miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系研究

目的 探究miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系。方法 将膀胱癌细胞分为对照组、下、上调miR-101-3p组,体外培养膀胱癌细胞。采用CCK-8实验来检测膀胱癌细胞增殖能力;通过划痕实验来检测膀胱癌细胞迁移能力;通过Transwell实验来检测膀胱癌细胞侵袭能力;3组细胞分别加入不同浓度的顺铂,观察对细胞的抑制率;Western blot法测定CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量。结果 在24 h、48 h、72 h的细胞增殖率方面,上调miR-101-3p组均低于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组低于下调miR-101-3p组(P<0.05);在24 h、48 h、72 h的细胞迁移数、侵袭数方面,上调miR-101-3p组均少于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组少于下调miR-101-3p组(P<0.05);在CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量方面,上调miR-101-3p组均低于对照组和下调miR-101-3p组(P<0.05);在顺铂敏感度方面,上调miR-101-3p组高于对照组、下调miR-101-3p组(P<0.05)。结论 上调miR-101-3p能够抑制CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达,调控细胞周期,阻止膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭,提高其顺铂敏感性。

ATP7B siRNA纳米载体提高胃癌细胞顺铂敏感性的作用

目的研究ATP7B siRNA纳米载体对胃癌细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法将胃癌细胞GES-1分成对照组、单纯纳米组、si-NC组、si-ATP7B组、si-ATP7B纳米组、DDP组、si-ATP7B纳米+DDP组、si-ATP7B纳米+Vector+DDP组、si-ATP7B纳米+DDR1+DDP组、Vector组、DDR1组,Western blotting检测Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、Vimentin、ATP7B、DDR1蛋白表达,CCK-8实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测迁移和侵袭。结果与对照组、si-NC组比较,si-ATP7B组胃癌细胞中ATP7B、DDR1蛋白表达量降低,细胞存活率降低,凋亡率升高,Bax、E-cadherin蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭数目减少,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达减少(P<0.05);与对照组、单纯纳米组、si-ATP7B组比较,si-ATP7B纳米组胃癌细胞中ATP7B、DDR1蛋白表达量降低,细胞存活率降低,凋亡率升高,Bax、E-cadherin蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭数目减少,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05);与si-ATP7B纳米组、DDP组比较,si-ATP7B纳米+DDP组胃癌细胞存活率降低,凋亡率升高,Bax、E-cadherin蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭数目减少,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达减少(P<0.05);与si-ATP7B纳米+Vector+DDP组比较,si-ATP7B纳米+DDR1+DDP组胃癌细胞存活率升高,凋亡率降低,Bax、E-cadherin蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,细胞迁移、侵袭数目增多,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05)。结论ATP7B siRNA纳米载体通过下调DDR1表达提高胃癌细胞顺铂敏感性,促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

敲低circ_0000620表达对肺腺癌A549细胞凋亡和顺铂敏感性的影响

目的:探讨敲低circ_0000620表达对肺腺癌A549和顺铂耐药A549(A549/DDP)细胞凋亡和顺铂敏感性的影响。方法:设计针对circ_0000620的siRNA靶序列,分别构建敲低circ_0000620表达的A549和A549/DDP细胞株(实验组),并构建感染sh-NC(阴性对照)的细胞株(对照组),qRT-PCR检测circ_0000620表达量,验证敲低效果。敲低circ_0000620后,利用CCK-8方法检测顺铂对各组细胞活力的影响,并计算顺铂药物半数抑制浓度(IC_(50));利用Caspase-3/7活性和Tunel方法检测敲低circ_0000620表达后A549和A549/DDP细胞的凋亡率。利用敲低circ_0000620表达后A549和对照A549细胞接种BALB/c裸鼠,7 d成瘤后,腹腔注射顺铂(2 mg/kg)进行药物干预,观察肿瘤的生长曲线,28 d后处死裸鼠,称量瘤重。结果:qRT-PCR筛选得到有效抑制circ_0000620表达的siRNA靶序列(siRNA-2 5’-GAAGAATGATATCCTTGGAAC-3’),并用于后续实验。顺铂敏感性实验结果显示实验组IC_(50)降低,顺铂敏感性增加(P<0.05)。细胞凋亡实验结果显示,敲低细胞circ_0000620表达,实验组细胞Caspase-3/7活性升高,凋亡率升高,顺铂敏感性增加(P<0.05)。顺铂干预裸鼠荷瘤实验结果显示,与对照组相比,实验组瘤体体积和瘤重明显降低(P<0.05)。结论:筛选得到有效抑制circ_0000620表达的siRNA靶序列;敲低circ_0000620的表达可提高细胞对顺铂的敏感性。

