基于Wnt信号通路分析葛根素对大鼠颈动脉球囊损伤术再狭窄的干预作用

目的:基于Wnt信号通路分析葛根素对大鼠颈动脉球囊损伤术再狭窄的干预作用。方法:取75只大鼠,将其中15只作为正常组(耳缘静脉注射等体积生理盐水),其余大鼠建立颈动脉球囊损伤术再狭窄模型,建模成功后随机分为模型组(耳缘静脉注射等体积生理盐水)、低剂量组(耳缘静脉注射葛根素30 mg)、中剂量组(耳缘静脉注射葛根素60 mg)、高剂量组(耳缘静脉注射葛根素100 mg),各15只。检测各组新生内膜面积、管腔面积;采用酶联免疫吸附法检测血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、硫化氢(H2S)、1型胶原(Collagen1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2),检测各组Wnt通路相关蛋白。结果:与中剂量组比较,高剂量组新生内膜面积、VEGF、TNF-α、Collagen1、MMP-2、Wnt1、Wnt3a水平表达降低(P<0.05),高剂量组管腔面积及H2S水平表达升高(P<0.05)。结论:葛根素可能通过调控Wnt信号通路中相关重要信号传导分子的蛋白表达,发挥改善颈动脉球囊损伤术再狭窄的作用,且呈剂量依赖性。

实验性家兔颈动脉球囊扩张动脉狭窄动物模型的建立

30 %～ 5 0 %的再狭窄严重制约了经皮腔内血管成形术治疗效果 ,为探索再狭窄的发病机制以进行干预研究 ,建立家兔动物模型。取颈部正中切口 ,无菌暴露兔右颈动脉 ,在颈内动脉起始部及颈总动脉近心侧距动脉分叉 2cm处用动脉夹临时夹闭 ,自颈外动脉远端结扎并由结扎近心侧穿刺进入导丝、球囊导管 ,撤除颈总动脉动脉夹进行经皮腔内血管成形术。然后在不同时间进行组织学及形态学分析 ,并以左侧颈总动脉作正常对照组。结果发现 ,颈总动脉经皮腔内血管成形术后早期主要病理改变是血栓形成 ,中晚期为血管平滑肌细胞由中层移行到内膜并失控增殖伴有基质增多 ;第 15天管腔出现明显狭窄、内膜增厚。结果提示 ,家兔颈总动脉经皮腔内血管成形术模型模拟了临床经皮腔内血管成形术过程 ,死亡率低、成功率高 。

人参皂苷Rg3对大鼠颈动脉球囊损伤模型PCNA、CyclinD1及CDK4表达的影响

目的研究人参皂苷Rg3对大鼠颈动脉球囊损伤后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK) 4表达的影响。方法雄性SD大鼠30只,其随机分成假手术组,模型组,人参皂苷Rg3组(10 mg/kg)。用球囊建立大鼠颈动脉损伤模型,次日灌胃给药,连续14 d;利用苏木精-伊红(HE)染色观察损伤血管组织形态学的变化;利用Western印迹和Real-Time PCR法检测损伤血管组织中PCNA、Cyclin D1及CDK4的表达。结果与假手术组比较,模型组血管新生内膜明显增厚,内膜/中膜面积比明显增加,PCNA、Cyclin D1及CDK4的表达显著增强;与模型组比较,人参皂苷Rg3组损伤血管内膜增生明显减轻,内膜/中膜面积比明显下降,PCNA、Cyclin D1及CDK4的表达明显降低。结论人参皂苷Rg3可能是通过下凋PCNA的表达,抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的活性,从而减轻血管内膜增生。

