固定化脂肪酶ANL-MARE催化酸解合成1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸甘油三酯

1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸甘油三酯(OPL)是人乳中主要的脂质组成,为满足婴幼儿配方食品母乳化需求,该试验探究了新型固定化脂肪酶ANL-MARE催化制备OPL的方法。试验成功制备和表征了固定化酶ANLMARE,并以ANL-MARE为生物催化剂,建立了一种用三棕榈酸甘油三酯(PPP)、油酸(OA)和亚油酸(LA)高效酶催化制备富含OPL结构脂的方法。经单因素和响应面试验优化,获得OPL最优合成工艺为:PPP与总脂肪酸的摩尔比1:14.27,OA与LA摩尔比为1:0.76,脂肪酶添加量12.70%,反应温度50℃,反应4 h,此条件下产物中OPL相对含量为47.93%,2位棕榈酸(sn-2 PA)占总棕榈酸(PA)的质量分数(sn-2 PA相对含量)为71.69%。此外,固定化酶ANL-MARE与商业脂肪酶相比,表现出较好的催化合成OPL的活性。综上所述,固定化酶ANL-MARE具有催化制备OPL结构脂的重大潜力,为人乳脂替代脂的高效制备提供了新策略和理论基础。

顺9,反11-共轭亚油酸对奶牛乳腺上皮细胞氧化应激损伤的影响研究

试验旨在研究顺9,反11-共轭亚油酸(c9,t11-CLA)对H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)氧化损伤的保护作用。将分离纯化后的BMECs用不同的H_(2)O_(2)浓度和作用时间培养,以建立细胞氧化损伤模型;再在培养基中添加不同浓度(0、200、400、600、800μmol/L)的c9,t11-CLA培养BMECs 24 h,以确定c9,t11-CLA适宜的添加浓度;通过前期结果选用浓度为600μmol/L的H_(2)O_(2)和100μmol/L的c9,t11-CLA进行后续试验。试验设置3个组,分别为对照组、H_(2)O_(2)组、c9,t11-CLA+H_(2)O_(2)组,每组6个重复。对照组只用DMEM/F12基础培养基;H_(2)O_(2)组在基础培养基处理24 h后,再用600μmol/L H_(2)O_(2)培养细胞8 h;c9,t11-CLA+H_(2)O_(2)组在基础培养基中添加100μmol/L c9,t11-CLA处理24 h后,再用600μmol/L H_(2)O_(2)培养细胞8 h。试验对细胞内的丙二醛(MDA)活性、总抗氧化活性(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性等指标进行检测,并用RT-PCR法测定细胞的SOD、CAT和GSH-Px的mRNA表达量。结果表明:与对照组相比,H_(2)O_(2)组的T-AOC活力(P<0.05)及SOD、CAT、GSH-Px活性(P<0.01)均下降,MDA含量上升(P<0.05),抗氧化酶SOD、CAT和GSHPx的mRNA表达量下降(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,c9,t11-CLA+H_(2)O_(2)组BMECs的SOD、CAT和GSHPx活性(P<0.05)及其基因的mRNA表达量(P<0.05)均有提高,MDA含量降低(P<0.05)。由此可见,c9,t11-CLA可以提高H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,为奶牛乳腺抗氧化剂的选择提供数据支撑。

蓖麻油酸12-羟化酶基因启动子克隆与分析

蓖麻(Ricinus communis L.)是一种重要的工业油料作物,蓖麻油的主要成分是蓖麻油酸。蓖麻油酸12-羟化酶(oleate 12-hydroxylase, FAH12)是调控蓖麻油酸合成的关键酶,且仅在蓖麻种子中高效表达,具有组织特异性表达特性。经研究发现,FAH12基因表达调控元件主要集中在基因前端-1~-1432 bp (24680984~24682416),共含有84个TATA核心启动元件,42个标准启动子调控元件CAAT-Box, 2个胚乳形成相关的特异性表达元件Skn-1。以蓖麻基因组为材料,获得蓖麻油酸12羟化酶基因启动子,克隆到pCAMBIA1305.2表达载体中,替换组成型启动子CaMV35S,命名为pCAMBIA-FA12P。研究构建的表达载体pCAMBIA-FA12P可以用于后续引导目的基因在蓖麻中特异性表达的研究。

