顺序特异性引物法快速检测胰腺癌K-ras基因点突变

目的 研究简捷、特异、敏感的检测胰腺癌K-ras基因点突变的方法及其在胰腺疾病中定性诊断的价值。方法 采用针对K-ras基因点突变方式（CGT、GAT、GTT）设计的顺序特异性引物（SSP）,先后对胰腺癌石蜡包埋组织、冰冻新鲜组织、细针穿刺组织及胰液进行多聚酶链反应（PCR）,扩增产物借助常规电泳和染色检测有无K-ras基因突变及突变方式。结果 胰腺癌石蜡包埋组织、冰冻新鲜组织、细针穿刺组织及胰液中K-ras基因点突变率分别为74.2％、95.1％、91.4％及94.1％,而所有被检测的慢性胰腺炎、胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌、十二指肠乳头癌及外伤胰腺的组织标本和胰液标本均无K-ras基因突变发生。结论 该检测法简便、快速、特异、敏感,具有临床实用性,可以作为鉴别胰腺肿块良恶性和诊断胰腺癌的一种方法。

序列特异性引物多聚酶链反应方法进行大样本多基因的多态性鉴定(英文)

目的建立多个基因同时进行多态性分析的序列特异性引物多聚酶链反应(PCR-SSP)方法,以满足其在临床检验中进行基因多态性鉴定时的应用。方法应用优化后的PCR-SSP的方法分析以下基因的多态性:TNF-α-308A/G和-238G/A变异、IL-6-174G/C变异、CYP2D6*10B外显子第188位的C/T变异。结果应用同一个PCR扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的基因多态性同时进行分析,基因型清晰,而且基因分型快速、准确。结论优化后的PCR-SSP适合对大样本、多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,值得在临床检验的应用中推广。

聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针反向杂交法在HLA-DRB_1分型中的应用

目的:探讨聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针(polymerasechainreaction-sequencespe-cificoligonucleotideprobes,PCR-SSOP)反向杂交法应用于人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)-DRB1配型的可行性。方法:随机选取25例已行聚合酶链反应顺序特异性引物(polymerasechainreac-tion-sequencespecificprimers,PCR-SSP)法HLA-DRB1配型的肾移植受者的血标本,采用PCR-SSOP反向杂交法再次配型,并与PCR-SSP法的结果比较。结果:两法的一致性达92%。2例不一致的患者经再次PCR-SSOP反向杂交法配型后,其中1例与PCR-SSP结果一致,PCR-SSOP反向杂交法的平均操作时间为4小时30分。结论:PCR-SSOP反向杂交法是一种能以中等分辨度进行等位基因分型的方法,操作较简单,结果解读客观,适用于临床肾移植配型。

人白细胞DR抗原基因与动脉粥样硬化性脑梗死关系的研究

目的探讨人白细胞DR抗原(HLA DR)基因与动脉粥样硬化性脑梗死(ABI)免疫遗传的相关性。方法采用聚合酶链反应和顺序特异性引物(PCR SSP)基因分析方法,对31例ABI患者及30名无血缘关系健康人的HLA DR部分等位基因及亚基因进行检测分析。结果ABI组HLA DR B1*0301等位基因相对危险度(RR)=5.6842,明显高于其他位点,差异有显著性(P<0.05);其他HLA DR B1*各等位基因未见异常。结论HLA DR B1*0301等位基因可能为北方汉族ABI患者的致病易感基因或与其他基因相连锁而共同致病。

