基于回肠顶端钠依赖性胆酸转运体探究栀子水提物对小鼠胆汁淤积的治疗作用

目的 基于回肠顶端钠依赖性胆酸转运体(apical sodium-dependent bile acid transporter,ASBT)考察栀子水提物对α-异硫氰酸萘酯(α-naphthylisothiocyanate,ANIT)诱导的胆汁淤积小鼠的治疗作用,并筛选潜在的活性化合物。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、栀子对照(240 mg/kg)组、ANIT组及栀子水提物低、中、高剂量(60、120、240 mg/kg)组和熊去氧胆酸(60 mg/kg)组,每组10只。给予药物进行干预,2次/d,连续14 d;于第12天单次ig ANIT(50 mg/kg)诱导小鼠胆汁淤积模型。采用栀子水提物干预ANIT诱导的小鼠小肠上皮MODE-K细胞;测定血清生化指标及肝脏、血清、胆囊、回肠及粪便中胆酸盐含量;测定小鼠回肠及MODE-K细胞ASBT及法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的表达;采用原位肠灌流及外翻肠囊法测定回肠组织及肝门静脉中牛磺胆酸钠(taurocholate sodium,TCA)含量;采用定性代谢组学技术测定给予栀子水提物2 h后血清及回肠组织中的化合物。结果 与ANIT组比较,栀子水提物能缓解肝脏病变,减少肝脏胆酸盐及回肠TCA含量(P<0.05、0.01),增加粪便胆酸盐的含量(P<0.05);增加小鼠回肠及MODE-K细胞FXR表达(P<0.05、0.01、0.001),减少ASBT的表达(P<0.01、0.001)。同时,筛选出潜在的活性化合物37个。结论 栀子水提物可通过激活回肠FXR而抑制回肠ASBT的表达和功能,减少回肠胆酸盐重吸收并促进粪便排泄,减少肝脏胆酸盐蓄积,从而缓解ANIT诱导的小鼠肝内胆汁淤积。

阿苯达唑-胆酸衍生物的制备、表征、跨膜转运及降解评价

目的基于顶端钠依赖性胆盐转运体(ASBT)对胆酸(BA)的特异性识别,为提高阿苯达唑(ABZ)的跨膜转运效率,制备阿苯达唑-胆酸衍生物(ABZ-C6O2-BA),并对其固态性质、跨膜转运行为和降解机制进行评价。方法以6-氨基-1-羟基-二己脂作为Linker连接ABZ与BA,合成ABZ-C6O2-BA;使用核磁共振氢谱(1H-NMR)和傅里叶红外技术(FTIR)对ABZ-C6O2-BA进行验证;通过粉末X射线衍射(PXRD)法、差示扫描量热(DSC)法和扫描电子显微镜(SEM)法进行固态性质的表征;建立Caco-2单层细胞模型在体外对ABZ-C6O2-BA进行跨膜转运研究;进行ABZ-C6O2-BA体外羧酸酯酶(CES)水解反应,通过超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)定性分析ABZ-C6O2-BA水解产物。结果1H-NMR和FT-IR结果显示特征峰的偏移,证实ABZ-C6O2-BA制备成功;PXRD、DSC和SEM结果显示ABZ-C6O2-BA为无定型形态,且微观结构较ABZ有明显不同;体外跨膜转运实验结果显示高质量浓度的ABZ-C6O2-BA跨膜转运表观渗透系数(P_(app))显著高于高浓度的ABZ(P<0.05),中、低质量浓度的ABZ-C6O2-BA P_(app)相近于ABZ;ABZ-C6O2-BA在72 h时降解率>92.8%,代谢良好;通过UPLC-MS定性分析ABZ-C6O2-BA水解产物为ABZ-Linker,即CES水解了酯键,使得BA与ABZ分开。结论所制备的ABZ-C6O2-BA以无定型态存在,跨膜转运效率在一定浓度下较ABZ显著增加,且与浓度不相关,推测跨膜方式为主动转运,连接的BA可被体内的酶水解。

口服肝靶向制剂介导受体ASBT和ASGPR在肝泡型包虫病大鼠模型体内的表达分析

目的通过测定顶端钠依赖性胆盐转运体(ASBT)和去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的表达研究,探讨其在肝泡型包虫病(HAE)药物治疗方面口服肝靶向制剂设计的可行性。方法18只雄性SD大鼠,10只大鼠造模,造模成功的8只大鼠为HAE组,正常组大鼠8只作为对照。采用免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量PCR对ASBT在HAE模型大鼠及正常大鼠的回肠组织的表达分布、蛋白及基因表达水平进行检测分析;采用同样的检测方法分析ASGPR在HAE大鼠模型的非患病肝组织、肝组织病灶边缘带及正常大鼠肝组织的表达水平。符合正态分布的计量资料2组间比较采用t检验,3组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量PCR结果均显示ASBT在HAE组回肠组织的表达较正常组表达上调(t值分别为5.309、4.110、28.060,P值均<0.05)。免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量PCR结果均显示,ASGPR在正常对照组大鼠肝组织、HAE组大鼠非患病肝组织和HAE组大鼠肝织病灶边缘带中表达差异有统计学意义(F值分别为110.666、128.201、143.879,P值均<0.001),其中HAE组较正常组表达水平高,且越靠近病灶组织表达越高。结论ASBT和ASGPR可作为HAE潜在的口服肝靶向制剂的介导受体,为设计用于治疗HAE的口服肝靶向制剂提供理论基础。

胆汁酸转运体与相关疾病及药物研发进展

胆汁酸(bile acids, BAs)是胆汁的主要成分之一,在人体的脂肪代谢过程中起到重要作用。人体中95%的胆汁酸中通过肠肝循环而维持,在肠肝循环过程中,存在4个主要介导胆汁酸进行跨膜转运的转运体,每一个转运体都发挥着不可或缺的作用。已有病例报道,胆汁酸转运体的基因缺陷会导致肠肝循环被破坏,引发严重的代谢性疾病,甚至威胁到患者生存。另一方面,代谢性疾病状态下的患者胆汁酸转运体表达也会发生改变,这提示胆汁酸转运体的改变或许是某些代谢性疾病发生的重要病理机制。因此,以胆汁酸转运体为靶点的新药研发正在成为研究热点。本综述探讨了不同胆汁酸转运体与疾病发生的关系,并对胆汁酸转运体靶点药物研发的最新进展进行总结,为后续针对胆汁酸转运体的研究提供指导。