黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)抑制小鼠Lewis肺癌复发瘤生长的机制

目的观察黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌术后复发瘤病理形态及转移相关蛋白CD44、CD62P和骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法选取C57BL/6J小鼠10只作为供瘤组,另外80只随机分为模型组、(50、100、200)μg/mL APS处理组、6 mg/kg DDP处理组、3 mg/kg DDP联合(50、100、200)μg/m L APS处理组,每组10只。取供瘤组小鼠瘤组织制备Lewis瘤单细胞悬液接种于每只小鼠左侧后肢爪垫内侧皮下10 d后,切除爪垫瘤组织,建立肺癌术后复发转移模型;造模次日起给药,第16天脱颈处死。采用HE染色法观察术后复发瘤组织病理形态,免疫组织化学染色法检测复发瘤中CD44、CD62P和OPN的表达。结果与模型组相比,各处理组复发瘤组织坏死加重,尤以DDP联合200μg/mL APS处理组更明显,且各处理组CD44、CD62P和OPN蛋白的表达均有降低,以DDP以及DDP联合(100、200)μg/m L APS处理组最为显著。结论DDP联合APS能抑制Lewis肺癌细胞生长并降低瘤组织CD44、CD62P和OPN蛋白表达。

顺铂诱导肾性贫血大鼠模型的建立

目的建立顺铂(DDP)诱发肾性贫血的大鼠模型。方法给大鼠尾静脉注射8 mg/kg DDP,采用胎肝细胞3H-TdR渗入法检测大鼠血清红细胞生成素(EPO)的含量,并观察大鼠肾组织在光镜及电镜下形态的改变及重组人红细胞生成素(rhEPO)对DDP诱发贫血的影响。结果DDP可引起大鼠红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb),网织红细胞(Ret)及血清EPO水平明显降低,血清尿素氮(BUN)水平显著升高。病理切片也证实DDP可引起大鼠明显的肾损伤。rhEPO能明显升高大鼠Hb的水平,并有明显的量效关系。结论8 mg/kg DDP可诱导大鼠肾性贫血模型。

DIM联合顺铂诱导PC-3细胞凋亡机制的研究

目的探讨顺铂(DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制。方法采用免疫组化技术观察细胞内bcl-2,caspase3和caspase9蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2,caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果细胞培养及免疫组化可见:各给药组与对照组比较均有不同程度抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示:各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;western blot结果表明:各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4 mgL-1)单独应用效果相同。结论DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。

MG132、顺铂联合用药对Caov-3细胞中NF-κB、VEGF表达的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132与DDP联合用药前后卵巢癌细胞株Caov-3细胞内NF-κB、VEGF表达情况。方法免疫组化SP法测定用药前后Caov-3细胞中NF-κB、VEGF的表达情况。结果免疫组化结果显示MG132、DDP联合用药作用24 h后Caov-3细胞中NF-κB、VEGF表达均下调,与对照组、DDP组比较差异有显著性(P<0.01),联合用药组各组间两两比较差异有显著性(P<0.01)。结论 MG132能通过抑制NF-κB活性诱导卵巢癌细胞Caov-3凋亡,抑制肿瘤血管生长。

三氧化二砷与顺铂联合诱导人卵巢癌HO8910细胞凋亡的初步研究

目的探讨三氧化二砷与顺铂联合对体外培养卵巢癌细胞株HO8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡影响。方法用三氧化二砷与顺铂联合处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变;琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果在三氧化二砷与顺铂联合作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变。结论三氧化二砷与顺铂联合能抑制卵巢癌细胞增殖,能诱导卵巢癌细胞凋亡。

常规SAD三野放疗加顺铂治疗食管癌的临床研究

目的评价食管癌同步放化疗的近期疗效。方法回顾性分析2005年3月至2006年3月,采用放疗32例,放疗、化疗相结合治疗食管癌30例,实行等中心照射,总剂量60～70Gy,无锁骨上转移的食管癌。按治疗方法分两组:Ⅰ组:单纯放疗32例,放疗剂量60～70Gy;Ⅱ组:放疗加顺铂30例,放疗剂量60～70Gy,顺铂20～30mg,静脉滴注,2次/周,共6～7周。所有病例均随访10个月以上。结果1年生存率Ⅰ、Ⅱ组分别为75%和76.7%,两组间无统计学差异(P>0.05)。3年生存率Ⅰ、Ⅱ组分别为43.75%和63.3%,两组有显著性差异(P<0.05)。结论放疗合并化疗药顺铂可以提高食管癌的疗效。