G3BP2表达水平与非小细胞肺癌顺铂敏感性的相关性

目的分析G3BP2表达水平与非小细胞肺癌顺铂敏感性的相关性,为临床诊治工作提供科学理论依据。方法将70例经顺铂治疗过的Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者的组织标本用免疫组化法检测G3BP2在肺癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析患者的年龄、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移、化疗方案等与G3BP2的相关性。结果G3BP2表达定位于NSCLC胞浆中,G3BP2高表达在肺癌组织明显高于癌旁组织(P<0.01)。肿瘤的分期越高,G3BP2的表达越高,有显著相关性(P<0.05);顺铂治疗疾病控制率G3BP2高表达患者为68.3%,低表达患者为89.7%,两者存在统计学差异(P<0.05),提示G3BP2与NSCLC顺铂耐药密切相关。G3BP表达与年龄、肿块大小、分化程度、淋巴结转移均无显著相关(P>0.05)。结论G3BP2的表达与病理分级呈正相关,G3BP2高表达与非小细胞肺癌顺铂耐药密切相关。

细胞周期因子CyclinDs的表达水平与口腔鳞癌对顺铂敏感性的关系

目的:寻找口腔鳞癌对顺铂耐药的相关基因,以预测临床化疗效果并指导临床化疗。方法:收集口腔鳞癌标本,根据其体外药敏测试(改良MTT法)进行分组,同时用免疫组化法检测这些标本中CyclinDs(CCND1、CCND3)、P鄄gp和GST鄄Pi的表达情况。结果:根据药敏测试结果,最后收集到顺铂耐药标本23例,顺铂敏感标本20例。对免疫组化结果采用SAS5.0统计软件分析,发现只有CCND1和CCND3的表达水平与标本顺铂敏感性有关,CCND1阳性率高往往提示肿瘤细胞对顺铂不敏感。结论:细胞周期因子CyclinDs的表达异常与口腔鳞癌顺铂耐药性相关,可被纳入口腔鳞癌顺铂耐药相关基因表达谱。

右美托咪定对宫颈癌细胞HSP90/ERK通路及顺铂敏感性的影响

目的探讨右美托咪定对宫颈癌细胞热休克蛋白90(HSP90)/细胞外信号调节激酶(ERK通路及顺铂敏感性的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组、顺铂组、低浓度组和高浓度组。蛋白印迹(Western blot)法检测各组HeLa细胞中HSP90、ERK、p-ERK、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA聚合酶δ催化亚基(POLD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况;CCK-8法检测各组HeLa细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组HeLa细胞凋亡情况。结果与对照组相比,顺铂组HeLa细胞中HSP90、p-ERK/ERK、DNMT1、POLD1、PCNA蛋白水平、OD值降低(P<0.05),而凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);随着右美托咪定的添加及浓度的升高,HeLa细胞中HSP90、p-ERK/ERK、DNMT1、POLD1、PCNA蛋白水平、OD值依次降低(P<0.05),而凋亡率、Bax蛋白水平依次升高(P<0.05)。结论右美托咪定可抑制宫颈癌HeLa细胞中HSP90/ERK通路,增强HeLa细胞对顺铂的敏感性。

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-424靶向神经纤毛蛋白2(NRP2)对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组(转染miR-ctrl)、miR-424组(转染miR-424模拟物)、miR-424+pcDNA3.1组(共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒)和miR-424+NRP2组(共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒),采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高(P<0.05);相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高(P<0.05);与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度(IC50)值均明显降低(P<0.05);与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高(P<0.05);miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。