c9t11-和t10c12-共轭亚油酸抗癌和影响脂质代谢的异同

共轭亚油酸(CLA)是一组位置和构象异构体的总称,异构体c9t11-CLA和t10c12-CLA或二者的协同作用赋予了CLA的许多生理功能,比如抗癌、降低体脂含量、预防糖尿病的发生、降低血脂抑制动脉粥样硬化等;异构体c9t11-CLA和t10c12-CLA在结构及来源上存在一定差别——由于双键位置的不同,t10c12-CLA异构体比c9t11-CLA异构体更容易氧化;而在生理功能上二者也有差异——c9t11-CLA异构体的主要作用是抗癌,而t10c12-CLA则是降低体脂、血脂等,大量单一异构体的体外实验研究表明二者在抗癌及脂肪代谢的调节上作用机制也不尽相同。

外源反-10,顺-12共轭亚油酸对体外培养牛乳腺上皮细胞SREBP-1基因表达和蛋白质合成的影响

【目的】旨在观察反-10,顺-12,共轭亚油酸(t10c12 CLA)对牛乳腺上皮细胞中甾醇调控元件结合蛋白(SREBP-1)基因的表达和蛋白质加工的影响。【方法】本试验使用组织块培养法获得奶牛乳腺上皮细胞,使用不同浓度t10c12 CLA处理乳腺上皮细胞后,用油红染色法检测胞质内的脂滴分布,Trizol法提取细胞总RNA,荧光定量PCR法测定相关基因的表达量,试剂盒法提取细胞总蛋白,进行Western blotting。【结果】随t10c12 CLA添加量的增加,细胞质内甘油三酯的含量逐渐降低。与对照组相比,75、112.5和150μmol.L-1 t10c12 CLA均对胞质内甘油三酯的积累有显著抑制作用(P<0.05)。t10c12 CLA的添加对SREBP-1基因和参与SREBP-1蛋白加工调节基因的表达均无显著性影响(P>0.05)。根据蛋白质电泳结果推测,t10c12 CLA对SREBP-1前体蛋白的合成并无影响,可能对SREBP-1的加工活化产生抑制作用或对其分解产生促进作用。【结论】t10c12 CLA能抑制胞质内甘油三酯的积累,对SREBP-1基因的表达、蛋白质翻译均无影响,可能影响其加工活化过程和活性蛋白的降解过程。

重组解脂耶氏酵母全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸的条件优化

采用重组解脂耶氏酵母全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)单体,为了提高t10,c12-CLA的产量,对全细胞催化条件进行优化。通过含有油酸的培养基摇瓶培养36 h获得菌体细胞,经反复冻融处理制备全细胞催化剂。优化后的催化体系条件为:温度28℃,磷酸盐缓冲液(p H 7)浓度0.1 mol/L,转速200 r/min,无需限制氧气。在优化后的反应条件下催化反应40 h,t10,c12-CLA产量达到15.6 g/L,转化率为62.2%。

含油酸培养基培养对重组解脂耶氏酵母全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸的影响

亚油酸异构酶(PAI)在解脂耶氏酵母细胞内成功表达,以添加外源c9,c12-亚油酸(c9,c12-LA)为底物,全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸(trans10,cis12-conjugated linoleic acid,t10,c12-CLA)。解脂耶氏酵母在分别含0.0(对照组)、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 g/L油酸的培养基中生长,收集菌体转移至磷酸盐缓液中进行全细胞催化,比较各组菌体的t10,c12-CLA产率,含5.0 g/L油酸组产物产率最高,达到1.34 g/g,是不含油酸组的1.4倍左右。通过PAI酶活分析及Western blot检测PAI表达量,结果表明,培养基中油酸含量越高,重组解脂耶氏酵母的PAI表达量越低;对比不含油酸组和含5.0 g/L油酸组全细胞催化不同时间的t10,c12-CLA产量,含5.0 g/L油酸组t10,c12-CLA产量最高点的时间比不含油酸组提前约20 h;透射电子显微镜观察2组的菌体状态,含5.0 g/L油酸组细胞壁和细胞膜间隙扩大,该变化可能增加了全细胞催化过程中底物和产物进出细胞的速率,从而提高t10,c12-CLA的转化效率。