顺铂、三氧化二砷对人卵巢癌细胞的作用研究

目的:探讨顺铂(DDP)、三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞HO-8910的联合作用及其分子生物学机制。方法:采用形态学方法研究DDP、As2O3对细胞增殖的影响,免疫化学染色法检测基因表达。结果:1.联合作用时,As2O3浓度在1.5μmol/L以上、DDP浓度在2μmol/L以上时,有显著性差异;当三氧化二砷、顺铂浓度分别是12μmol/L、4μmol/L时,72h时癌细胞接近100%死亡。2.DDP、As2O3引起HO-8910细胞p53基因表达增强。结论:DDP、As2O3对人卵巢癌细胞HO-8910的生长有协同抑制作用;DDP、As2O3联合作用引起卵巢癌细胞凋亡的机制与p53基因表达增强有关。

高三尖杉酯碱通过抑制ERK1/2信号通路逆转卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)逆转卵巢癌细胞顺铂(DDP)耐药的机制。方法:将DDP耐药卵巢癌细胞A2780/DPP分成对照组、DDP组、HHT组、联合组(DDP+HTT)、ERK1/2抑制剂组(PD98059)、DDP+ERK1/2抑制剂组(DDP+PD98059)、ERK1/2激活剂组(ISO)、联合+ERK1/2激活剂组(DDP+HTT+ISO)。采用CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达。结果:与对照组比较,联合组卵巢癌细胞A2780/DPP存活率降低,凋亡率和Bax蛋白表达增多,Bcl-2、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05);DDP和HTT组卵巢癌细胞A2780/DPP存活率、凋亡率和Bax、Bcl-2、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组、DDP组、ERK1/2抑制剂组比较,DDP+ERK1/2抑制剂组p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达减少,存活率降低,凋亡率和Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,ERK1/2激活剂组p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达增多,存活率升高,凋亡率和Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与联合组比较,联合+ERK1/2激活剂组卵巢癌细胞A2780/DPP中p-ERK1/2 ERK1/2蛋白表达增多,存活率升高,凋亡率和Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高三尖杉酯碱可能通过抑制ERK1/2信号通路逆转卵巢癌细胞DDP耐药。

环孢菌素A联合顺铂对Lewis肺癌裸鼠移植瘤的协同抑制作用

目的:探讨亲环蛋白A(cyclophiline A,Cy PA)抑制剂环孢菌素A(cyclosporine A,Cs A)联合顺铂(Cisplatin,DDP)化疗提高肺癌细胞对DDP的敏感性。方法:C57BL/6裸鼠随机分为4组:空白对照组、DDP组、Cs A组和联合组(DDP+Cs A),每组各10只。裸鼠左侧腋部皮下注射100μl细胞密度为5×106/ml的小鼠Lewis肺癌细胞株(3LL)细胞悬液,接种2 d后开始腹腔给药,DDP给药剂量为2 mg/kg,每3 d 1次,共3次;Cs A给药剂量5 mg/kg,隔天1次,共3次;此后实验组每周1次,维持血药浓度。空白对照组不给药。接种后每3天观察一次肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线。接种35 d后处死裸鼠取出瘤块,H-E染色观察组织形态学变化,免疫组化法观察移植瘤中Ki-67蛋白的表达情况。结果:联合组裸鼠的移植瘤体积(P<0.01)、移植瘤质量(P<0.05)、肿瘤细胞密度(P<0.05)、核分裂象(P<0.05)均较其余3组显著降低;DDP组和Cs A组裸鼠移植瘤体积、瘤质量、肿瘤细胞密度和核分裂象均较空白对照组低(均P<0.05)。免疫组化观察联合组移植瘤组织的Ki-67表达水平明显降低。结论:免疫抑制剂Cs A与DDP联合用药可提高肺癌细胞对DDP的敏感性,协同抑制肺癌细胞移植瘤的生长。