大黄素下调膜联蛋白A2增强子宫内膜癌HEC-1B 细胞顺铂敏感性

目的:探讨大黄素对子宫内膜癌HEC-1B细胞顺铂敏感性及膜联蛋白A2(ANXA2)表达的影响,以分析其潜在的作用机制。方法:将HEC-1B细胞分为对照组、大黄素(10μmol/L)组、顺铂(1μg/mL)组、联合组(10μmol/L大黄素+1μg/mL顺铂),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,Western Blot检测Bax、Bcl-2、P-gp、MRP1、ANXA2蛋白的表达;利用RNA干扰技术抑制HEC-1B细胞内ANXA2表达,分析ANXA2对顺铂作用的影响。结果:与对照组比较,各给药组细胞增殖抑制率、凋亡率及G_(0)/G_(1)期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低,Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2、P-gp、MRP1、ANXA2蛋白表达显著降低(P<0.05)。联合组上述作用显著强于大黄素组和顺铂组(P<0.05)。与顺铂组比较,si-ANXA2+顺铂组ANXA2蛋白表达及细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:大黄素增强了子宫内膜癌HEC-1B细胞的顺铂敏感性,该作用可能与下调ANXA2的表达有关。

RNA干扰COMMD8基因表达下调PI3K/AKT信号通路诱导肺癌凋亡和增加顺铂敏感性

目的研究RNA干扰铜代谢MURR1结构域(COMMD)8对肺癌细胞存活、迁移、侵袭、凋亡及顺铂敏感性的影响和潜在分子机制。方法以人正常肺上皮细胞株BEAS-2B为对照,qRT-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹检测人肺癌细胞株H1299、SPC-A-1、H446中COMMD8 mRNA和蛋白的水平。在H1299细胞中转染si-COMMD8或(和)用100ng/ml PI3K/Akt信号通路激动剂胰岛素样生长因子(IGF)-1处理,Western印迹检测细胞中COMMD8、Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、多药耐药基因(MDR)1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞存活率、凋亡率和迁移侵袭,用DDP IC50值检测细胞DDP敏感性。结果与人正常肺上皮细胞株BEAS-2B相比,在肺癌H446、SPC-A-1和H1299细胞中COMMD8 mRNA和蛋白含量均显著升高(均P<0.05);RNA干扰COMMD8可抑制H1299细胞中Ki-67、MMP-2、MDR1、p-PI3K和p-AKT蛋白表达(均P<0.05),促进酶切caspase-3表达,抑制PI3K/AKT信号通路,抑制H1299细胞存活、迁移和侵袭,促进细胞凋亡并增加细胞的DDP敏感性(均P<0.05);PI3K/AKT信号通路激动剂IGF-1可逆转沉默COMMD8对H1299细胞PI3K/AKT信号通路、增殖、迁移、侵袭、凋亡及DDP敏感性的影响(均P<0.05)。结论 RNA干扰COMMD8基因可抑制肺癌H1299细胞存活、迁移侵袭并促进细胞凋亡,增加DDP敏感性。

氯化钴对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响

目的:观察氯化钴(CoCl_2)作用于人卵巢癌SKOV3细胞株后对SKOV3细胞顺铂敏感性的影响,并阐述其可能机制。方法:体外培养SKOV3细胞株,随机分为对照组、CoCl_2组、顺铂(DDP)组和CoCl_2联用DDP (联合)组,CoCl_2组细胞以200μmol·L^(-1) CoCl_2作用4h后换普通细胞培养基培养20h,DDP组细胞以含10 mg·L^(-1) DDP的细胞培养基培养24h,联合组细胞以200μmol·L^(-1) CoCl_2作用4h后更换含10mg·L^(-1) DDP的细胞培养基继续培养20h。MTT法检测各组细胞存活率,免疫荧光法检测各组细胞中低氧诱导因子1α(HIF-1α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性表达强度,Rhod 2-AM荧光探针检测各组细胞线粒体钙离子(Ca^(2+))水平,免疫蛋白印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白细胞色素C (cyto C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (caspase 3)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (cleaved caspase 3)蛋白表达水平,Muse~凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡率。结果:与对照组比较,CoCl_2组细胞存活率无明显变化(P>0.05),其余2组细胞存活率明显下降(P<0.05);且联合组高于DDP组(P<0.05)。与对照组比较,CoCl_2组和联合组细胞中HIF-1α阳性表达强度明显增强(P<0.05);DDP组和联合组细胞中iNOS阳性表达强度明显增强(P<0.05)。与对照组比较,DDP组和联合组细胞Ca^(2+)水平升高(P<0.05);且DDP组高于联合组(P<0.05)。与对照组比较,CoCl_2组细胞中cyto C、caspase 3和cleaved caspase 3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),DDP组细胞中cyto C、caspase 3和cleaved caspase 3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);且联合组低于DDP组(P<0.05)。与对照组比较,DDP组细胞凋亡率明显升高(P<0.05);联合组细胞凋亡率较DDP组降低(P<0.05)。结论:CoCl_2可以通过抑制DDP诱导的人卵巢癌SKOV3细胞株iNOS表达增强来减少线粒体途径凋亡的发生,降低其顺铂敏感性。

