验和Transwell侵袭实验法检测余甘子鞣质部位对HT1080细胞迁移和侵袭能力的影响。结果余甘子鞣质部位作用48h能够显著抑制HT1080细胞的增殖,其半数抑制浓度(IC50)为0.174g·L-1。与对照组比较,余甘子鞣质部位质量浓度为0.1g·L-1,作用3h后即可明显降低HT1080细胞迁移面积;在质量浓度为0.025g·L-1时可明显降低HT1080细胞透过胶膜的数量,降低其侵袭能力。结论余甘子鞣质部位可有效抑制人纤维肉瘤细胞迁移和侵袭能力。

基于HPLC-MS^n和化学计量学的指纹图谱在毛诃子鞣质部位质量评价中的应用

目的:建立毛诃子鞣质部位HPLC指纹图谱。方法:采用Atlantic T3(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,进样量20μL,柱温30℃。采用相似度软件和SPSS、SIMCA软件对11批毛诃子鞣质部位的色谱数据进行化学计量学分析。结果:标定出20个共有峰。结果显示11批毛诃子鞣质部位相似度在0.832-0.973之间,只有新疆产地药材的鞣质部位的相似度在0.9以下。聚类分析将鞣质部位大致分为3类,与主成分分析结果一致。偏最小二乘判别分析找到1、13和14号峰可能是鉴别毛诃子样品最主要的色谱峰。采用HPLC-MSn方法总结出毛诃子鞣质部位中14个化合物的液质信息。结论:将毛诃子鞣质部位HPLC指纹图谱数据采用化学计量学分析方法进行分析,方法快速、简便、重复性好,可作为藏药毛诃子鞣质部位质量控制有效方法之一。

藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响

目的:考察藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响。方法:采用"Cocktail"探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时测定6种探针药物氨苯砜、氢溴酸右美沙芬、香豆素、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的代谢消除率,评价余甘子鞣质部位对P450酶中CYP3A4、CYP2D6、CYP2A6、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9亚酶活性的影响。结果:余甘子鞣质部位对P450酶影响较小,CYP3A4,CYP1A2的IC50值超过200μg·m L-1,CYP2C9的IC50值超过500μg·m L-1。结论:藏药余甘子鞣质部位对肝P450酶活性影响较弱。

藏药余甘子鞣质部位对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的研究余甘子鞣质部位对荷肉瘤S180和肝癌H22移植瘤小鼠的肿瘤抑制作用及免疫器官的影响。方法将72只SPF级的ICR小鼠分为6组,分别为空白对照组、荷肉瘤S180模型组、余甘子鞣质部位低(0.5 g·kg-1,相当于生药3.64 g·kg-1)、中(1.0 g·kg-1,相当于生药7.27 g·kg-1)、高(2.0 g·kg-1,相当于生药14.54 g·kg-1)剂量组,另设环磷酰胺组阳性药组;对荷肝癌H22小鼠的抑瘤实验分组同上。小鼠分别连续ig给药10 d及12 d后,计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数。结果余甘子鞣质部位低、中、高剂量组对荷肉瘤S180移植瘤小鼠组的抑瘤率分别为16.52%、40.08%(P<0.05)、56.19%(P<0.01),对荷肝癌H22移植瘤小鼠组的抑瘤率分别为18.36%、34.01%(P<0.05)、51.02%(P<0.01)。与模型组相比,余甘子鞣质部位低、中、高剂量组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均无显著性差异(P>0.05)。结论灌胃给予余甘子鞣质部位对两种荷瘤小鼠的肿瘤生长均有明显的抑制作用,且呈一定剂量依赖性,对荷瘤小鼠免疫器官未见明显影响。

基于多成分和总鞣质测定的藏药大三果及其鞣质部位质量研究

目的建立HPLC法测定大三果中3种特征成分含量,建立分光光度法测定大三果中总鞣质含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-Aq(250×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%甲酸/水;流速为1 mL·min-1;检测波长为270 nm,测定大三果药材和鞣质部位没食子酸、柯里拉京和鞣花酸含量。以没食子酸为对照品,采用分光光度法测定大三果药材和鞣质部位总鞣质含量。结果 HPLC测定中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸线性范围分别为0.91-4.55μg、0.274-1.368μg和0.329-2.634μg。药材中3种成分平均回收率依次分别为101.06%、101.72%和100.27%,鞣质部位中3种成分平均回收率分别为100.4%、100.85%和101.70%。分光光度法中没食子酸在1.008-10.08μg·mL-1成线性。药材和鞣质部位中总鞣质回收率分别为100.25%和100.52%。结论本方法快速、准确、重复性较好,可为大三果及其鞣质部位的质量控制提供依据。

