TGF-β_1在db/bd自发性糖尿病小鼠颌下腺表达的研究

目的探讨db/db自发性糖尿病小鼠颌下腺转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达与其形态学改变的关系。方法引进日本表型正常隐性基因小鼠,近亲交配,其纯合子后代,即为db/db(单基因遗传自然发病型)型糖尿病小鼠。取3、4、6、8、10月龄db/db糖尿病小鼠颌下腺(实验组)及相应月龄的db/+m正常小鼠颌下腺(对照组)。每组五只,HE及SP免疫组化染色后行图像分析,光镜观察颌下腺的病理形态学改变,统计TGF-β1阳性表达的细胞数。结果随着糖尿病发展,颌下腺实质组织萎缩,细胞缩小,形态不规则,排列不整齐,间质纤维增生,TGF-β1阳性细胞数逐渐增加,呈上升趋势,且明显高于同龄对照组p<0.01。结论db/db糖尿病使小鼠颌下腺TGF-β1表达增强,同时有间质纤维增强,TGF-β1表达上调可能与糖尿病间质纤维增生密切相关。

葶苈子对压力负荷大鼠心肌CYP11B1、CYP11B2及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:研究葶苈子水提液对压力负荷大鼠心肌CYP11B1、CYP11B2及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法:腹主动脉不完全结扎法(AAB)制作大鼠心肌肥厚、心室重构模型。药物干预30d后,称重法测定心脏指数(HW/BW)、左室重量指数(LVW/BW),Real-Time PCR反应技术,以Rat 18S为内参照,测定心肌CYP11B1,CYP11B2,TGF-β1 mRNA的表达水平。结果:模型组大鼠心脏指数增高,醛固酮合成基因和转化生长因子β1表达增强。葶苈子水提液能改善心肌肥厚指数,降低大鼠心肌醛固酮合成基因CYP11B1、CYP11B2及TGF-β1的mRNA表达水平。结论:葶苈子水提液可能通过抑制心肌醛固酮合成相关基因CYP11B1、CYP11B2 mRNA表达水平,降低转化生长因子β1的合成而抑制心室重构的发生。

缬沙坦下调糖尿病大鼠肾皮质葡萄糖转运蛋白1和TGFβ_1 mRNA的表达

观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏皮质葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1 )和转化生长因子 β1 (TGFβ1 )mRNA表达的影响 ,以探讨其保护肾功能的机理。用链尿佐菌素腹腔注射法复制糖尿病大鼠模型 ,动物随机分为糖尿病组、缬沙坦治疗组及对照组 ;分别于实验第 4、6周末测定大鼠平均动脉压、血糖、血肌酐、尿肌酐、肾重 体重、尿白蛋白排泄率及平均肾小球面积和平均肾小球体积。用逆转录 PCR(RT PCR)法对肾皮质GLUT1及TGFβ1 mRNA表达进行半定量分析。在第 4周及第 6周末 ,各组大鼠平均动脉压无差异 ,治疗组肌酐清除率、肾重 体重、尿白蛋白排泄率及肾小球平均面积和平均体积均显著低于同时期的糖尿病组。糖尿病组GLUT1 及TGFβ1mRNA表达较正常组显著增高 ,治疗组二者表达均有所下降。缬沙坦能够下调糖尿病大鼠肾皮质GLUT1 及TGFβ1mRNA表达 ,具有保护肾脏的作用。

尿毒清颗粒对腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭大鼠肾皮质TGF-β_1及其下游基因mRNA表达的影响

为了研究尿毒清颗粒的作用机制,以灌胃腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭Wistar大鼠为实验材料,用SYBR Green I实时荧光定量PCR(Real-time Fluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)技术检测了大鼠肾皮质转化生长因子-β1(Transfer Growth Factor-β1,TGF-β1)及其下游基因mRNA的表达变化,利用免疫组织化学(Immuno Histo Chemistry,IHC)技术检测了CRF大鼠肾皮质TGF-β1蛋白表达的变化.结果发现,尿毒清颗粒可以降低慢性肾功能衰竭大鼠肾皮质TGF-β1及其下游基因mRNA的表达,能够降低大鼠肾皮质TGF-β1蛋白的表达,P<0.05,差异具有显著性.尿毒清颗粒可以通过TGF-β1通路起到缓解慢性肾功能衰竭大鼠病理变化的作用,为尿毒清颗粒治疗慢性肾功能衰竭药理机制研究提供了实验基础.

pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与

人睾丸发生过程中TGF β_1表达的研究

研究 TGFβ1 (转化生长因子β1 )在人胚胎睾丸发生过程中的表达。收集 30例 12 - 32周龄胎儿睾丸标本 ,免疫组织化学 ABC法染色 ,以正常羊血清代替一抗为阴性对照 ,TGFβ1 抗血清的工作浓度为 1:10 0 ,光镜观察。结果显示 TGFβ1 在人胚胎睾丸间质细胞呈阳性表达 ,曲细精管内精原细胞、支持细胞、管周肌样细胞未见阳性表达。TGFβ1 在 12周龄睾丸组织未见阳性表达 ,16周～ 32周均有阳性表达 ,在 16周时是表达的高峰 ,此后呈逐渐下降趋势 (P<0 .0 1)。由此结果表明TGFβ1

人TGFβ_1cDNA高表达重组质粒的构建

目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1，构建人TGFβ；cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA，经RT－PCR得到TGFβ；cDNA基因，并克隆到表达质粒pBLMVL2中，构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2－TGFβ；，使其在大肠杆菌中进行温敏诱导表达。结果RT－PCR得到的TGFβcDNA经DNA序列分析与文献报道一致，pBLMVL2－TGFβ1在大肠杆菌中表达产物人重组TGFβ1经还原型SDS－PAGE电泳，呈一条蛋白条带，分子量12．5kd，表达产物约占全菌蛋白20％。结论构建的重组质粒pBLMVL2－TGFβ1能高表达人重组TGFβ1。

实验性肝纤维化大鼠TGF-β_1、Smad3、Smad7、CTGF的表达及其意义

目的 :研究四氯化碳 ( CCl4 )诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad3、Smad7和结缔组织生长因子 ( CTGF)的表达及定位。方法 :将 2 4只大鼠随机分为正常对照组与模型组 ,模型组大鼠予以 40 %四氯化碳皮下注射 8周后处死。免疫组化技术检测 TGF-β1、Smad3、Smad7和 CTGF在肝脏的表达及细胞内的定位 ,放射免疫方法检测透明质酸 ,并进行肝组织病理检查。结果 :与正常组大鼠比较 ,模型组大鼠肝内 TGF-β1、Smad3、CTGF表达增加 ,而 Smad7的表达降低。 TGF-β1、Smad3及 CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7主要在肝细胞浆表达 ;模型组大鼠血清 HA及肝组织Van Giseon染色、HE染色和电镜检查均支持肝纤维化改变。结论 :肝内 TGF- β1、Smad3和CTGF表达增强、Smad7表达减弱 ,提示 TGF- β1轴、CTGF参与了肝纤维的发生发展 。

人脑胶质瘤免疫抑制因子TGFβ_2及TGFβ_1的基因表达

目的 研究人脑胶质瘤主要免疫抑制因子转化生长因子TGFβ2 及TGFβ1的基因表达与其胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用Northern杂交、免疫组化和Western杂交法检测了 5 0例胶质瘤、3例恶性胶质瘤体外细胞系和 8例正常脑组织TGFβ2 的表达水平。同时检测其同型异构体TGFβ1的表达水平。结果 正常脑组织几无TGFβ2 和TGFβ1表达 ,而胶质瘤均表达 2 .8和 /或 5 .1kb的TGFβ2 mRNA片段和约 2 5 0 0 0u及 30 0 0 0u的蛋白 ;TGFβ2 和TGFβ1表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高。结论 TGFβ2 和TGFβ1表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关 ,TGFβ2 和TGFβ1可作为恶性胶质瘤免疫基因治疗的候选基因。

移植肾内TGF-β_1表达与慢性移植物肾病的关系

为探讨转移生长因子 (TGF β1)与慢性移植物肾病 (CAN)的关系 ,该研究对 138例肾功能正常的肾移植受者术后检测尿TGF β1浓度 ,并挑选出浓度最高和最低各 2 0例构成组Ⅰ、组Ⅱ ,比较两组患者肾穿剌组织中TGF β1(TGF β1mRNA和TGF β1蛋白 )的表达量、3年后CAN的发生率 ,并检测CAN者肾组织中TGF β1的表达量。结果显示组ⅠTGF β1的表达量和 3年后CAN的发生率均明显大于组Ⅱ ,CAN者肾组织中TGF β1的表达量明显大于肾功正常时。TGF β1与慢性移植物肾病的发生有着密切的关联 ,肾移植后检测尿TGF