碱催化p-QMs的1,6-共轭加成合成二芳基甲基(硫)醚

在摩尔分数为20%的氢氧化钠的催化作用下,实现了对亚甲基苯醌(p-QMs)与醇(或硫酚)的溶剂解反应,即p-QMs的1,6-共轭加成反应,以37%~95%的产率制备了一系列二芳基甲基(硫)醚类化合物。结果表明,该反应具有操作简便、反应条件温和高效、官能团耐受性良好等特点;该方法易于放大,能以80%的产率得到二芳基甲基乙基醚,为后期的潜在应用与转化提供了可能。

t10,c12-共轭亚油酸的生理效应及作用机制研究进展

t10,c12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)是CLA的一种同分异构体,在天然CLA中的含量仅次于c9,t11-CLA,主要来源于反刍动物食品。它是一种功能性营养成分,具有减少脂肪沉积、调节糖代谢、抗癌以及调节免疫等作用,在药物和食品等研究领域具有很广阔的应用前景。文中综述了近年来关于t10,c12-CLA的生理效应及作用机制的研究进展,为其在生产上的应用和进一步开发研究提供信息资料。

有机相脂肪酶催化合成共轭亚油酸β-谷甾醇酯的研究

研究了有机相脂肪酶催化合成共轭亚油酸β-谷甾醇酯的工艺条件,同时研究了甾醇酯的分离纯化方法。优化后的共轭亚油酸β-谷甾醇酯合成条件为:在正己烷介质中,β-谷甾醇浓度为0.05 mmol/mL,酸醇摩尔比为1∶1,4A分子筛用量为60 mg/mL,酶用量为20 mg/mL,在50℃水浴恒温振荡器中连续反应72 h,反应酯化率可达72.63%。用硅胶柱层析分离方法,以环己烷/无水乙醚(19∶1,V/V)溶剂体系做流动相可以达到较好的分离效果。

共轭亚油酸β-谷甾醇酯与β-谷甾醇的脂溶性及抗氧化效果比较

研究了共轭亚油酸β-谷甾醇酯与β-谷甾醇的脂溶性及抗氧化效果。脂溶性试验表明,共轭亚油酸β-谷甾醇酯在花生油中的溶解度为45.24%,而β-谷甾醇在花生油中的溶解度为1.13%。抗氧化性试验表明,在40、50和60℃条件下,共轭亚油酸β-谷甾醇酯添加量为0.10 mg/g时,对CLA、AA和DHA均具有最好的抗氧化效果。而在40、50℃条件下,β-谷甾醇添加量为0.30 mg/g时,对CLA的抗氧化效果较好,但没有共轭亚油酸β-谷甾醇酯的抗氧化效果明显;在60℃条件下,β-谷甾醇的抗氧化效果不明显。二者的抗氧化效果与其在油脂中的添加量之间没有明显的量效关系。

共轭亚油酸对鹌鹑蛋品质、蛋黄胆固醇及ω-3多不饱和脂肪酸含量的影响

试验旨在研究共轭亚油酸(CLA)添加对鹌鹑蛋品质、蛋黄胆固醇含量及ω-3多不饱和脂肪酸沉积的影响。选用15周龄"神丹1号"蛋鹌鹑400只,按单因子试验设计随机分成5组,每组4个重复,每个重复20只,各组日粮分别含0、0.75%、1.50%、2.25%和3.00%CLA,试验期42 d,分别收集第7、14、28和42天鹌鹑蛋进行分析。结果表明:日粮添加1.50%和2.25%CLA饲喂28 d后可显著降低鹌鹑蛋重(P<0.05),而添加3.00%CLA饲喂14 d后即显著降低鹌鹑蛋重(P<0.05)。CLA添加对蛋形指数、蛋壳厚度无显著影响(P>0.05)。日粮添加CLA饲喂至第7天,鹌鹑蛋黄中胆固醇含量随CLA添加浓度的增加而显著降低(P<0.05);饲喂14 d后,降低蛋黄胆固醇含量的最佳CLA添加量为1.50%。日粮添加CLA可降低鹌鹑蛋黄总ω-3多不饱和脂肪酸和二十二碳六烯酸(DHA)含量,小幅增加亚麻酸(ALA)和二十碳五烯酸(EPA)含量。综上所述,CLA添加浓度少于1.50%,饲喂时间少于14 d不影响鹌鹑蛋均重,但可显著降低蛋黄胆固醇含量,且对ω-3 PUFA沉积产生的不利影响较小。