川芎嗪对兔颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响

目的 研究川芎嗪对兔颈动脉球囊损伤后新生内膜及管腔狭窄度的影响 ,探讨其预防再狭窄的可能性。方法 应用直径为 3mm的球囊导管造成家兔左颈动脉去内皮损伤模型。术后 14d和 2 8d分别测量对照组和川芎嗪治疗组动脉新生内膜及中膜厚度、新生内膜面积和管腔狭窄度并应用Brdu和α actin免疫组化方法观察新生内膜细胞的增殖指数。结果 治疗组新生内膜及中膜厚度、新生内膜面积、管腔狭窄度和细胞增殖指数均明显低于对照组。结论 川芎嗪具有明显抑制动脉损伤后新内膜的形成及降低管腔狭窄度的作用。

颈动脉球囊损伤模型大鼠核转录因子κB变化与颈动脉血管内膜增生的关系

目的:新生内膜异常增殖是血管成形术后再狭窄的主要原因,但其机制目前还不清楚。观察大鼠颈动脉球囊损伤术后核因子κB表达的变化及其与动脉内膜增生和血管重塑的关系。方法:实验于2007-01/05在深圳市人民医院动物实验中心完成。①实验材料:SPF级雄性SD大鼠36只,体质量350g左右。②实验方法:将大鼠一侧颈动脉行球囊损伤术作为实验组,另一侧颈动脉作为对照组,分别在颈总动脉球囊损伤后6h,3,7,14,28d后麻醉并处死大鼠,留取两侧颈总动脉标本。③实验评估:应用组织形态学方法检测内膜增生并进行计算机图像分析;同时通过凝胶电泳迁移率实验测定核因子κB的活性。结果:纳入大鼠36只,因造模失败和死亡排除6只,进入结果分析30只。①球囊损伤后,内膜面积在7,14,28d逐渐增厚,内膜/中层比率增长,与对照组比较,差异显著(P<0.05)。两组的中膜面积无明显变化。血管重塑指数在损伤后6h最大,之后不断减小。②核因子κB在对照组几乎不表达。而球囊损伤后6h即可见核因子κB表达,并于14d达高峰,28d仍有较强表达。实验组核因子κB各时间点与对照组比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:大鼠颈动脉球囊损伤术后,核因子κB被迅速激活并持续增加,可能是内膜增生、血管重塑的重要机制之一。

颈动脉球囊扩张再狭窄动物模型的建立

目的 探索再狭窄的发病机制进行干预研究 ,建立颈动脉再狭窄家兔动物模型。方法 取颈部正中切口 ,无菌暴露兔右颈动脉 ;在颈内动脉 (ICA)起始部及颈总动脉 (CCA)近心侧距动脉分叉2cm处用动脉夹临时夹闭 ;自颈外动脉 (ECA)远端结扎并由结扎近心侧穿刺进入导丝、球囊导管 ,撤除CCA动脉夹进行球囊扩张血管成形术 (PTA)。于PTA后不同时间进行组织学及形态学分析 (左侧颈总动脉作正常对照组 )。结果 PTA后早期CCA主要病理改变是血栓形成 ,中晚期为血管平滑肌细胞(VSMC)由中层移行之内膜并失控增殖伴有基质增多 ;第 15天管腔出现明显狭窄 (P <0 .0 1)内膜增厚(P <0 .0 1)。结论 家兔颈总动脉PTA模型模拟了临床过程 ,成功率高 。

甲氨蝶呤抑制兔颈动脉球囊损伤后新生内膜形成

目的 探讨不同剂量甲氨蝶呤 (MTX)对血管损伤后新生内膜形成的影响。方法 制备兔颈动脉球囊损伤模型 ,动物随机分为对照组、MTX 0 5mg/kg、MTX 1 5mg/kg及MTX 5mg/kg组 ,每组 5～ 8只 ,采用肌肉注射方式给药 ,于术后 2周和 4周取材 ,分别进行伊文思染色观察内皮覆盖情况、增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组化染色和定量组织形态学分析。结果 MTX治疗组血管内膜面积、内膜 /中膜面积比值均显著低于对照组 ,内膜面积抑制率达 4 6 %～ 5 6 %,不同剂量MTX之间差异无显著性。内膜及中膜PCNA阳性细胞数目较对照组减少。伊文思蓝染色显示各组间内皮修复程度差异无显著性。结论 MTX能够有效地抑制球囊损伤后血管平滑肌细胞的增殖和新生内膜形成 ,在一定剂量范围内 ,MTX的作用无明显差异。