藏药余甘子药材及其鞣质部位的指纹图谱评价研究

建立不同产地藏药余甘子药材及其鞣质部位HPLC指纹图谱。采用Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，甲醇-0.2%冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速1 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长260 nm。提取13个色谱峰为药材指纹图谱共有峰，11个色谱峰为鞣质部位指纹图谱共有峰，采用对照品指认了5个主要色谱峰，运用相似度评价软件对所收集的8个不同产地藏药余甘子药材及其鞣质部位进行系统比较与归类，8个余甘子药材相似度在0.763~0.993，鞣质部位相似度在0.903~0.991，通过聚类分析、主成分分析将不同产地的余甘子药材和鞣质部位分别聚为3类。该法重复性好，简便可靠，为不同产地藏药余甘子药材及其鞣质部位质量控制和评价提供依据。

人肠内菌对藏药余甘子鞣质部位代谢的研究

目的研究人肠内菌对藏药余甘子鞣质部位的代谢。方法采用人肠内菌与余甘子鞣质部位在厌氧条件下,37℃共温孵培养的方法进行代谢,代谢样品通过离心、甲醇沉淀蛋白后,运用HPLC-MSn法对代谢物进行定性分析,运用HPLC-UV法对样品进行定量分析,并绘制时间含量曲线。结果余甘子鞣质部位在人肠内菌作用下用HPLC-MSn检测出13个成分,其中4个为代谢成分焦性没食子酸、甲基没食子酸、尿石素B和尿石素A;4个为原型成分没食子酸、柯里拉京、galloyl glucose、digalloyl glucose和5个待指认成分。样品中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸3个指标性成分的含量随人肠内菌代谢时间延长呈先增加后减少的趋势。结论余甘子鞣质部位可被人肠内菌代谢,代谢后其原型活性成分仍有保留,并且有新生成的抗癌活性成分出现。

基于网络药理学的余甘子有效部位调控巨噬细胞极化机制研究

目的筛选余甘子鞣质调控巨噬细胞极化的活性部位,探讨其调控巨噬细胞极化的主要化学成分和作用机制。方法采用CCK-8细胞增殖实验检测细胞活力;荧光定量PCR(qPCR)检测M2巨噬细胞标志物Arg-1、CD206、TNF-αmRNA表达水平以筛选有效部位;UPLC-Q-Exactive-MS/MS表征其化学成分。利用SwissADME和SwissTargetPrediction数据库筛选活性成分并获取其对应靶点,与GEO数据库中筛选的M1-M2型巨噬细胞差异基因取交集,运用Cytoscape 3.7.2软件绘制“药物成分-潜在靶点”网络图,并在STRING数据库进行蛋白互作关系分析,并进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果基于体外巨噬细胞极化模型,发现余甘子鞣质20%甲醇洗脱部位可显著抑制M2巨噬细胞标志物Arg-1和CD206 mRNA的表达,升高M1巨噬细胞标志物TNF-αmRNA的表达(P<0.001),且活性明显强于其他洗脱部位。通过比对余甘子鞣质与20%甲醇洗脱部位UPLC-MS总离子流图,鉴定出20%甲醇洗脱部位中化学成分29个,筛选出有效成分11个,对应靶点94个,药物-巨噬细胞相关交集靶点37个;KEGG富集分析结果显示,余甘子鞣质20%甲醇洗脱部位调控巨噬细胞极化相关靶点主要为HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、NF-kappaB信号通路等,涉及有机物的反应、对含氧化合物的反应、对化学刺激的细胞反应等显著相关生物过程。结论本研究基于巨噬细胞极化模型筛选出余甘子鞣质中调控巨噬细胞极化的主要活性部位,借助网络药理学初步证明了余甘子鞣质20%甲醇洗脱部位可以多成分、多靶点、多通路共同调控巨噬细胞极化,为进一步阐明余甘子鞣质调控巨噬细胞极化的药效物质和作用机制提供依据。

RP-HPLC法测定不同产地余甘子药材和鞣质有效部位中3种成分的含量

目的:建立反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定余甘子药材及鞣质有效部位中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸含量。方法:采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%冰醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为270mm和254nm;流速为1mL/min;柱温为30℃。对线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率各方法学进行考察。结果:没食子酸、柯里拉京和鞣花酸线性范围分别为0.1728-1.0368μg、0.0717-0.1792μg、0.2440-0.4880μg;平均回收率(n=6)分别为100.60%、100.65%、102.16%,RSD分别为2.83%、2.45%、1.65%。结论:建立的方法简便,重现性好,可用于余甘子药材和鞣质有效部位中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸的含量测定。