共轭亚油酸与β-环糊精包结作用的紫外光谱研究

采用 UV-91 0 0型紫外可见分光光度计 ,分别测定了共轭亚油酸与 β-环糊精在四种溶剂正己烷、水、甲醇、乙醇中 2 0 4～ 2 60 nm范围内的吸光度 ,发现 :乙醇是较为理想的溶剂 ;即使 β-CD在乙醇中的溶解度极其微小 ,共轭亚油酸与β-CD所形成包结物溶液的紫外吸收光谱也有较为显著的增加 ;β环湖精对长链脂肪酸的包结能力在甲醇中有一定选择性 ;在水中 β-环糊精对共轭亚油酸有较强的增溶作用 ,有利于乳液的稳定 。

顺9,反11-共轭亚油酸对奶牛乳腺上皮细胞炎症因子的影响

比较不同浓度顺9,反11-共轭亚油酸(c9,t11-CLA)的抗炎作用。以奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)为模型,添加确定对细胞增殖无影响的浓度梯度的c9,t11-CLA,检测炎症因子TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白细胞介素-6)、IL-8(白细胞介素-8)、IL-10(白细胞介素-10)含量及TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响。与对照组相比,添加200μmol/L c9,t11-CLA显著降低BMECs中IL-8和TNF-α含量以及mRNA表达量(P<0.05),添加100μmol/L c9,t11-CLA显著增加TNF-α含量和IL-8的mRNA表达量(P<0.05)。试验结果表明,200μmol/L c9,t11-CLA对BMECs中促炎因子有抑制作用,可为后续c9,t11-CLA的抗炎机制研究奠定数据基础。

气相色谱分析法测定酸奶和奶油中c9,t11-共轭亚油酸的含量

【目的）建立用程序升温气相色谱法测定奶制品中 eg,iii-共轭亚油酸含量的方法。〔方法〕首先建立本实验方法的气相色谱分析条件;采用内标法,将样品提取、甲酯化后,进行气相色谱分析;同时对实验方法的回收率、精密度也进行了分析。[结果）能够将甲酯化亚油酸和cg,ill-共轭亚油酸很好地分离;内标物十七烷酸甲酯与其它脂肪酸甲酯能够完全分离,并不受样品中其它组分的影响;cg,iii-共轭亚油酸的含量分别为:帕玛拉特天然酸奶饮品 10.78仰尹g,万家主原味酸奶（搅拌型）5刀3mgig,奶油 22.54ndg脂肪。实验方法的回收率为 84.74％,RSD=3.73％;精密度 M二2、58％。〔结论〕所建立的实验条件准确可靠,这对于分析奶及奶制品来源的6,ill-CIA共轭亚油酸含量具有指导意义。

直链淀粉、β-环糊精-共轭亚油酸复合物对共轭亚油酸的氧化保护研究

具有多种生理活性功能的共轭亚油酸(简称CLA)容易被氧化而丧失应有的功能因子作用。通过比色法测定过氧化值来研究直链淀粉、β-环糊精-CLA复合物对CLA的氧化保护情况。将样品储藏于68℃的烘箱中,定期用超声波来提取复合物样品中的CLA并测定过氧化值。实验表明:直链淀粉-CLA复合物对CLA能起到很好的氧化保护作用;摩尔比约为1∶1的β-环糊精-CLA复合物对CLA的氧化保护作用较弱。

精氨酸-共轭亚油酸抗氧化活性研究

测定了精氨酸-共轭亚油酸清除超氧阴离子自由基(O2-.)、羟自由基(.OH)和二苯代苦味肼基自由基(DPPH.)的能力,并与VC的抗氧化活性进行了比较。结果表明:精氨酸-共轭亚油酸对3种自由基的清除能力均与其浓度存在着量效关系;精氨酸-共轭亚油酸对O2-.有一定的清除作用,但清除能力低于VC;精氨酸-共轭亚油酸对.OH和DPPH.有较强的清除作用,且清除能力均高于VC。在精氨酸和共轭亚油酸的协同作用下,精氨酸-共轭亚油酸的抗氧化活性得到增强。因此,精氨酸-共轭亚油酸是一种有效的抗氧化剂。