黄柏提取物小檗碱对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生及炎性因子的影响

目的探讨黄柏提取物小檗碱对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生及炎性因子的影响。方法采用体质量350～400g雄性Wistar大鼠制备颈动脉球囊损伤模型，将40只成模大鼠随机分为模型组和小檗碱组各20只，其中小檗碱组给予小檗碱2．5mg／kg腹腔注射，每天1次，连续14d。另取20只雄性Wistar大鼠仅行颈部切开作为假手术组。实验结束后处死各组大鼠并取左侧颈动脉，经石蜡包埋后进行HE染色，观察病理形态并比较各组血管内膜面积、中膜面积及内膜与中膜面积的比值（I／M），采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子[单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、C反应蛋白（CRP）、转化生长因子-β（TGF—β）和前列腺素E2（PGE2）]水平，同时采用实时定量PCR法检测左侧颈动脉标本中炎症反应限速酶环氧化酶-2（COX-2）mRNA和磷脂酶A，mRNA水平。结果假手术组血管无内膜增生，且光滑完整；模型组出现严重血管内膜增生，且发生严重管腔狭窄；小檗碱组血管内膜增生受抑制，管腔狭窄获显著缓解。模型组新生血管内膜面积、I／M及血清MCP—1、CRP、TGF—β、PGE2水平和左侧颈动脉COX-2mRNA和磷脂酶A，mRNA水平均明显高于假手术组（P均〈0．05）；小檗碱组上述指标均明显低于模型组（P均〈0．05），但除CRP与假手术组比较差异无统计学意义外（P〉0．05），其余指标水平均明显高于假手术组（P均〈0．05）。结论黄柏提取物小檗碱可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及炎性反应，可能与其抑制炎症反应限速酶的表达水平有关。

前列腺素E_1防治家兔颈动脉球囊损伤后再狭窄的实验研究

目的:探讨前列腺素E_1对家兔颈总动脉球囊损伤后再狭窄的防治作用。方法:20只家兔颈动脉球囊损伤术后,随机分成对照组(n=10)和前列腺素E_1组(n=10),前列腺素E_1组术后每日静脉注射前列腺素E_10.2μg/kg,共10天。各兔于术前、术后3天及1、2、4、8周留取静脉血,用放射免疫法检测血浆中血栓素A_2(TXA_2)代谢产物血栓素B_2(TXB_2)和前列环素(PGI_2)代谢产物6-酮-前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α));术后4、8周每组随机处死家兔各5只,留取颈总动脉行病理形态学观察。结果:术后3天及1、2周与对照组相比,前列腺素E_1组TXB_2明显降低,6-keto-PGF_(1α)明显升高,TXB_2/6-keto-PGF_(1α)明显降低(P<0.01),术后4、8周逐渐恢复正常。术后4、8周,前列腺素E_1组动脉内膜、中膜厚度明显小于对照组(P<0.01)。结论:前列腺素E_1有抑制家兔颈动脉球囊损伤后内膜、中膜增厚和降低再狭窄发生率的作用。

赤芍对兔颈动脉球囊损伤后血管紧张素Ⅱ激活的影响

目的 :观察赤芍对高脂喂养兔颈动脉球囊损伤后内膜增殖及血管紧张素Ⅱ (AgⅡ )激活的影响。方法 :家兔饲喂高脂饲料 ,赤芍组服用赤芍提取物 ,相当于生药 3 g/kg、2 g/kg或 1g/kg。于 6周末球囊损伤颈总动脉内膜建立再狭窄 (RS)模型 ,于 8周末取血放射免疫测定血浆AgⅡ ,取血管作血管张力测试 ,血管切片后形态学测定增生内膜面积 ,免疫组组织化学染色计算增殖细胞核指数。结果 :赤芍组血浆AgⅡ水平降低 ,血管对AgⅡ的收缩反应减弱 ,增生内膜面积、增生内膜面积 /中膜面积显著减少。 结论 :赤芍降低内膜增殖程度与抑制肾素 血管紧张素系统 (RAS)激活有关。