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P <0．01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P<0．01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

pcDU6质粒载体介导的表达TGF-β_1 sh RNA的质粒构建

【目的】用 pcDU6质粒载体构建介导转化生长因子 β1(TGF β1)短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)表达的质粒。【方法】针对TGF β1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(- )载体 (命名为 pcDU6 ) ,两对DNA双链通过BamHⅠ酶切位点连接后形成中间由 6个碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGF β1短发夹RNA的产生质粒。【结果】经酶切、连接后构建成的质粒称之为 pcDU6 A1 A2和 pcDU6 B1 B2 ,经酶切与测序证实构建成功 ,无任何碱基突变。【结论】成功构建了能表达TGF β1shRNA的质粒载体 pcDU6 A1 A2和pcDU6 B1 B2 ,可能为临床防治长期腹膜透析病人的腹膜纤维化提供高效的方法。

不同治疗方法对动物慢性细菌性前列腺炎前列腺中TGF-β_1胶原Ⅰ和ⅢmRNA表达的影响

目的 :通过动物试验以口服氧氟沙星、口服氧氟沙星和α1 受体阻滞剂特拉唑嗪及前列腺内注射氧氟沙星和地塞米松 3种治疗方法治疗慢性细菌性前列腺炎 (CBP) ,判定前列腺穿刺注射药物治疗方法对局部组织胶原代谢的影响 ,探讨局部穿刺后前列腺是否有瘢痕化倾向。方法 :①选用健康雄性大白兔 ,依文献方法 ,通过后尿道反复灌注大肠埃希菌制备CBP动物模型 ;②分别予CBP组动物行药物治疗 ,随机分为 1个对照组和 3个治疗组 ,治疗组分别予口服氧氟沙星 ,口服氧氟沙星和特拉唑嗪 ,在B超引导下行前列腺局部穿刺注射氧氟沙星和地塞米松 ,同时以注射生理盐水作为注射对照组 ;③应用半定量RT PCR方法判定经不同治疗方法前列腺组织中TGF β1 、原胶原I、原胶原Ⅲ的mRNA量的变化 ,推断不同治疗方法对胶原代谢的影响 ,判定前列腺穿刺注药是否有致前列腺瘢痕化的危险。结果 :半定量RT PCR分析结果显示 3种治疗方法均可抑制CBP前列腺组织中TGF β1 、原胶原ⅠmRNA的表达 ,对原胶原ⅢmRNA的影响差异无显著性意义 ,而穿刺注药治疗并未显示有明显致瘢痕的副作用。结论

TGF-β_1质粒DNA前房注射在角膜内皮细胞表达的实验研究

目的 探索转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF β1)真核表达质粒pMAMTGF β1前房注射后在角膜内皮细胞的表达及其对局部抗角膜移植排斥反应基因治疗的可能性。方法 利用脂质体介导方法 ,将其直接注射至家兔前房内 ,2d后分别行角膜组织石蜡切片和角膜内皮撕片 ,通过SABC免疫组化方法检测角膜内皮细胞质粒DNA表达产物TGF β1的表达情况。结果 石蜡切片和内皮撕片均可见角膜内皮细胞内质粒DNA表达产物TGF β1的表达为阳性。结论 通过前房注射法 ,外源基因可以转染至角膜内皮 ,并在角膜内皮细胞得到有效表达 ,为进一步研究TGF β1参与角膜局部免疫耐受的诱导和维持奠定了基础。

