白细胞介素1受体颉颃剂抑制脂多糖促奶牛外周血单个核细胞氧化应激损伤作用的研究

试验以脂多糖(LPS)为刺激源,以细胞活力、抗氧化指标和炎症因子为判断指标,探讨白细胞介素1受体颉颃剂(IL-1Ra)通过抑制白细胞介素1β(IL-1β)的活性,对LPS诱导外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)氧化损伤的缓解作用。试验采用单因子完全随机设计,PBMCs被随机分为7个组(每组6个重复),分别给予不同的处理:第1组是阴性对照组(Neg组),完全培养基培养30 h;第2组损伤组(Dam组),是在完全培养基中培养6 h后,再经10μg/mL的LPS工作液培养24 h;第3至7组(R0.25、R0.5、R1、R5组和R10组)细胞分别经浓度为0.25、0.5、1、5、10 ng/mL的IL-1Ra培养6 h,接着经10μg/mL的LPS工作液培养24 h。结果表明:与Neg组相比,Dam组的细胞活力、抗氧化相关酶[包括总抗氧化能力(T-AOC)以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)]的活性显著降低,丙二醛(MDA)浓度、炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β含量以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、一氧化氮(NO)含量均显著升高(P≤0.05)。与Dam组相比,R1组显著逆转了氧化损伤引起的上述抗氧化活性的降低和炎症因子浓度的升高,其他IL-1Ra处理组对上述指标的逆转效果不同程度地低于R1组(P≤0.05)。上述结果说明,LPS通过诱发PBMCs产生大量IL-1β进而导致细胞氧化损伤,IL-1Ra剂量依赖性地缓解了LPS引起的氧化损伤,添加剂量以1 ng/mL为宜。

天然产物库中体外颉颃A型塞内卡病毒化合物的筛选及作用途径研究

【目的】寻找对A型塞内卡病毒(SVA)具有抑制活性的天然产物,并深入研究其颉颃途径。【方法】将天然产物浓度统一稀释至10μmol/L,与荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)相结合,在天然产物小分子库中筛选出具有荧光素酶抑制活性的化合物,采用实时荧光定量RT-PCR方法验证其活性,通过乳酸脱氢酶(LDH)法进行细胞毒性试验确定最大无毒浓度,结合病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR、Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)等技术,在病毒感染周期的不同阶段,对其颉颃SVA的效果及途径进行研究。【结果】通过初筛,从136种天然产物中筛选出莫能霉素钠盐、孕酮、叶下珠次素、4-羟基德里辛和2-甲基雌酮5种能体外颉颃SVA的化合物。进一步通过实时荧光定量RT-PCR复核验证和细胞毒性检测,筛选出一种能体外颉颃SVA的天然产物——孕酮。与空白对照组相比,其在体外可导致SVA mRNA表达水平极显著下降(P<0.01),最大无毒浓度达50μmol/L。进一步研究表明,孕酮能在感染后8、12、24、36 h持续抑制SVA增殖,与对照组相比,在感染后24和36 h病毒滴度显著下降(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度(10、20和50μmol/L)孕酮在吸附阶段导致SVA吸附水平极显著下降(P<0.01);在复制阶段使SVA VP3水平显著下降且使病毒滴度极显著下降(P<0.01);在释放阶段使释放胞外的病毒比例极显著下降(P<0.01);但对其他途径无显著影响。说明孕酮能在体外抑制SVA吸附、复制和释放,但对其入胞、组装途径无明显作用。【结论】本研究从天然产物小分子库中筛选出一种具有低细胞毒性且对SVA具有较强颉颃作用的天然产物——孕酮。该产物对SVA吸附、复制和释放阶段具有抑制作用,从而颉颃SVA的感染。本研究为促进抗SVA药物的开发和研究SVA的感染偏好性提供了科学参考。