顺铂联合足叶乙甙治疗原发灶未明转移癌的临床观察

目的 观察顺铂 (DDP)联合足叶乙甙 (VP -16 )治疗原发灶未明转移癌 (MUO)的疗效。方法 10例MUO患者均采用EP方案 :DDP 30mg m2 第 1～ 3天 ,足叶乙甙 (VP -16 ) 6 0mg m2 第 1～ 5天 ,2 8天为一周期。结果 10例中 4例达到完全缓解(CR)为 40 %,3例部分缓解 (PR)为 30 %,2例稳定 (SD)为 2 0 %,1例进展 (PD)为 10 %。结论 顺铂联合足叶乙甙对原发灶未明转移癌有较好的疗效 ,且毒副反应可以耐受。

MG132和DDP联合应用诱导Hep-2喉癌细胞凋亡及机制的研究

目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂(DDP)联合应用对Hep-2喉癌细胞凋亡的影响,同时观察细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bad表达水平的变化。方法:体外培养Hep-2细胞分别暴露于MG132、DDP或者MG132和DDP,24h后流式细胞术(FCW)检测Hep-2细胞的凋亡率,Western blot方法测定Hep-2细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况。结果:流式细胞术检测结果显示,MG132和DDP联合用药24h后Hep-2细胞凋亡率较单独应用MG132、DDP显著增加。Western blot结果显示联合用药组较单独用药组Hep-2细胞中Bcl-2的表达显著减少,而Bad的表达显著增加。结论:MG132联合DDP可能通过降低Bcl-2同时增强Bad的表达而进一步诱导Hep-2细胞的凋亡。可以认为MG132能增强DDP诱导Hep-2细胞凋亡的作用。

三氧化二砷、顺铂对人卵巢癌细胞联合作用研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)、顺铂(DDP)对人卵巢癌细胞HO-8910的联合作用及其相关机制。方法采用形态学方法研究As2O3、DDP对细胞增生的影响,用流式细胞术分析细胞周期,免疫细胞化学染色法检测p53基因表达。结果1.As2O3、DDP协同作用时,浓度分别在1.5μmol/L以上、2μmol/L以上时,有显著性差异;当三氧化二砷、顺铂浓度分别是12μmol/L、4μmol/L时,72h时癌细胞接近100%死亡。2.As2O3、DDP引起HO-8910细胞S期阻滞、p53基因表达增强。结论As2O3、DDP对人卵巢癌细胞HO-8910的生长有协同抑制作用;As2O3、DDP联合作用引起卵巢癌细胞凋亡的机制与S期阻滞、p53基因表达增强有关。

敲低鞘氨醇激酶1增强人结肠癌RKO细胞对顺铂的敏感性

目的探讨沉默结肠癌RKO细胞鞘氨醇激酶1(SphK1)基因对顺铂(DDP)敏感性的影响及作用机制。方法构建靶向SphK1基因的慢病毒载体并感染RKO细胞后,实时定量PCR检测SphK1的mRNA水平,Western blot法检测SphK1蛋白水平。然后将RKO细胞分为SphK1低表达组(sh SphK1组)、阴性感染对照组(sh Control组)和空白对照组。培养24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖活性;(0、2、4、8、16、32)μg/m L DDP处理细胞后,MTT法再次检测细胞增殖活性,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot法检测KI-67抗原(ki67)、Bcl-2、胱天蛋白酶9(caspase-9)和caspase-3蛋白的水平。结果敲低SphK1基因能抑制RKO细胞的增殖,促进细胞凋亡。DDP呈时间和浓度依赖性抑制各组细胞的增殖,与对照组和sh Control组相比,敲低SphK1的细胞增殖能力显著降低;DDP呈剂量依赖性诱导细胞凋亡,且敲低SphK1的细胞凋亡率明显高于对照组和sh Control组。此外,敲低SphK1后,抑制ki67和Bcl-2的表达,增加caspase-9和caspase-3的表达,经DDP处理后,ki67和Bcl-2蛋白的表达水平明显下降,caspase-9和caspase-3蛋白的表达水平显著增加。结论敲低SphK1基因降低Bcl-2水平、增加caspase-9、caspase-3水平,抑制RKO结肠癌细胞增殖并促进其凋亡,并增强RKO细胞对DDP的敏感性。