急性运动性轴索型神经病与HLA关联研究

目的 研究急性运动性轴索型神经病（acute motor axonal neuropathy,AMAN）与HLA-Ⅰ类和Ⅱ类等位基因分型的关系,探讨AMAN患者免疫遗传的特点。方法 用改良快速盐析法抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应-顺序特异性引物法（PCR-SSP）对33例AMAN患者和132例健康人进行HLA-Ⅰ类和Ⅱ类等位基因分型。结果AMAN组HLA-Ⅰ类基因中B15、B35频率增高,RR值分别为4.09和7.08。Pc（校正P值）分别为0.015和0.00081。AMAN组HLA-Ⅱ类基因中,虽然DR16的频率高于对照组（P=0.004）,但校正后的P值失去意义。结论HLA-B15、B35与AMAN的易感性可能有关联。未发现HLA-Ⅱ类基因与AMAN有明显的关联。

支气管哮喘与人类MHC-DR基因的关联研究

目的探讨中国北方汉族人支气管哮喘易感的分子机制。方法采用聚合酶链式反应和顺序特异性引物(PCR-SSP)基因分析方法,对36例支气管哮喘病人及30例无血缘关系的健康人的人类主要组织相容性复合体MHC-DRB1各等位基因及亚基因进行了检测分析。结果MHC-DRB10301基因与BA呈正相关(RR=7.913,P<0.01),其他MHC-DRB1各等位基因未见异常,均无统计学差异。结论MHC-DRB10301基因可能是北方汉族人BA的致病易感基因之一,为揭示BA的发病机制中免疫遗传学所起的作用提供了重要信息和依据。本文所采用的方法(PCR-SSP)具有快速、简便、敏感、准确和可靠等优点,值得推广应用。

颈动脉粥样硬化斑块形成与人类白细胞抗原相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原基因与颈动脉粥样硬化(AS)斑块形成免疫遗传的相关性。方法采用聚合酶链反应和顺序特异性引物(PCR-SSP)基因分析方法,对31例中老年颈AS斑块形成患者和30例同年龄组颈动脉大致正常患者进行HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类等位基因分型,研究颈动脉粥样硬化斑块形成与HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类等位基因分型的关系,探讨其免疫遗传的特点。结果颈AS斑块形成患者组HLA-Ⅱ等位基因相对危险度明显高于其他位点,差异有统计学意义(P<0.05),而HLA-Ⅰ各等位基因未见明显相关。结论HLA-Ⅱ等位基因可能为北方汉族中老年颈AS斑块形成患者的致病易感因素。

支气管哮喘与人类MHC-Ⅱ类基因的关联研究

目的 探讨支气管哮喘病 (bronchialasthma,BA)易感的分子机制并确立一种较为实用的MHC -DQ基因的检测方法。方法 采用聚合酶链式反应和顺序特异性引物 (PCR -SSP)基因分析方法 ,对 31例支气管哮喘病患者及 30例无血缘关系的健康人的人类主要组织相容性复合体 (MHC -Ⅱ类 )DQ各等位基因及亚基因进行检测分析 ,并将该方法与其它检测MHC -Ⅱ类基因的方法进行比较。结果 ①MHC -DQB1 0 30 3(RR =4 2 8,P <0 0 1)和DQB1 0 6 0 1(RR =3 15 ,P <0 0 1)基因与BA病呈正相关。②MHC -DQB1 其它各等位基因未见异常。结论 MHC -DQB1 0 30 3和MHC -DQB1 0 6 0 1基因为北方汉族人BA病的致病易感基因。

尿毒症患者发生动脉硬化与HLA基因多态性的分析

迄今为止，动脉粥样硬化（Ａ．Ｓ）的病因及发病机理仍不很清楚，众多研究发现，Ａ·Ｓ具有较高的遗传倾向，其发病与免疫失衡有关，由于人类主要组织相容性抗原（ＨＬＡ）系统的免疫遗传、免疫调控上的特殊性及其在区别疾病易感基因方面的重要性，预示其在Ａ·Ｓ中可能存...