抗A型塞内卡病毒天然产物筛选及颉颃作用机制研究

【目的】从天然产物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)活性的天然产物并研究其颉颃作用机制。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)与BHK-21细胞,结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA药物体外筛选平台。从天然产物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的天然产物,并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性,通过细胞毒性试验确定其最大无毒浓度。选择病毒感染周期的吸附、入胞、复制、组装释放4个主要过程,利用实时荧光定量RT-PCR、50%组织细胞感染量(TCID 50)测定等进行天然产物分子颉颃机制研究。【结果】从包含560种天然产物的分子库中筛选出16种候选抗SVA活性分子,通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测,鉴定出4种安全、有效的天然产物,分别为20S-原人参三醇((20S)-protopanaxatriol)、蕈青霉素(paxilline)、方胆碱(fangchinoline)、竹红菌乙素(hypocrellin B)。作用机制研究显示,20S-原人参三醇能抑制SVA感染过程中的吸附、复制阶段;蕈青霉素在SVA的吸附、入胞、复制、组装释放阶段即整个病毒感染周期均发挥抑制作用;方胆碱能抑制SVA的入胞、复制;竹红菌乙素能抑制SVA的吸附、入胞、复制及组装释放阶段。【结论】本试验从天然产物库中筛选出了4种具有抗SVA活性的天然产物,这些化合物抗病毒效果良好,且作用机制各有不同。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。

烟草野火病土壤颉颃细菌的筛选和鉴定

从植物根系的土壤中分离到127个细菌分离物,皿内实验筛选出对烟草野火病有抑制作用的菌株6个,盆栽试验表明,菌株S1对烟草野火病兼有保护和治疗作用,防效分别为85.98%和76.95%,同时菌株S1对植株还具有明显的促生作用。经鉴定菌株S1为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌。

小型猪复合麻醉剂特异性颉颃剂对小型猪各项血液指标的影响

小型猪复合麻醉剂（XFM）是东北农业大学外科教研室研制开发的一种小型猪专用复合麻醉剂,主要成分为噻环乙胺、噻拉嗪、强痛灵等[1]。现在已经完成了XFM对小型猪呼吸、循环系统的影响,肝肾功能的影响，血流动力学的影响，以及其全麻机理的研究，试验结果令人满意。

镉对鸡抗氧化系统功能的影响及硒颉颃的效应

30只 10 0日龄海兰公鸡随机分为对照组、加镉组、加硒镉组 ,对照组饲喂基础日粮 ,加镉组饲喂基础日粮 +Cd Cl215 0 m g/ kg,加硒镉组饲喂基础日粮 +Cd Cl2 15 0 mg/ kg+Se10 m g/ kg,分笼常规饲养 ,试验期为 6 0 d,复制出鸡亚慢性镉中毒及硒颉颃模型。试验结果显示 ,睾丸脏器系数为对照组、加硒镉组至加镉组依次降低 ;血清和睾丸中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)活性为对照组、加硒镉组至加镉组依次降低 ,变化比较明显 ;血清和睾丸中超氧化物歧化酶 (SOD)活性为对照组、加硒镉组至加镉组依次降低 ,变化比较明显 ;血清和睾丸中丙二醛 (MDA)含量为对照组、加硒镉组至加镉组依次升高。揭示了镉对鸡抗氧化系统功能的影响 ,构成了镉损伤机体的病理学基础。补硒后可降低镉的损伤。

氮素形态对营养液pH值及磷锌和磷铁间颉颃作用的影响

以水培小麦幼苗为试材，研究了氮素形态对营养液ｐＨ值及磷锌、磷铁颉颃作用的影响。结果表明，只有仅以ＮＯ－３为氮源的营养液，其ｐＨ值才升高。氮素形态改变了营养液的ｐＨ值，因而氮素形态会影响小麦对锌、铁的吸收及运转。在各氮素形态配比下，磷与锌、铁之间均存在颉颃作用，且表现为高磷抑制锌、铁向小麦叶片的运输。

2种组胺受体颉颃剂对内毒素引起雏鸡肺脏肥大细胞及组胺含量的影响

探讨内毒素刺激雏鸡肺脏肥大细胞及组胺含量变化,以及组胺受体颉颃剂的反馈调节作用。120羽20日龄雏鸡随机分为空白组、模型组、扑尔敏组、西咪替丁组、扑西联合组。分别用相应的药物处理。在5、10、15 d各组随机抽取7个样本,颈静脉放血处死,取肺脏2份,1份冷冻后,荧光法测定组胺;另外1份用Carnoy’s液固定,甲苯胺蓝染色显示肥大细胞。结果发现,模型组肺实质肥大细胞数量极显著少于其余各组(P<0.01),肺气道黏膜肥大细胞数量极显著少于扑尔敏组、西咪替丁组(P<0.01),扑西联合组肺组织中组胺含量均低于其他组。表明扑尔敏和西咪替丁可以缓解内毒素诱导雏鸡肺组织中肥大细胞数量和组胺含量下降的趋势。