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导肺癌A549细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测药物最适浓度和作用时间,以及不同组肺癌A549细胞增殖率;通过MDC染色法将细胞染色检测自噬空泡的变化;Hoechst33342染色检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 DDP作用于A549细胞后细胞增殖率明显下降,并在细胞内可见大量自噬空泡及细胞核染色质凝聚。3-MA和DDP联合作用组细胞增殖率较单独应用DDP组明显下降,细胞自噬水平降低,细胞凋亡率明显增加。结论 DDP能诱导肺癌A549细胞发生自噬和凋亡,而抑制自噬可以促进DDP诱导的细胞凋亡。

顺铂通过激活细胞外信号调节激酶(ERK)通路促进A549人肺腺癌细胞PD-L1表达

目的探讨顺铂(DDP)对人肺腺癌A549细胞的程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)表达的影响及其可能的机制。方法体外培养人肺腺癌A549细胞,采用(0、0.5、1、2、4、8)mg/L DDP处理24、36、48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,并计算其半数抑制浓度(IC_(50)),选择最适抑制时间48 h及其IC_(50)用于后续实验。后续将A549细胞分为4组:空白对照组、IC_(50)的DDP组、20μmol/L的丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂PD98059组、IC_(50)的DDP联合20μmol/L PD98059组。培养48 h,Western blot法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化的ERK(p-ERK)蛋白表达,流式细胞术检测PD-L1表达。结果与对照组相比,DDP处理的A549细胞PD-L1表达均上调,且呈剂量依赖性,选择最适作用时间点为48h,其IC_(50)值为3.586 mg/L。与对照组相比,DDP处理组p-ERK、PD-L1表达增加,PD98059组p-ERK表达降低;DDP联合PD98059组较DDP组的p-ERK、PD-L1的表达降低,较PD98059组的p-ERK、PD-L1表达增加。结论DDP激活ERK信号通路上调A549细胞PD-L1表达。

自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡中的作用

目的:研究自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡中的作用及其意义。方法培养人骨肉瘤MG63细胞;运用MTT法检测自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导下对骨肉瘤MG63细胞的影响;MDC染色法及流式细胞仪检测自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导下对骨肉瘤MG63细胞的影响;流式细胞仪检测自噬抑制剂3-MA在顺铂诱导下对骨肉瘤MG63细胞凋亡的变化。结果通过MTT法发现DDP可引起MG63细胞增殖率下降;与单独应用DDP组相比,3-MA+DDP组引起MG63细胞增殖率明显下降;MDC染色及流式细胞仪检测细胞自噬表达,发现与单独应用 DDP组相比,3-MA+DDP组自噬表达水平下降;流式细胞术检测发现与单独应用DDP组相比,3-MA+DDP组细胞凋亡率明显增加。结论在自噬抑制剂3-MA的作用下,骨肉瘤 MG63细胞自噬表达水平明显下降,从而促使DDP对骨肉瘤MG63细胞的细胞凋亡明显增加。

曲普瑞林对化疗药物引起卵巢损伤的预防作用

目的:探讨化疗对卵巢的损害和促性腺激素激动剂(GnRHa)曲普瑞林对化疗中卵巢的保护作用及机制。方法:选用2～3月龄、体重(250±10)g的SD雌性大鼠40只,随机分为正常对照组、顺铂(DDP)组、GnRHa组及GnRHa+DDP组,比较用药后4组大鼠卵巢、子宫湿重和形态学变化,采用放射免疫法测大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡生成素(FSH)水平,免疫组织化学方法检测4组大鼠卵巢中Bcl-2、Caspase-3的表达。结果:DDP组与对照组比较大鼠体重明显减轻(P<0.05),卵巢、子宫重量明显下降(P<0.05);光镜下DDP组各期卵泡总数显著减少,GnRHa使生长卵泡数、成熟卵泡数减少,初级卵泡数及总卵泡数增加。GnRHa+DDP组可见GnRHa能明显改善化疗药物对卵巢的损害,保存了大部分初级卵泡且总卵泡数增加。结论:GnRHa的先期预防性应用对化疗所致的大鼠卵巢损伤有一定的保护作用。