螺内酯对大鼠肝纤维化及TGFβ_1 TIMP-1表达的作用

目的:探讨醛固酮受体拮抗剂螺内酯对TGFβ1和TIMP-1表达的作用,评价螺内酯的抗纤维化作用. 方法:♂SD大鼠34只,随机分为3组.肝硬化模型组: 400 mL/L CCl4油3 mL/kg,sc,2次/wk;螺内酯组:CCl4 油注射的同时予螺内酯20 mg/(kg/d)灌胃;正常对照组:正常饮食、饮水.光镜下动态观察组织学改变,RT—PCR检测肝组织中TGFβ1和TIMP-1的表达. 结果:10 wk时,螺内酯组肝纤维化级别显著低于肝纤维化模型组(P<0.05);但在13 wk,螺内酯组与肝纤维化模型组相比无显著性差异.肝纤维化时TGFβ1和TIMP-1 mRNA水平与正常组相比显著升高(P<0.05).在10 wk时, 螺内酯组TGFβ1 TIMP-1 mRNA水平与肝纤维化模型组相比有下降的趋势,但无显著性差异. 结论:TGFβ1和TIMP-1在肝纤维化时表达显著增加,螺内酯对肝纤维化有一定程度的抑制作用,但对TGFβ1和TIMP-1 mRNA的表达作用不明显.

实验性大鼠腮腺细胞缺血再灌注TGF-β_1的表达

目的 :探讨TGF - β1(Transforminggrowthfacto -r - β1—转化生长因子 - β1)在实验性大鼠腮腺导管细胞、腺泡细胞的表达区别与形态学改变的关系。材料和方法 :采用颈总动脉结扎法建立腮腺缺血再灌注模型 ,用光镜、免疫组化的方法 ,观察腮腺导管细胞、腺泡细胞形态学及TGF - β1的表达变化。结果 :实验组在缺血再灌注早期 ,开始出现形态学改变 ,中期明显 ,后期渐修复。在缺血和再灌注时间均相同时 ,TGF - β1在导管细胞较腺泡细胞表达高 ,前者增殖抑制明显。结论 :①实验性腮腺缺血再灌注大鼠腮腺导管细胞有形态学改变。②TGF - β1在导管细胞表达比腺泡细胞高 。

人胃癌组织中TGFβ_1的表达与胃癌血管形成的研究

目的 研究TGFβ1在胃癌组织中表达 ,探讨其在胃癌血管形成中的重要作用。方法 用SP免疫组化法 ,检测 45例胃癌手术切除标本中胃癌TGFβ1蛋白的表达 ,用抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞。结果 TGFβ1阳性表达产物主要见于细胞的胞质内。胃癌组织中TGFβ1阳性表达率 (6 0 0 %)和强阳性表达率 (2 2 2 2 %)显著高于癌周组织 (2 6 6 7%) (8 89%) (P <0 .0 5 )。胃癌组织和癌周组织中血管内皮细胞质呈棕黄色染色。胃癌组织微血管密度 (MVD)值 (5 8 13± 19 99)显著高于癌周组织 (2 4 0 2± 10 2 8) (P <0 0 5 )。TGFβ1表达阳性MVD值 (6 0 94± 16 91)显著高于表达阴性MVD值 (40 2 6± 18 83) (P <0 0 5 )。结论 TGFβ1在胃癌组织中高水平表达 ,它可能参与胃癌的血管形成。

防疤烧伤膏对大鼠创面愈合过程中TGFβ_1基因表达的影响

目的:观察防疤烧伤膏对大鼠伤口愈合过程中 TGFβ_1,mRNA 表达及蛋白含量的影响。方法:采用大鼠皮肤切除致伤模型,创面外用防疤烧伤膏,并采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth,bFGF)和空白处理作为阳性和阴性对照。伤后3、7、14d 取创面组织,经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片后采用免疫组化和原位杂交的方法检测伤口组织中 TGFβ_1mRNA 和其蛋白含量的变化。结果:与空白对照组相比,防疤烧伤膏处理后的创面组织细胞内 TGFβ_1的 mRNA 和蛋白含量明显减少。结论:防疤烧伤膏在促进创面愈合的同时,能通过抑制创面组织细胞中 TGFβ_1的基因表达和蛋白含量的升高,因此,可能使伤口愈合后的瘢痕形成减少。

大鼠脑缺血/再灌注后TGF-β_1的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后转移生长因子β1(TGF-β1)在脑组织中的表达。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,通过免疫组化法检测TGF-β1的表达。结果TGF-β1在缺血再灌注3h开始表达,24h达高峰,持续至72h,72h后逐渐减弱。结论脑缺血后神经元的损伤修复与TGF-β1的表达密切相关,提示TGF-β1参与了神经元损伤的修复过程。