小型猪特异性麻醉颉颃剂对小型猪肝肾功能的影响

为研究小型猪特异性麻醉颉颃剂对小型猪肝肾功能的影响,以复合麻醉剂(XFM)麻醉的中国试验用小型猪为试验模型,采用小型猪特异性麻醉颉颃剂进行催醒,检测催醒过程中血清谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)的变化。结果发现:不同时间点小型猪血清中各项指标与麻醉前相比,差异不显著(P>0.05),均在生理范围内波动。表明临床剂量的XFM特异性麻醉颉颃剂对小型猪肝肾功能无明显影响。

烟草青枯病颉颃细菌的筛选及其防病效果研究

从安徽、浙江等地的烟草、蕃茄和辣椒等茄科作物根标、根围土壤和病、健植株组织中，分离纯化到１６８个细菌菌株，通过室内异步培养法和平板扩散法，筛选出１７个对烟草青枯病菌具有一定颉颃作用的菌株，其中，ＡＱＢ—４６和ＡＱＢ一３３两菌株抑菌能力最强，抑菌圈直径分别为３３．７ｍｍ和３０．６ｍｍ。盆栽防病结果表明，这２个菌株对青枯病的防治效果在接种青枯菌后的３０ｄ内一直维持在５４．２％６４．７％。菌株ＡＱＢ－６２室内抑菌试验效果明显低于ＡＱＢ－４６和ＡＱＢ一３３，但盆栽防病的效果在接种后的２０ｄ内也一直维持在４９．９％５３．０％的水平。接种前３ｄ喷施颉颃菌的各处理，其防病效果远高于接种后３ｄ喷施颉颃菌的各处理，前者防效最高为６４．７％，而后者最高仅为１５．０％，说明颉颃菌对烟草青枯病的防治主要表现为预防。此外，颉颃菌的防病作用主要表现为减轻发病程度，而对发病率没有影响。颉颃菌除具有直接的抑制青枯菌定殖、繁衍、扩展外，有的菌株如ＡＱＢ—６２还具有一定的诱导抗性作用。ＡＱＢ－４６，ＡＱＢ－３３和ＡＱＢ－６２等３个菌株可望研制成生物农药，使之更有效地防治烟草青枯病。

小型猪特异性麻醉颉颃剂对XFM麻醉下大鼠海马c-jun基因mRNA转录的影响

本试验旨在研究小型猪特异性麻醉颉颃剂对小型猪特异性麻醉剂(XFM)麻醉下大鼠海马脑区c-jun基因mRNA转录的影响,藉以探究其催醒机制。90只成年SD大鼠被随机分成XFM麻醉组、XFM麻醉+生理盐水组、XFM麻醉+小型猪特异性麻醉颉颃剂组,每组分为5个不同采样时间点的亚组。采用实时荧光定量PCR技术检测样品中c-jun基因mRNA转录量。结果显示,XFM麻醉诱导大鼠海马脑区c-jun基因mRNA转录,各时间点海马脑区c-jun基因mRNA转录与0min比较显著升高(P<0.01),XFM麻醉大鼠腹腔注射生理盐水后各时间点海马脑区c-jun基因mRNA转录与XFM对照组间无显著差异(P>0.05),注射小型猪特异性麻醉颉颃剂后抑制了XFM诱导大鼠海马c-jun基因mRNA的转录,与XFM对照组比较差异显著(P<0.01或P<0.05)。结果表明,小型猪特异性麻醉颉颃剂抑制了XFM麻醉诱导大鼠海马脑区c-jun基因mRNA的转录,这可能与小型猪特异性麻醉颉颃剂催醒机制相关。

小型猪特异性麻醉复合颉颃剂对小型猪脑电影响的试验

为研究小型猪特异性麻醉复合颉颃剂对小型猪脑电图的影响,本试验采用14头中国实验用小型猪,用XFM制作麻醉模型,小型猪特异性麻醉复合颉颃剂不同时间点分组给药,通过脑电图仪监测脑电波变化。结果表明,脑电波节律、频率和振幅呈现了相应的规律性变化,并在麻醉时间上实现了可控性,说明小型猪特异性麻醉复合颉颃剂对XFM表现出了良好的颉颃效果。