放射引导的多肽特异性传输在肝癌放化疗模型中的应用

目的本课题拟通过重组HVGGSSV多肽,研究其特异性结合放射损伤肿瘤细胞的特性,并观察其体内分布及代谢情况,为肝癌特异性靶向治疗提供新方法。方法采用荧光染料Cy7-NHS ester标记HVGGSSV,合成Cy7-HVGGSSV。建立人肝癌裸鼠双后肢种植瘤模型,所有小鼠首先经顺铂(DDP)处理,然后小鼠右后肢肿瘤放射处理3Gy,左后肢处肿瘤不接受放射处理,将其随机分为对照和实验组,每组5只小鼠,放射后4小时,实验组和对照组分别经尾静脉注射Cy7-HVGGSSV和Cy7-NHS ester。通过小动物活体成像系统检测并观察小鼠体内不同时间点的荧光分布情况。结果实验组右后肢肿瘤荧光强度在给药后1小时、2小时、15小时、24小时、48小时分别比左后肢肿瘤高(5.82±1.24)×10~7photons/(s·cm2)、(8.99±1.27)×10~7 photons/(s·cm^2)、(4.04±2.30)×10~7 photons/(s·cm2)、(6.52±3.93)×10~7 photons/(s·cm^2)、(9.33±1.74)×107 photons/(s·cm^2)。实验组较对照组右后肢肿瘤荧光强度分别提高(18.4±1.33)×107 photons/(s·cm^2)、(17.1±1.64)×107 photons/(s·cm^2)、(55.8±2.66)×107photons/(s·cm^2)、(68.9±3.97)×107 photons/(s·cm^2)、(16.3±1.67)×107 photons/(s·cm^2)。对照组荧光分布无特异性。48 h后,实验组小鼠的肝脏及肾脏具有较高荧光量分布。结论 HVGGSSV可以特异性结合放射损伤的肝癌移植瘤,其主要通过肝脏及肾脏代谢,有可能为放射引导的药物提供靶向运输载体。

72例妇科恶性肿瘤放射介入治疗的临床研究

目的对妇科恶性肿瘤放射介入治疗的疗效进行分析与探讨。方法在本次研究中一共选取72例妇科恶性肿瘤病例,随机将其分为观察与对照两组,观察组38例患者采用Seldinger穿刺法,应用顺铂进行放射介入治疗;对照组34例患者均行腹腔镜下子宫切除和广泛盆腔淋巴结切除术进行治疗。一段时间后,对比分析两组的治疗效果。结果两组患者肿块消退情况明显,临床症状均得到缓解,但总体治疗效果观察组要比对照组强,两组差异具有统计学意义(P<0.05);两组并发症发生率区别不大,两组间差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论妇科恶性肿瘤应用放射介入治疗疗效显著,值得临床广泛应用。

rhIFN-a、rhIL-2与rhTNF-a体外协同抑制宫颈癌细胞的敏感性实验

目的:本研究旨在探讨干扰素-a(IFN-a)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-a)单一、协同以及与化疗药物DDP的联合作用杀伤宫颈癌H e la细胞株的影响。方法:应用四M TT比色法检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12h与24h的光密度值(OD),计算杀伤率。台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果:单独应用三种细胞因子时,IFN-a、TNF-a对宫颈癌H e la有细胞毒作用。IFN-a、IL-2、TNF-a联合作用具有协同作用,均与单一应用具有显著性差异(P<0.01)。细胞因子均可以增强顺铂(DDP)的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论:M TT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。干扰素-a(IFN-a)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、白细胞介素-2(IL-2)与DDP联合具有协同作用,为宫颈癌病人化疗提供了理想的参考方案。