p53反义RNA对人肺癌细胞表型和顺铂敏感性的影响

目的 研究外源p53反义RNA对有p53基因 2 4 8密码点突变的人肺癌细胞系恶性表型和顺铂敏感性的影响。方法 构建p53反义RNA真核细胞表达载体PEGFP p53(AS) ,经酶切图证明反向联结质粒。Lipofectin介导转染有p53基因 2 4 8密码点突变的人肺癌细胞系 80 1D ,经G41 8筛选获耐受克隆。稀释法建立单细胞克隆系 ,应用PCR检测外源基因 ,荧光显微镜检测细胞绿色荧光蛋白表达 ,p53单抗免疫组化染色检测p53突变蛋白表达 ,体外集落形成实验检测细胞生长 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,MTT法检测细胞对顺铂药物敏感性。结果 酶切图证明了p53 cDNA反向联结于质粒 ,构建了PEGFP p53(AS) ,并建立了转染单细胞克隆系PEGFP p53(AS) 80 1D及空载细胞系PEGFP 80 1D。PCR检测外源p53基因和neo基因存在于转染细胞系 ,而荧光显微镜下发现其胞浆有绿荧光蛋白表达。免疫组化染色p53突变蛋白在 80 1D细胞系为阳性 ,而PEGFP p53(AS) 80 1D为阴性 ,证明外源反义p53在转染细胞稳定表达并封闭内源突变蛋白表达。与母系相比 ,PEG FP p53(AS) 80 1D集落形成抑制率为 61 % (P <0 .0 1 ) ,流式细胞仪检测该细胞系G1期细胞数明显增加 ,出现G1期阻滞的表现。MTT检测PEGFP p53(AS) 80 1D对顺铂比母系更为敏感。结论 有p53基因 2 4 8密码点?

胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响

目的探讨胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响。方法选取卵巢癌患者200例,根据是否患有2型糖尿病分为两组,胰岛素抵抗组83例、非胰岛素抵抗组127例。穿刺获取肿瘤组织和正常组织作为实验对象,采用免疫组化法测定IGF-1蛋白表达量,流式细胞术法测定IGF-1R蛋白表达量,MTT法测定不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50(半数抑制浓度)值。结果 1胰岛素抵抗组IGF-1蛋白表达的HIS值为10.1±1.68,与非胰岛素抵抗组(6.5±2.14)比较,明显较高,差异有统计学意义(P<0.05);2胰岛素抵抗组IGF-1R蛋白表达量为(281.1±1.78),与非胰岛素抵抗组(264.6±5.32)比较,明显较高,差异有统计学意义(P<0.05);3胰岛素抵抗组不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50值为(14.93±0.15),与非胰岛素抵抗组(2.41±0.08)比较,明显较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胰岛素抵抗能够促进卵巢癌细胞增殖,降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,对临床用药具有指导意义,值得临床推广。

