牙周炎病人牙龈组织PGE_2龈下韦荣菌的相关分析

目的 探讨牙周炎病人牙龈组织 PGE2 的含量及与细菌的关系。方法 采用放射免疫方法测定 PGE2 含量 ,以厌氧培养及活菌计数 (CFU)的方法检测了链球菌及韦荣菌的含量。结果 牙周炎病人牙龈组织 PGE2 的含量显著于健康对照组 ,并与韦菌的量呈显著正相关。结论 PGE2 与牙周炎骨质破坏关系密切 。

殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的克隆及鉴定

目的:对殊异韦荣菌(V.dispar)乳酸脱氢酶(LDH)基因及其前后基因进行克隆和鉴定,为龋病的预防和治疗奠定理论基础。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,利用PCR方法扩增LDH及其前后同源区序列片段,并克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,酶切及PCR鉴定后,进行测序。结果:PCR扩增产物特异,全长2 300 bp。测序结果经BLAST软件分析,共包含3个基因,分别是DNA旋转酶(gyr A)、LDH和一个由未知蛋白编码的基因。并与GenBank中所报道的变形链球菌LDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%,该基因序列已登陆GenBank,序列号为EU518464。结论:成功克隆殊异韦荣菌LDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。

殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化

目的:对殊异韦荣菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(sahH)基因进行克隆、鉴定、表达和纯化,为研究龋病的微生物致病机制提供理论依据。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,采用PCR方法扩增sahH基因序列,构建pET28a-sahH重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中,酶切、PCR鉴定和测序后,IPTG诱导蛋白表达,并进行分离纯化。结果:PCR扩增产物全长为1 410bp。测序结果经BLAST软件分析,与GenBank中所报道的绿脓假单胞菌sahH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。该基因序列已登陆GenBank,序列号为KC477409。SDS-PAGE分析,重组质粒在E.coli JM109中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为50 000,诱导5h蛋白表达量最高,浓缩后蛋白浓度为5.4g.L-1。Western blotting法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论:成功克隆了殊异韦荣菌sahH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架,且重组载体表达出融合蛋白,分离纯化得到目的蛋白。

殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定

目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序。将重组质粒转入BL21(DE3)中,选择最佳表达条件,提纯及测定活性。结果:PCR扩增产物特异,全长1139bp。测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403U/mL。结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。还获得了重组表达MDH蛋白的最适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性。

口腔微生物菌群与牙周炎发生发展的动态变化及作用机制

探讨口腔微生物菌群在牙周炎发生发展中的动态变化及其作用机制。方法 选取120例研究对象,分为对照组、溃疡组和愈合组,每组40例。采用分子生物学PCR技术,对其口腔微生物菌群进行定量分析。结果 对照组与溃疡组、愈合组比较,各类菌群存在显著差异,其中革兰阴性球菌、革兰阳性球菌菌群表现出明显改变(P<0.05);溃疡组与愈合组比较的结果显示,革兰阴性杆菌、革兰阳性杆菌菌群没有显著变化。口腔内韦荣菌与链球菌在各组之间比较存在显著差异,尤其是对照组与溃疡组、愈合组间的比较中,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 再次证明口腔微生物菌群在牙周炎发生发展中有重大的影响,韦荣菌、链球菌在牙周炎溃疡与愈合过程中可能具有重要影响,为牙周炎的发病机制提供了新的研究方向。

链球菌-韦荣菌共生对系统性疾病的诊断价值研究

口腔是人体生理功能的窗口,也是种类和数量繁多的微生物库。口腔微生态变化能够反映宿主与环境因素的相互作用,进而影响机体健康和疾病的进展。其中,链球菌属(Streptococcus)和韦荣菌属(Veillonella)是口腔最早的定殖菌和典型共生菌,共同参与口腔早期生物膜形成。大量研究显示,链球菌和韦荣菌共生失调不仅与龋病、牙周病等口腔疾病密切相关,而且可突破或入侵消化屏障实现远端定殖,已经成为预测多种系统性疾病发生、发展及预后的新的潜在生物标志物。本文综述链球菌-韦荣菌在口腔的共生致病机制,分析其在系统性疾病相关微生态研究中的变化特征,提出具有代表性的共生菌诊断组合,以期为系统性疾病的诊断和防治提供科学依据。