PCR-SSP检测人胰腺癌细胞株PC-2K-ras基因点突变及其方式

目的 检测人胰腺癌细胞株PC 2K ras基因点突变及其突变方式 ,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法 针对K ras基因第 1 2位密码子点突变方式 (CGT、CAT、GTT)设计顺序特异性引物 (SSP) ,对人胰腺癌细胞株PC 2进行聚合酶链反应 (PCR) ,扩增产物借助聚丙烯酰胺凝胶电泳判定该细胞株有无K ras基因点突变及其突变方式。结果 人胰腺癌细胞株PC 2存在K ras基因点突变 ,突变方式为CGT。结论 PCR SSP法简便快速 ,特异性高 。

格林-巴利综合征与人类白细胞抗原关联的研究

目的 研究格林 巴利综合征 (GBS)两种不同亚型 (AIDP和AMAN)与HLA Ⅰ类和Ⅱ类等位基因分型的关系 ,探讨AIDP和AMAN患者免疫遗传的特点。方法 用改良快速盐析法抽提基因组DNA ,采用聚合酶链反应 顺序特异性引物法 (PCR SSP)对 6 4例AIDP、AMAN患者和 132例健康人进行HLA Ⅰ类和Ⅱ类等位基因分型。结果 AIDP组HLA Ⅰ类基因中A33的频率较对照组升高 ,相对风险率 (RR)为 6 13,校正的P值 (Pc)为 0 0 11(P值 <0 0 5 )。HLA Ⅱ类基因中 ,DR16和DQ5的频率较对照组升高 ,RR值分别为 8 2 8和 3 4 7,Pc分别为 0 0 14和 0 0 2 5 (P值均 <0 0 5 ) ;AMAN组HLA Ⅰ类基因中B15、B35频率较对照组升高 ,RR值分别为 4 0 9和 7 0 8,Pc分别为 0 0 15和 0 0 0 0 8(P值均<0 0 5 )。结论 HLA A33、DR16和DQ5与AIDP的易感性可能有关。HLA B15、B35与AMAN的易感性可能有关。未发现HLA

别嘌醇引发严重皮肤不良反应标志基因HLA-B*5801的检测方法研究

目的建立准确、快速、经济的别嘌醇引发严重皮肤不良反应标志基因HLA-B*5801检测方法。方法收集2012年1月—2014年12月福建汉族人群中服用单一别嘌醇致严重皮肤不良反应患者血清样本14例,并随机抽取同期服用别嘌醇14 d未出现皮肤不良反应的患者30例。入组患者DNA分别用聚合酶链-顺序特异性引物反应法(PCR-SSP)、聚合酶链-限制性长度多态性法(PCR-RFLP)和聚合酶链-直接测序法(PCR-SBT)检测HLA-B*5801基因。对检测结果的准确性,方法的操作性及经济性等进行比较分析。结果 3种方法取得一致的检测结果,别嘌醇重症药疹患者100%(14/14)携带HLA-B*5801基因,而别嘌醇耐受患者23.33%(7/30)携带该基因(OR=90.87,敏感度=100%,专属性=76.67%)。结论PCR-SSP法和PCR-RFLP法均能筛检HLA-B*5801,都属于快速、经济,特异性高、操作简便、实验条件稳定的检测方法,非常适合于一般条件的临床推广使用,具有一定应用价值。

格林-巴利综合征与HLA-A、-B基因关联的研究

目的 研究急性运动性轴索型神经病 (AMAN)的易感性与HLA A、 B等位基因分型的关系 ,探讨AMAN患者免疫遗传的特点。方法 用改良快速盐析法自研究对象静脉血中抽提基因组DNA ,采用聚合酶链反应 顺序特异性引物法 (PCR SSP)对 3 3例AMAN患者和 1 3 2例健康人进行HLA A、 B位点等位基因分型。结果 发现AMAN组HLA B1 5、 B3 5频率升高 ,RR(relativerisk)值分别为4 .0 9和 7.0 8。Pc分别为 0 .0 1 5和 0 .0 0 0 8。结论 HLA B1 5、 B3 5与AMAN的易感性可能有关联。