线粒体动力相关蛋白FIS1调控舌鳞癌顺铂敏感性的机制研究

目的探讨线粒体动力相关蛋白(mitochondrial fission protein 1,FIS1)对于舌鳞癌细胞的凋亡以及顺铂耐药性的调控作用。方法使用舌鳞癌细胞系SCC9和CAL27,检测顺铂处理后这两种细胞中FIS1的mRNA以及蛋白质水平,采用小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)沉默经顺铂处理后的SCC9和CAL27细胞中的FIS1,或者利用质粒过表达SCC9和CAL27细胞中的FIS1,之后采用线粒体染色检测细胞中线粒体的分裂状态,TUNEL、流式细胞术、Caspase3/7检测细胞的凋亡状态。结果经顺铂处理后的舌鳞癌细胞中FIS1蛋白表达水平升高,但mRNA水平未发生变化。沉默FIS1表达可减少顺铂处理后的舌鳞癌细胞中的线粒体分裂以及细胞凋亡,而过表达FIS1则可以观察到相反效应。沉默或者过表达FIS1前后,SCC9和CAL27细胞中分裂线粒体所占的百分比,凋亡细胞的含量以及Caspase3/7的活性值差异有统计学意义(P <0.05)。结论FIS1参与调控舌鳞癌细胞顺铂化疗敏感性,可作为提高口腔鳞癌顺铂化疗敏感性的新靶点。

NF-κB/SCCI/ATG5引起细胞自噬及降低顺铂敏感性的机制研究

目的:探究NF-κB/SCCI/ATG5引起细胞自噬及降低顺铂敏感性的机制。方法:选取2016年1月至2018年1月我院收治的非小细胞肺癌患者50例,检测SCCI在非小细胞肺癌组织和细胞系中的表达,入核后SCCI和NF-κB的共定位情况,NF-κB激活SCCI的机制及SCCI调控ATG5引起自噬的机制。结果:SCCI在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。SCCI、SCCI mRNA在肺腺癌细胞系A549、H1299、SPC-A-1中的表达均高于在正常支气管上皮16HB中的表达(P<0.05)。非小细胞肺癌细胞系A549中SCCI在细胞胞浆、胞核中的表达均较高(P>0.05)。SCCI在肺癌细胞组织细胞浆、细胞核中均有所表达。加入顺铂后肺癌细胞系A549细胞胞浆、胞核蛋白中NF-κB、SCCI总蛋白同时增加,胞核中SCCI表达明显增加,均高于加入顺铂前(P<0.05)。SCCI和NF-κB的具体结合部位在细胞核中。加入顺铂后核内SCCI蛋白表达增加,自噬相关markers、ATG5和LC3II/LC3I表达增加,均高于加入顺铂前(P<0.05)。SCCI基因沉默前,顺铂耐药性较低,SCCI基因沉默后,顺铂耐药性升高。SCCI和ATG5的共同结合部位在细胞核中。结论:通过激活NF-κB/SCCI/ATG5信号通路,可激活细胞自噬,作用于自噬相关markers、ATG5和LC3II/LC3I基因,降低非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性,为临床上非小细胞肺癌的诊治及预后提供了依据。

GP130在膀胱癌中的表达及其与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系

目的探讨糖蛋白-130(GP130)在膀胱癌中的表达及其与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系。方法回顾性分析2018年1月至2020年5月收治的膀胱癌患者32例为研究对象。免疫组化法检测膀胱癌组织和癌旁组织的GP130表达水平。采用脂质体转染法将siRNA-GP130(siRNA-GP130组)、siRNA-NC(siRNA-NC组)转染至膀胱癌T24细胞,并设立空白对照组(不进行转染操作)。PCR和Western blotting检测各组GP130 mRNA和蛋白水平。MMT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力。通过含顺铂的培养基培养膀胱癌T24细胞测定比较三组的顺铂半数有效浓度(IC50)。结果膀胱癌组织GP130阳性表达率高于其癌旁组织(87.50%vs.46.88%,P<0.05)。siRNA-GP130组GP130 mRNA和蛋白水平、侵袭细胞数、迁移细胞数、顺铂IC50[(0.137±0.052)、(0.125±0.048)、(42.51±6.65)个、(56.74±7.96)个、(0.66±0.05)μmol/L]均低于siRNA-NC组[(0.865±0.098)、(0.859±0.115)、(98.26±9.87)个、(106.85±12.15)个、(1.35±0.17)μmol/L]和空白对照组[(0.870±0.109)、(0.862±0.106)、(95.78±10.74)个、(103.95±10.78)个、(1.31±0.16)μmol/L],而其(45.65±5.65)%细胞增殖抑制率则均高于siRNA-NC组(0.77±0.07)%和空白对照组(0.64±0.05%,P<0.05)。siRNA-NC组和空白对照组的GP130 mRNA和蛋白水平、侵袭细胞数、迁移细胞数、顺铂IC50、细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GP130在膀胱癌中的表达升高,且与膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭和顺铂敏感性均相关,可能作为膀胱癌治疗靶点之一。