转染ANT1基因诱导颈动脉球囊损伤大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的通过腺病毒载体在体转染大鼠颈总动脉球囊损伤模型,研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶-1(adeninenucleotide translocase 1,ANT1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法将72只雄性SD大鼠随机分为正常组、单纯损伤组、Ad-GFP转染组、Ad-ANT1转染组,每组18只。用携带ANT1的腺病毒载体(Ad-ANT1)或空载体腺病毒载体(Ad-GFP)局部感染大鼠颈总动脉球囊损伤动物模型,在损伤后7、14、28 d,取大鼠损伤侧颈动脉RT-PCR检测ANT1 mRNA表达,West-ern blot以及免疫组化检测BAX和Bcl-2表达,TUNEL法原位检测新生内膜及中膜VSMCs凋亡率。结果 Ad-ANT1腺病毒转染后大鼠颈动脉ANT1大量表达,在14 d达到高峰,显著高于Ad-GFP转染组及单纯球囊损伤组(P<0.01),至28 d时仍有表达。在7、14 d时,Ad-ANT1转染组BAX阳性表达率显著高于Ad-GFP转染组及单纯损伤组(P<0.05);Bcl-2阳性表达率高于正常血管,但与Ad-GFP转染组和单纯损伤组无显著差异(P>0.05);Ad-ANT1转染组新生内膜及中膜平滑肌细胞凋亡率显著高于其他各组(P<0.05);在14、28 d时,Ad-ANT1转染组新生内膜及中膜面积比(IA/MA)小于Ad-GFP转染组及单纯损伤组(P<0.05)。结论腺病毒载体介导过表达ANT1可诱导大鼠颈总动脉球囊损伤动物模型新生内膜及中膜VSMC的凋亡,其作用可能通过上调促凋亡蛋白BAX的表达实现。

BTEB2反义基因转染对大鼠颈动脉球囊损伤后内皮修复的影响

目的构建反义基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)重组腺病毒载体,并研究BTEB2反义RNA对动脉损伤后内皮修复的影响。方法通过RTPCR从培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中制备BTEB2cDNA,将其反向克隆至腺病毒载体,构建反义BTEB2重组腺病毒;用重组腺病毒局部转染球囊损伤的大鼠颈动脉,观察反义BTEB2基因转染对BTEB2蛋白表达及损伤内皮修复的影响。结果构建的BTEB2反义重组腺病毒经鉴定正确,其滴度为5×1010pfumL;反义BTEB2重组腺病毒转染可显著抑制BTEB2蛋白表达,明显促进内皮的修复,改善损伤动脉的内皮依赖性舒张功能。结论成功构建了反义BTEB2重组腺病毒载体。BTEB2反义基因转染可显著促进大鼠颈动脉球囊损伤后的内皮修复。

大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞过度增殖与基质交感分子1的关系研究

目的研究大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞中基质交感分子1(STIM1)的表达变化情况,揭示平滑肌细胞增殖的内在机制。方法采用大鼠颈动脉球囊损伤后血管再狭窄的动物模型,18只SD大鼠随机均分为3组:对照组、损伤7d组和损伤14d组。免疫组织化学染色和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测增生的血管平滑肌细胞中STIM1的表达变化,HE染色评价血管增生情况。结果正常大鼠颈动脉内膜与中膜面积比值(IA/MA)很小,损伤7d组IA/MA值显著高于对照组(P<0.05);损伤14d组IA/MA值显著高于7d组(P<0.05)。损伤后7d血管壁STIM1 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05);损伤后14d血管壁STIM1 mRNA显著高于7d组(P<0.05)。免疫组化显示STIM1在血管壁的表达主要位于增殖的平滑肌细胞中,随损伤时间延长其表达量逐渐升高。结论颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖伴有STIM1表达的上调,STIM1可能参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。