农作物重要病原菌颉颃菌的筛选

从全国6省12个地区的26种植物根围采集到土壤样本50份。经室内分离、纯化后得到以芽孢杆菌为主的细菌菌株226个。以水稻、小麦和棉花等6种农作物上主要病原菌(8种真菌,4种细菌)为指示菌对这226个菌株进行平板双培养法抑菌测定,分别筛选到至少对1种病原真菌或细菌有颉颃活性的菌株95个和78个。对进一步研制防治不同作物病害的生物制剂建立了一个颉颃菌资源库。

玉屏风散颉颃镉致鸡肝脏氧化损伤作用的研究

为了研究玉屏风散对镉对鸡肝脏氧化损伤的颉颃作用。将150只30日AA公鸡随机分为3组:对照组(A:饲喂基础日粮)、加镉组(B:组饲喂基础日粮+CdCl2150 mg/kg)和玉屏风散加镉组(C:饲喂基础日粮+CdCl2150 mg/kg的基础上每天灌服玉屏风散1 mL),所有动物自由采食,染毒后15、30、45、60天时分别从以上3组中取10只鸡剖杀,用于肝脏组织相关指标的检测。结果表明:随着镉作用时间的延长,试验组的GSH-Px、SOD的活性降低,MDA生成量增加;试验组与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),C组各项指标数据介于A组和B组之间。因此,玉屏风散可减轻镉中毒对机体抗氧化功能的影响,对镉中毒有颉颃作用。

磷锌颉颃作用机制研究

以水培小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）、玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）为试材，研究了植株及细胞中磷锌间颉颃作用的发生机制。结果表明，高磷抑制了小麦对锌的吸收及向上运转；提高磷水平增强了锌在玉米叶片细胞壁上的固定，从而导致了地上部锌失活。

兰花炭疽病颉颃细菌Z-62的发酵条件优化

通过单因素试验和正交试验确定了兰花炭疽病颉颃细菌的最佳发酵条件为:葡萄糖3%、大豆蛋白胨3%、FeSO4·7H2O0.05%、KCl0.05%、种龄20h、培养基初始pH值为6.0、250mL三角瓶装液量30mL、接种量4%、发酵时间60h。在该条件下培养得到的发酵液抑菌圈直径可达26.28mm,抑菌活性提高了29.4%。

颉颃放线菌XA-1菌株发酵条件研究

对颉颃放线菌XA-1菌株的发酵条件进行初步研究,确定了其最佳发酵培养基组成及培养条件。当马铃薯淀粉为碳源、黄豆饼粉和蛋白胨混合为氮源时,发酵滤液的抑菌作用最强。选用优化的培养基组成,菌株XA-1的最佳发酵条件为26℃,120 r/min,培养基初始pH值为4.5,摇瓶装液量90 ml/250 ml,最佳发酵时间为88 h,培养96 h的种子液以10%的接种量转接有利于提高抑菌活性。经发酵培养基和发酵条件的优化,发酵液抑菌圈达到了34 mm以上,比原始发酵液抑菌圈增大了10 mm,获得了较多的抗生素产量。

大白菜软腐病颉颃菌筛选及其发酵条件研究

从大白菜软腐病的原位土壤中分离得到24株细菌,通过平板对峙法筛选得到2株具有明显抑制作用的菌株,分别命名为BRJ1和BRJ2。通过发酵条件试验表明:两种颉颃菌均为好氧菌;其中菌株BRJ1对数生长期为0～8h,在中性偏酸的环境下生长良好,适宜生长温度为30～35℃;菌株BRJ2对数生长期为4～13h,在pH值为4.5～9.5的条件下生长良好,最适生长温度为32℃。共同发酵时,应在中性环境,温度控制在32℃左右,定期翻堆以提供充足的氧气。

枯草芽孢杆菌对大肠杆菌生物颉颃作用的研究

选择6株枯草芽孢杆菌,研究其对致病性大肠杆菌的生物颉颃作用。结果表明,不同枯草芽孢杆菌及其不同的选育结果所表现出的生物颉颃效果存在差异。枯草芽孢杆菌DR0389经同源筛分和定向选育后,对大肠杆菌O8∶K99与O18∶K88均呈现明显的抑制作用。