motA基因在空肠弯曲菌致病性相关趋化和定植中的作用

目的确定鞭毛马达蛋白（flagellarmotorprotein）MotA编码基因在空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）致病性相关趋化和定植中的作用。方法采用PCR扩增motA基因以及用于motA基因敲除的Kan。基因和plus—motA基因片段，目的扩增产物克隆后测序。根据同源重组原理，构建空肠弯曲菌NCTClll68株motA基因自杀质粒（pBlueskrit-Ⅱ-SKmotA-kan）和motA基因敲除突变株（motA-）。采用半固体平板迁移试验、基于硬琼脂平板（hardagarplus，HAP）的脱氧胆酸钠（SDC）体外趋化试验、小鼠空肠定植试验，了解空肠弯曲菌motA-突变株和野生株鞭毛动力、SDC趋化和BALB／c-ByJ小鼠空肠内定植能力差异性。结果所克隆的空肠弯曲菌motA基因核苷酸和氨基酸序列与已报道的相应序列相似性为100％。PCR和测序及含抗生素培养基连续传代培养结果证实，自杀质粒和motA-突变株构建成功。motA-突变株在半固体琼脂平板上的菌斑直径、在HAP上对0．2mol／LSDC趋化聚集环直径、黏附于小鼠空肠黏膜表面以及空肠内容物中motA-突变株数量均明显少于野生株（P〈0．05）。结论本研究成功构建了空肠弯曲菌motA基因敲除突变株。motA基因是空肠弯曲菌鞭毛动力以及致病性相关趋化和定植的必需基因。

黄芪甲苷对幽门螺杆菌定植相关因子的影响

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)定植相关因子的影响及其作用机制。方法:分别用大、中、小3个浓度ASIV在体外与H.pylori共同培养,以PBS处理作对照组。培养48 h后,尿素酶活性比色法定量检测ASIV对H.pylori尿素酶活性的影响;半固体布氏琼脂平板法检测不同浓度ASIV对幽门螺杆菌鞭毛运动的影响;实时荧光定量PCR测定H.pylori鞭毛蛋白基因(flaA、flaB)、尿素酶基因(ureA、ureB)及黏附素基因(babA、sabA、alpA、alpB)的表达。结果:与对照组相比,ASIV中、大剂量组H.pylori的尿素酶活性显著降低(P<0.05);H.pylori菌膜晕圈直径减小,但差异无统计学意义(P>0.05);ASIV大剂量组能显著下调ureA、ureB的mRNA表达水平(P<0.05),对flaA、flaB、babA、sabA、alpA、alpB的mRNA表达无明显影响。结论:ASIV可以通过抑制H.pylori尿素酶活性及相关基因(ureA、ureB)表达削弱H.pylori定植能力。