曲尼司特对犬颈动脉球囊损伤模型的抗狭窄作用

目的通过球囊损伤犬颈动脉模型观察曲尼司特对颈动脉损伤后再狭窄的作用．方法犬被随机分为对照组(n=5)及曲尼司特干预组(50 mg/kg,BID,n=4),颈总动脉损伤前2周及术后4周进行分组干预。通过测定血浆血管紧张素(Ang)I及AngII水平、糜酶(chymase) mRNA表达水平、颈动脉PCNA(细胞增殖核抗原)阳性率及颈动脉各层厚度观察曲尼司特对犬颈动脉损伤后狭窄的作用。结果两组血浆Ang I、Ang II水平及颈动脉外／中膜厚度的差异无统计学意义(P值均>0．05),但曲尼司特干预组较对照组的chymase mRNA表达(A值分别为0．425±0．114比0．708±0．083)、颈动脉各层PCNA阳性率(内膜:0．45±0．05比0．57±0．12,中膜: 0．54±0．05比0．61±0．02,外膜:0．25±0．10比0．36±0．08)及颈动脉内／中膜厚度(0．518±0．044比0．576±0．028)均明显降低(P值<0．05)。结论曲尼司特通过chymase途径对犬颈动脉球囊损伤后的再狭窄具有抑制作用。

Fas配体基因对大鼠颈动脉球囊损伤后血管重塑的影响

研究Fas配体基因对大鼠颈动脉球囊损伤后血管重塑的影响 ,制作大鼠颈动脉球囊损伤模型 ,将 12只颈动脉球囊损伤的SD大鼠随机分为两组 :对照组 (n =6 )颈动脉内转染Ad βgal;Fas配体组 (n =6 )颈动脉内转染Ad Fas配体。球囊损伤 14天后 ,采用原位灌流固定取材 ,染色 ,进行组织学观察和形态学分析。结果发现 ,Fas配体明显增加损伤血管的腔面积和外弹力膜面积 ,减少损伤血管的内膜面积 ,而且内膜面积 外弹力膜面积之比也明显减少。结果提示 。

兔颈动脉球囊成形术后MMP9和TIMP1的原位表达

目的 :观察球囊损伤后基质金属蛋白酶 9( MMP9)及其组织特异性抑制因子1 ( TIMP1 )在血管原位表达的动态变化 ,探讨其在球囊成形术后再狭窄 ( RS)形成中的作用机制。方法 :5 0只兔子随机分成正常组、术后 3、7、2 1、90天组 ,正常组不做处理 ,原位杂交方法观察 MMP9及 TIMP1的 m RNA改变。结果 :正常对照组 MMP9m RNA未见阳性表达 ;3d时 ,可见整个中层广泛阳性表达 ;7d时 ,新生内膜阳性表达 ,中层未见阳性表达 ;球囊损伤后随时间延长表达强度及范围逐渐减小 ;90 d时 ,未见阳性表达。正常对照组血管内皮细胞可见 TIMP1基础表达 ;3d时 ,中层广泛阳性表达 ;7d时 ,新生内膜阳性表达 ,中层未见阳性表达 ;2 1 d时 ,新生内膜阳性表达 ,中层未见阳性表达 ;90 d时 ,仍有新生内膜阳性表达。结论 :血管球囊成形术后 MMP9及 TIMP1 m RNA异常表达可能与血管平滑肌细胞迁移。

雌二醇对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和内皮功能的影响(英文)