不同龋敏感程度学龄前儿童的牙菌斑微生物群落研究

目的通过高通量测序技术研究不同龋敏感程度学龄前儿童牙菌斑的菌群结构。方法对96名3~6岁儿童进行口腔检查,根据乳牙龋失补牙面指数分为无龋组(31名)、低龄儿童龋组(29名)和重度低龄儿童龋组(36名),采集牙菌斑样本,提取DNA,使用IlluminaHiSeq2500测序平台进行高通量测序,Qiime分析细菌群落结构差异。结果3组牙菌斑标本共发现12门31纲31目50科92属1104种细菌,绝大多数属于链球菌属(Streptococcus)、韦荣菌属(Veillonella)等9个优势菌属,3组微生物多样性相似(P>0.05)。重度低龄儿童龋组中韦荣菌属、乳杆菌属(Lactobacillus)、巨球形菌属(Megasphaera)、斯卡多维亚菌属(Scardovia)等菌属丰度高于其余两组。双歧杆菌属(Bifidobacterium)、韦荣菌属、乳杆菌属等与dmfs呈正相关,艾肯菌属(Eikenella)与dmfs呈负相关。IndicatorSpecies分析显示奇异菌属(Atopobium)、韦荣菌属、巨球形菌属、斯卡多维亚菌属、乳杆菌属、双歧杆菌属在重度低龄儿童龋组指示值较高。结论不同龋敏感程度儿童牙菌斑菌群结构存在差异。韦荣菌属、巨球形菌属、斯卡多维亚菌属、乳杆菌属、双歧杆菌属、奇异菌属可能是重度低龄儿童龋发生的指示菌属。

康复新液治疗复发性口腔溃疡的作用机制研究

目的探讨康复新液治疗复发性口腔溃疡(ROU)的作用机制,以期为临床用药提供指导。方法将90例ROU患者随机分为观察组和对照组,各45例,观察组患者给予康复新液联合干扰素-α2b治疗,对照组仅给予干扰素-α2b。另择同期无ROU病史的健康成年人45例为正常组。采用荧光定量PCR检测观察组和对照组患者治疗前后口腔链球菌、韦荣菌、奈瑟菌的变化,采用流式细胞术检测观察组和对照组患者治疗前后外周血CD4^+、CD25^+、Foxp^(3+)T细胞比例的变化,将结果均与正常组比较;同时,比较治疗后观察组和对照组的疗效。结果治疗前,观察组和对照组患者口腔链球菌、韦荣菌含量及外周血CD4^+、CD25^+、Foxp^(3+)T细胞比例均明显低于正常组(均P<0.05);治疗后,两组患者链球菌、韦荣菌含量及CD^(4+)、CD25^+、Foxp^(3+)T细胞比例均较治疗前明显提高(均P<0.05),但对照组均仍低于观察组和正常组(均P<0.05),而观察组与正常组比较均无统计学差异(均P>0.05)。治疗后,观察组疗效总有效率高于对照组(91.11%vs 73.33%,P<0.05)。结论康复新液治疗ROU的作用机制可能与口腔链球菌及韦荣菌含量的增加及外周血T淋巴细胞亚群比例的改善有关。

康复新液治疗复发性口腔溃疡临床观察及作用机制

目的探讨康复新液治疗复发性口腔溃疡临床效果及作用机制。方法将76例复发性口腔溃疡患者作为研究对象根据方法分组,各38例。对照组采用干扰素-a2b治疗,研究组则在对照组基础上增加康复新液治疗。比较两组复发性口腔溃疡治疗总有效率;口腔溃疡痊愈时间;干预前后患者口腔链球菌、韦荣菌含量。结果研究组复发性口腔溃疡治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组口腔溃疡痊愈时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预前两组口腔链球菌、韦荣菌含量相近,差异无统计学意义;干预后研究组口腔链球菌、韦荣菌含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论康复新液治疗复发性口腔溃疡临床效果确切,可升高口腔链球菌、韦荣菌含量,加速溃疡愈合,值得推广。