荔枝胚性悬浮培养物的建立、保持和优化原生质体分离的研究

将松散颗粒状的荔枝胚性愈伤组织转入液体培养基，2～3周后即可建立起优质的悬浮培养物，长时间（＞10代）悬浮培养后，荔枝胚性悬浮培养物的生长势和分化能力下降，但液体培养基（6代）＋固体培养基（1代）交替培养可使其保持稳定良好的状态。材料来源、继代时间、酶液浓度、酶液渗透压和高渗预处理对胚性悬浮培养物的原生质体分离均有明显影响。分离原生质体的合适程序是：取4d龄细胞，经13％的甘露醇预处理1h后，在CPW盐附加10％～11％甘露醇、纤维素酶（CelluaseR－10）0．8％和离析酶（MacereaseR－10）0．4％的混合酶液中分离。在最适条件下，原生质体产量可达107／g．fw以上，活力达90％以上。