目的研究雌二醇对血管内皮损伤后血管壁细胞增生和内皮功能恢复的作用。方法应用球囊导管剥脱大鼠的左颈总动脉 ,于术前六天和术后两周给予17_β雌二醇 ,通过形态学分析和免疫组化测定血管内膜增生和血管平滑肌细胞增殖程度 ,并测定乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应。结果17_β雌二醇显著抑制血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖和减少新生内膜面积。内皮损伤后乙酰胆碱诱导的血管舒张反应显著降低 ,最大为12 %±6 % ;雌二醇能使其显著改善 ,最大舒张反应为48 %±9 % (P<0.05)。

颈动脉球囊临时阻断试验的护理配合

目的 探讨颈动脉球囊临时阻断试验的护理配合。方法 术前行常规心理护理,术中严密监视患者生命体征,注重术中语言交流,术后加强巡视。结果 患者在阻断试验中均无严重并发症发生。结论 术前的心理护理,术中严密监视患者生命体征,注重语言、肢体交流,对各种介入器械及抢救设备的完善准备,术后加强巡视是使手术顺利完成的重要保证。

大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对颈动脉球囊损伤后新生内膜形成的影响

目的 探讨腺病毒载体介导的大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因转染对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成的影响。方法 应用带有绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体将大鼠AT2R基因转移至颈动脉球囊损伤模型中,2 1d后取材,应用免疫组织化学方法检测AT2R在动脉壁中的表达,图像分析观察其对新生内膜形成的影响。结果 在体大鼠颈动脉腺病毒载体的转染率达4 0 % ,AT2R基因在血管壁的新生内膜、中膜、外膜稳定表达,转染AT2R基因的球囊损伤后颈动脉与绿色荧光蛋白基因对照组相比,血管新生内膜 中膜面积比降低了4 8%。结论 AT2R基因转染可抑制颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成,对血管成形术后再狭窄可能有一定的预防作用。

白芍总苷干预颈动脉球囊损伤模型大鼠Foxp3及骨形态发生蛋白7的表达

背景:经皮冠状动脉介入治疗后再狭窄的发生影响治疗效果。研究表明,白芍总苷能通过多种途径调节自身免疫反应,能够抑制单核巨噬细胞产生和分泌炎性细胞因子,清除氧自由基、影响细胞增殖以及具有抗炎、止痛、抗应激等作用。目的:观察大鼠颈动脉损伤后Foxp3及骨形态发生蛋白7的变化及应用白芍总苷干预后表达的变化。方法:实验方案经深圳市人民医院动物实验伦理委员会批准。将SD大鼠36只随机分为4组:对照组、球囊损伤组、白芍总苷灌胃组、白芍总苷浸泡球囊组。对照组生理盐水灌胃4d后假手术,术后生理盐水灌胃13d;球囊损伤组生理盐水灌胃4d后左侧颈总动脉进行球囊损伤,术后生理盐水灌胃13d;白芍总苷灌胃组用白芍总苷灌胃4d后行球囊损伤,术后白芍总苷灌胃13d;白芍总苷浸泡球囊组用生理盐水灌胃4d后行球囊损伤,术前将球囊浸泡于白芍总苷稀释液4h,术后生理盐水灌胃13d。术后14d取左侧颈总动脉损伤血管行苏木精-伊红染色,观察内膜变化,应用RealtimeRT-PCR检测损伤血管组织中Foxp3、骨形态发生蛋白7mRNA表达。结果与结论:①白芍总苷浸泡球囊组内膜面积及内膜面积/中膜面积,较白芍总苷灌胃组及球囊损伤组减小(P<0.05),但显著高于对照组(P<0.05);②Foxp3、骨形态发生蛋白7mRNA表达:对照组<球囊损伤组<白芍总苷灌胃组<白芍总苷浸泡球囊组,差异均有显著性意义(P<0.05);③结果说明,白芍总苷通过调节Foxp3及骨形态发生蛋白7mRNA表达,调节炎症因子的平衡,抑制损伤血管的炎症反应,减轻损伤血管的狭窄。使用白芍总苷浸泡球囊法较白芍总苷灌胃法对抑制炎症导致血管狭窄效果更佳。