HPLC反相梯度洗脱法测定血浆中13-顺式维A酸的浓度

提要 建立了高效液相色谱(HPLC)反相梯度洗脱法测定13-顺式维A酸在家兔及人血浆中浓度的方法。此法可分离该药的顺反式异构体,测定灵敏度高,准确性好,适用于药物含量测定及生物样品的测定。固定相为反相C_(18),流动相为甲醇和NH_4Ac缓冲液,内标物为氯氮平,在乙醇中最低检测量为4ng,血浆中最低检测浓度为20ng/ml,线性范围0.05～10.00μg/ml。

13-顺式维A酸通过CCCTC结合因子促进神经母细胞瘤衰老的作用及机制

目的探讨13-顺式维A酸(13-cis RA)对神经母细胞瘤(NB)细胞衰老的调控作用及机制。方法 NB细胞株分为空载体对照组、CCCTC结合因子(CTCF)过表达组、随机干扰组、CTCF干扰组, 筛选稳定过表达、敲低CTCF的亚克隆细胞株;二甲基亚砜(DMSO)、13-cis RA分别处理空载体对照组、CTCF过表达组前后, 采用实时定量PCR、Western blot法检测瘤细胞中CTCF及靶基因的转录水平和蛋白表达变化;噻唑蓝(MTT)比色分析法检测细胞增殖活性;β-Gal原位染色法检测细胞衰老程度的改变。组间比较采用t检验。结果 13-cis RA能抑制NB细胞增殖活性, 促进细胞衰老;CTCF在NB中显著高表达;CTCF过表达组端粒酶逆转录酶(TERT)表达高于对照组(5.32±0.07比1.00±0.02, t=57.17, P<0.05)、Pescadilo 1的表达高于对照组(3.93±0.06比1.00±0.01, t=47.76, P<0.05), 细胞增殖活性增强, 细胞衰老被抑制;在CTCF干扰组, TERT的表达低于对照组(0.35±0.04比1.00±0.01, t=18.26, P<0.05)、PES1表达低于对照组(0.36±0.05比1.00±0.01, t=13.46, P<0.05), 细胞增殖活性降低, 细胞衰老增多;13-cis RA处理后, 瘤细胞中CTCF表达下调, 回补CTCF表达水平能逆转13-cis RA对NB细胞增殖和衰老的调控作用。结论 13-cis RA能下调转录因子CTCF的表达, 抑制衰老相关基因TERT、PES1的表达, 促进NB细胞的衰老。