固定化乳酸菌3-9转化菜油脚生成共轭亚油酸研究

对从泡菜中分离到的乳酸菌3-9菌株采用固定化技术转化菜油脚料生成共轭亚油酸进行研究。首先对乳酸菌3-9细胞的固定吸附材料及固定化条件进行探讨,确定最适固定化材料为直径1-3 mm的瓷颗粒,细胞吸附固定化时间是1 h,细胞固定率达到75%。将该固定化细胞接入经爪哇毛霉脂肪酶水解后的菜油脚介质转化液中,转化生成的CLA量为（187.91±3.71）μg·m L^-1,是未固定化细胞CLA产量的1.16倍。随后对固定化乳酸菌3-9转化菜油脚生成共轭亚油酸条件进行研究。当以p H8.0的磷酸缓冲液为转化介质基础液,转化时间为17 h、转化温度为40℃、固定化的细胞浓度为0.5 g·m L^-1及摇床转速为120 r·min^-1时,CLA的生成量可达（261.65±3.21）μg·m L^-1,转化率为17.64%。该固定化细胞能连续转化利用16个批次,前10个批次CLA产量均保持在200μg·m L^-1以上,其最高产量可达（283.81±6.02）μg·m L^-1,转化率为19.14%。最后对经1、8和16批次转化后的固定化细胞瓷颗粒进行电镜扫描观察,图片显示经8批次的转化利用后,仍可见大量形态完整的乳酸菌细胞吸咐固定于瓷颗粒中。

顺9,反11-共轭亚油酸对离体培养猪肝细胞和结肠粘膜上皮细胞的影响

本试验旨在探讨顺9,反11-共轭亚油酸对离体培养猪肝细胞、结肠粘膜上皮细胞增殖、PGE2分泌和PPAR-γ基因表达的影响。试验分5个处理,对照组为DMEM/F12培养液,其他处理分别在对照组的基础上添加100μmol/L亚油酸、25、50、100μmol/L顺9,反11-共轭亚油酸;每个处理设6个重复(PPAR-γmRNA定量测定4个重复)。细胞用血清培养24h后处理,继续培养72h。检测上清PGE2分泌、细胞增殖和细胞PPAR-γmRNA拷贝数。结果表明培养液中添加顺9,反11-共轭亚油酸对肝细胞增殖和PGE2分泌都有促进作用(P<0.05),但对PPAR-γ基因表达没有影响;培养液中添加顺9,反11-共轭亚油酸对结肠粘膜上皮细胞增殖影响不显著(P>0.05),对PGE2分泌有显著的促进作用(P<0.05),25μmol/L顺9,反11-共轭亚油酸组PPAR-γmRNA拷贝数显著高于对照组(P<0.05),100μmol/L顺9,反11-共轭亚油酸组极显著高于对照组(P<0.01)。可见,在离体培养条件下,顺9,反11-共轭亚油酸对猪肝细胞和结肠粘膜上皮细胞PGE2分泌都有促进作用,只对结肠粘膜上皮细胞PPAR-γ基因表达有促进作用,这显示顺9,反11-共轭亚油酸对PPAR-γ基因表达的调控可能具有细胞类型的特异性。

市售牛奶中c9,t11-共轭亚油酸测定的气相色谱法研究

目的：用气相色谱内标法检测部分市售牛奶中c9，t11-共轭亚油酸含量（CLA），分析季节因素对牛奶中e9，t11-共轭亚油酸含量的影响。方法：采用气相色谱内标法，内标物为C17：00甲酯，程序升温，将样品提取、甲酯化后，测定并比较夏季和非夏季牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸的含量。结果：实验方法的回收率为83．67％，RSD=3．45％；精密度为RSD=2．09％。夏季和非夏季牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸含量均值范围分别为0～14．9me,／g脂肪和0～7．3mg／g脂肪。夏季牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸含量显著高于非夏季牛奶样品（P〈0．05）。结论：所建立的实验条件准确可靠，季节变化对牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸含量有显著影响。本研究对在国内开展共轭亚油酸强化乳制品的研究具有指导意义。