大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的分离培养及鉴定

探讨大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞体外分离及培养的方法。采用0.125%胰酶多次消化法收集新生SD大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞。高内涵细胞成像法检测细胞增殖能力,免疫荧光、Western blot和RT-PCR法检测波形蛋白表达水平,CD90标记成纤维细胞、鉴定细胞纯度。最新消化分离得到的细胞呈亮球形,轮廓清晰,单个散在或聚集成团分布,90 min后即有大量细胞贴壁,其中部分细胞已开始伸展。5~6 d可形成单层细胞,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。波形蛋白表达呈强阳性。传代3代的细胞培养体系中成纤维细胞约占87%。含5%FBS的DMEM/F12培养基培养24 h即可检测到细胞的大量增殖。胰酶消化法是获得大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的有效方法。