顶青霉木聚糖酶的纯化与性质

从顶青霉 (Pencilliumcorylophilum)P 3 31培养液中分离到 3种木聚糖酶组分 ,分别称为PartA、PartB和PartC .PartB进一步纯化 ,经SDS PAGE鉴定为单带 ,相对分子质量为 2 4 2 0 0 ;PartC进一步纯化 ,经SDS PAGE鉴定也是单带 ,相对分子质量为 4 830 0 .PartA和PartB的最适反应条件为 pH 4 .0 ,4 5℃ ;PartC的最适反应条件为pH 5.5,55℃ .PartA和PartB对木聚糖以外的底物不能水解 ;PartC具有水解CMC的交叉活性和 β 木糖苷酶活性 ,但不能将木二糖水解成木糖 .3个纯化酶组分和粗酶对不同来源的木聚糖底物均表现出不同的活性 .对于粗酶 ,若桦木木聚糖为底物的相对酶活为 10 0 % ,则玉米芯木聚糖为底物的相对酶活为 143% ,蔗渣木聚糖为底物的相对酶活为 12 4 % .

顶青霉木聚糖酶的水解动力学与水解模式

从顶青霉 (Penicilliumcorylophilum)培养液中分离纯化得到的 3种木聚糖酶组分 (PartA ,PartB和PartC) ,对其水解动力学和水解模式的研究结果表明 ,3种木聚糖酶的动力学常数(桦木木聚糖为底物 )分别为 :PartA ,Km=1 .0 0mg/mL ,Vmax=0 .1 59U/mL ;PartB ,Km=1 .59mg/mL ,Vmax=0 .2 74U/mL ;PartC ,Km=0 .85mg/mL ,Vmax=0 .2 0 0U/mL .3种木聚糖酶的水解模式相同 ,主要从一端 (非还原端 )水解得到木三糖和木二糖 ,并且得到木三糖的速度大于得到木二糖的速度 ;水解会产生木四糖 ,但木四糖会很快进一步水解成木二糖 ,木四糖水解成木糖和木三糖的可能性极小 ;木三糖会进一步水解成木糖和木二糖 ,但速度不快 ;木二糖不会进一步水解。粗酶水解玉米芯木聚糖时 ,阿拉伯糖侧链的水解与木聚糖主链的水解同步进行 ,粗酶中含有水解阿拉伯糖基侧链的阿拉伯糖苷酶活力 .

日本曲霉和顶青霉的毒性试验

对从云南省盘溪和剑川地区发霉稻草中分离出的日本曲霉(Aspergillus japonicusSaito),从盘溪发霉稻草和剑川马匹粪便中分离出的顶青霉(Penicillium corylophilum Dierckx)分别进行了荧光检测、脂肪分解2 项理化学特性鉴定。将2 株菌的固体和液体培养物,置室温产毒再经杀菌等方法处理后,进行了家兔皮肤涂抹试验,雏鸭和家兔的菌粮饲喂试验,小鼠皮下、腹腔注射试验,家兔耳缘静脉注射试验。日本曲霉能产生荧光,分解脂肪,使家兔皮肤增厚和引起红肿、结痂,能引起部分试验雏鸭、全部试验小鼠、部分试验家兔死亡;顶青霉能产生荧光,使家兔皮肤增厚和出现轻微红肿反应,能引起全部试验小鼠死亡。剖检试验动物均见程度不同的病理学改变。以上结果表明,日本曲霉和顶青霉对小动物均具有一定的毒力。

顶青霉木聚糖酶的分离纯化与鉴定

使用硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶色谱脱盐、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换色谱等分离纯化技术，从顶青霉（Ｐｅｎｃｉｌｉｕｍｃｏｒｙｌｏｐｈｉｌｕｍ）培养液中分离到３种木聚糖酶组分，分别称为ＰａｒｔＡ、ＰａｒｔＢ和ＰａｒｔＣ．ＰａｒｔＢ和ＰａｒｔＣ经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤色谱和ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和色谱进一步分离纯化，分别得到２个纯木聚糖酶组分．ＰａｒｔＢ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单带，相对分子质量为２４２００；ＰａｒｔＣ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定基本为单带。

顶青霉D_(15)木聚糖酶提纯及性质研究

经硫酸铵分级沉淀,BiO-gelP60凝胶过滤,和DEAE离子交换层析,从顶青霉D_15的麦麸培养物中提纯,得到4个具有凝胶电泳纯的木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x2)、2_(x3)、D_(x4)、SDS—凝胶电泳法测得各个组分的分子量是:D_(x1),76000;D_(x2),4300;D_(x3),32500;D_(x4),29500。圆盘等电聚焦电泳法测得4个组分的等电点分别为4.50、5.70、5.30和5.20。热处理60分钟,D_(x1)、D_(x2),D_(x3)、D_(x4)的半失活温度分别为51.7℃、50.8℃、54.6℃和55.6℃。D_(x1)、D_(x4)在pH3.6—6.6稳定,D_(x2)和D_(x3)则在pH2.4—6.0稳定。各组分的A_(280)(1cm(?)mg/m1)分别是:D_(x1),0.97;D_(x2),1.46;D_(x3),0.98和D_(x4),1.07。

顶青霉D_(15)木聚糖酶性质研究

本文对项青霉D_(1(?))的四个木聚糖酶组分的特性进行了研究。木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x4)的最佳反应pH为4.8,最适温度分别为40℃和50℃,D_(x2)和D_(x3)的最适pH和温度都分别为pH4.2和50℃。Ag^(++)、Hg^(++),Cu^(++)对四个组分的活性均有强烈的抑制作用,SDS也能产生明显的抑制效果。Mn^(++)对D_(x1)具有促进作用。D_(x1)、D_(x4)在以燕麦木聚糖为底物时活性最高,其Km值分别为11.7(mg/ml)和8.3(mg/ml),D_(x2)和D_(x3)则分别在水解红麻杆木聚糖和落叶松木聚糖时活性最强,Km值分别为8.4(mg/ml)和6.3(mg/ml)。水解燕麦木聚糖,D_(x1)的产物主要为木糖,同时带有少量的低聚木糖。D_(x2)、D_(x3)和D_(x4)的产物则包括木糖和较多的低聚木糖。D_(x4)与D_(x2)及D_(x3)之间在水解燕麦木聚糖时存在协同作用关系。