过表达miR-218增强食管鳞状细胞癌对顺铂敏感性

目的研究miR-218在食管鳞癌细胞中对顺铂药物敏感性的影响。方法采用递增药物浓度、间歇冲击作用的方法构建耐药细胞株;实时荧光定量PCR检测miR-218在食管鳞癌细胞株Eca109与顺铂耐药株Eca109-CisR差异性表达;进一步在顺铂耐药株Eca109-CisR中过表达miR-218:(1)CCK8实验检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率;(3)Western blot方法检测凋亡抑制蛋白Survivin、Mcl-1及Bcl-2的相对表达量。结果 miR-218在顺铂耐药株Eca109-CisR细胞中呈低表达;过表达miR-218增加顺铂耐药株Eca109-CisR对顺铂的药物敏感性;Western blot结果证实凋亡相关蛋白Survivin、Mcl-1及Bcl-2相对表达减少。结论miR-218表达有助于增加食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性,且给对顺铂耐药的食管鳞癌患者提供潜在的基因治疗靶点。

Serglycin稳定干扰对鼻咽癌高转移细胞顺铂敏感性的影响及机制研究

目的:观察鼻咽癌高转移细胞5-8f的顺铂敏感性受Serglycin稳定干扰的影响,并对干扰机制进行初步探究。方法:建立Serglycin稳定干扰的鼻咽癌高转移细胞株,分为三组:实验组5-8f KDA和5-8f KDC及对照组5-8f scrambled。测定Serglycin蛋白的表达情况;观察亲代及稳定株细胞形态;MTT法检测吸光度,绘制顺铂作用下的增殖曲线;测定细胞存活率;测定干细胞基因表达量;测定Vimentin与E-cadherin含量。结果:实验组Serglycin基因表达被抑制,对照组Serglycin基因表达较多,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组的分泌性Serglycin蛋白明显减少,对照组的Serglycin分泌蛋白表达较多。稳定组细胞形态呈圆形或多边形,对照组细胞为长梭形。MTT检测发现癌细胞受顺铂作用后第三天开始,对照组细胞吸光度增加较稳定组细胞明显快,差异有统计学意义(P<0.05)。与5-8f scrambled组相比,实验组的细胞存活率明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。稳定组细胞干细胞基因表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织中Serglycin能促进Vimentin蛋白的表达,抑制E-cadherin蛋白的表达。结论:Serglycin稳定干扰可以增加鼻咽癌高转移细胞对顺铂的敏感性。

长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1靶向调控微小RNA-20b-5p对宫颈癌细胞自噬及顺铂敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1(LncRNA BLACAT1)对宫颈癌细胞自噬及顺铂敏感性的影响及其分子机制。方法本研究起止时间2018年6月至2019年10月,体外培养人正常宫颈上皮细胞HUCEC、宫颈癌细胞株ME180、C-33A、Hela与顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/DDP,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中BLACAT1、微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)的表达量。以Hela/DDP细胞为研究对象,分别将BLACAT1小分子干扰RNA(si-BLACAT1)及其阴性对照(siNC)、si-BLACAT1与miR-20b-5p特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-BLACAT1与miR-20b-5p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-20b-5p)转染至Hela/DDP细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞抑制率为50%时的顺铂浓度(顺铂IC50值)以此评估顺铂敏感性;蛋白质印迹法(Western blotting)检测p62、微管相关蛋白轻链3I(LCB3-Ⅰ)、微管相关蛋白轻链3II(LCB3-Ⅱ)表达量。双荧光素酶报告实验验证BLACAT1与miR-20b-5p的靶向关系。结果与HUCEC相比,宫颈癌细胞株ME180、C-33A、Hela中BLACAT1的表达水平升高[(0.80±0.16)比(3.41±0.14)、(3.72±0.14)、(2.52±0.15)](P<0.05),miR-20b-5p的表达水平降低[(1.00±0.16)比(0.42±0.16)、(0.33±0.14)、(0.38±0.15)](P<0.05),Hela细胞与Hela/DDP细胞相比差异有统计学意义[(2.52±0.15)比(5.23±0.14);(0.38±0.15)比(0.21±0.11)](P<0.05);与si-NC组相比,si-BLACAT1组p62蛋白水平降低[(0.82±0.13)比(0.24±0.11)](P<0.05),LCB3-Ⅱ蛋白水平升高[(0.64±0.15)比(0.95±0.13)](P<0.05),顺铂IC50值降低[(16.82±3.24)比(6.21±1.25)](P<0.05);双荧光素酶报告实验证实BLACAT1能够靶向结合miR-20b-5p;与si-BLACAT1+antimiR-NC组相比,si-BLACAT1+anti-miR-20b-5p组p62蛋白水平升高[(0.27±0.13)比(1.66±0.15)](P<0.05),LCB3-Ⅱ蛋白水平降低[(2.60±0.15)比(0.85±0.12)](P<0.05),顺铂IC50值升高[(6.23±1.20)比(15.67±2.16)](P<0.05)。结论 LncRNA BLACAT1靶向抑制miR-20b-5p表达而调控宫颈癌细胞自噬从而降低顺铂敏感性。

Twist下调影响卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性的研究

目的:探讨Twist对卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性及细胞增殖凋亡的影响。方法:通过Western blot筛选细胞株,构建小干扰RNA,qPCR筛选Twist-siRNA,将构建成功的Twist-siRNA逆转录于上皮性卵巢癌细胞株A2780中,通过CCK-8细胞术及流式细胞术,研究下调Twist对卵巢癌细胞株的增殖、凋亡及对化疗药物顺铂的影响。结果:选择人卵巢癌细胞株A2780,引入小干扰RNA后,Twist表达降低;细胞的增殖能力下降,凋亡增加(P<0.05),差异有统计学意义。si-Twist组相比对照组Twist基因的表达量明显降低,且呈现一定的顺铂浓度依懒性差异(P<0.05)。结论:下调Twist可抑制卵巢癌细胞A2780的增殖,促进其凋亡;下调Twist卵巢癌细胞A2780对顺铂的敏感性增加。

lncRNAFOXD2-AS1靶向miR-185/SIX1轴对子宫内膜癌细胞增殖迁移及顺铂敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA FOXD2-AS1是否通过靶向微小RNA-185/SIX1轴影响子宫内膜癌细胞增殖迁移及顺铂敏感性。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1-B(HEC-1-B组)和正常子宫内膜细胞HESC(HESC组),构建子宫内膜癌顺铂(DDP)耐药细胞(HEC-1-B/DDP组)。qRT-PCR检测细胞中FOXD2-AS1、miR-185和SIX1表达水平,MTT法检测各组细胞活性及子宫内膜癌细胞对顺铂药物的敏感性,Transwell检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞中SIX1蛋白表达水平。结果与HESC组相比,HEC-1-B组、HEC-1-B/DDP组细胞中FOXD2-AS1表达依次升高(P<0.05);与si-con组相比,si-FOXD2-AS1组HEC-1-B细胞FOXD2-AS1表达、迁移、侵袭显著降低(P<0.05),细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05);与si-con组相比,si-FOXD2-AS1组miR-185表达显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA-FOXD2-AS1组miR-185表达显著降低(P<0.05);与miR-con组相比,miR-185-5p组HEC-1-B细胞中miR-185表达、细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞迁移、侵袭数、SIX1蛋白表达显著降低(P<0.05);与HEC-1-B/DDP组相比,si-FOXD2-AS1组、miR-185-5p组细胞RI值显著降低(P<0.05)。结论FOXD2-AS1可以通过调控miR-185/SIX1轴促进子宫内膜癌细胞增殖迁移,减弱细胞对顺铂敏感性。