颗粒增强免疫透射比浊测定血中Cyst C全自动分析法的建立与评价

目的:建立颗粒增强免疫透射比浊测定血中胱蛋白酶抑制剂C(Cyst C)全自动分析,评价该法常规用于检测血中胱蛋白酶抑制剂C的可行性。方法:将含有Cyst C血样本与乳胶颗粒增强的Cyst C多克隆兔抗体按一定体积比混合,在一定量的兔免疫球蛋白及表面活性剂存在条件下,抗原、抗体结合反应在一定温度、时间内产生一定大小的颗粒,许多颗粒在反应液体中形成一定的浊度,利用Olympus AU2700全自动生化分析仪透射比浊测定,并对方法的不精密度、准确度、干扰试验及与Dade Behring BN ProSpec免疫散射比浊测定方法比较等进行评价。结果:Cyst C浓度为1.03mg/L、5.67mg/L样本的批内不精密度CV分别为4.8%、1.9%。向Cyst C浓度为0.79mg/L、1.18mg/L、1.46mg/L、2.46mg/L样本中加入1.65mg/L的标准液测定回收率分别为100%、95%、85%、87%,平均回收率为92%。样本中的类风湿因子、胆红素、血红蛋白、三酰甘油等干扰物浓度分别达975U/ml、400μmol/L、5g/L、6.7mmol/L时对检测无显著性影响。Cyst C浓度在0.41mg/L^6.60mg/L范围内检测线性良好。血清、肝素抗凝血浆及EDTA抗凝血浆样本测得的Cyst C结果未发现显著性差异(F=0.065,P=0.938)。与Dade Behring BN ProSpec免疫散射比浊测定方法比较有良好的相关性,Y=0.98x-0.054,r=0.997,P<0.01,但两者存在非常显著性差异(P<0.01),本法结果较Dade Behring BN ProSpec免疫散射仪测定结果略低,两种方法的平均偏差为-0.0678mg/L。结论:建立的颗粒增强免疫透射比浊法测定血CystC重复性好、准确度高。血清、肝素抗凝血浆及EDTA抗凝血浆均可用于分析。测定不受类风湿因子(≥975U/ml),胆红素(≥400μmol/L),血红蛋白(≥5g/L)及三酰甘油(≥6.7mmol/L)的干扰。与Dade Behring BNProSpec免疫散射比浊测定方法测定结果比较有良好的相关性,适用于在全自动生化分析仪上作常规检测。

颗粒增强免疫透射比浊法测定甲胎蛋白方法学评价

目的对定量测定甲胎蛋白(AFP)的颗粒增强免疫透射比浊法(PETIA)进行方法学评价。方法应用OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪定量测定AFP,探讨该检测方法的精密度、试剂开瓶稳定性、检测下限、敏感性、线性范围、干扰和准确性;并与SIEMENS CENTAUR电化学发光法(ECLIA)定量测定临床新鲜血清AFP的结果进行相关性分析,同时对其参考区间进行验证。结果 29.95和132.25 ng/mL的新鲜血清测定的批内变异系数(CV)分别为1.67%和1.52%;天间CV分别为7.17%和7.84%;测定下限和敏感性分别为0.52和0.53 ng/mL;5.4～256 ng/mL范围内其测定的线性相关系数(r2)达0.999 4,回归方程为Y=1.014X+1.063 3;高、低水平浓度的定值质控血清测定的相对偏差分别为5.96%和8.40%,远小于卫生部临床检验中心AFP室间质评能力比对试验(PT)评价标准的"靶值±20%";107例临床病例测定结果与SIEMENS化学发光分析仪测定的结果相关性良好,YECLIA=1.138 7XPETIA+2.835 3(r2=0.992 1);一定程度的溶血、黄疸及脂血对该测定无明显干扰;20名健康体检者AFP测定结果均处于厂家推荐的参考区间内。结论 PETIA测定AFP可作为一种简便易行、快捷价廉、准确可靠的临床常规检测方法,特别适合于健康体检时大规模筛查。

颗粒增强免疫透射比浊法检测血清高半胱氨酸

目的建立测定血清中高半胱氨酸(Hcy)的颗粒增强免疫透射比浊法。方法血清Hcy经S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHase)与腺苷转化为S-腺苷高半胱氨酸(SAH),用抗SAH抗体与转化后SAH以及胶乳颗粒结合的SAH先后反应,根据生成免疫复合物的变化值计算出SAH浓度;依据美国CLSI标准和指南性文件,对方法进行评价。结果建立的方法检测范围为3.0～53.0μmol/L,最低检测限0.6μmol/L;批内不精密度1.00%～2.09%;日间不精密度4.69%～5.44%;方法回收率为97.3%～105.6%;Vit-C≤1 000 mg/L、胆红素≤400μmol/L、乳糜≤0.8%、Hb≤6.0 g/L对测定结果无显著性干扰;参考值为<15.5μmol/L;与高效液相色谱(HPLC)法相关性良好(r=0.994,P<0.01),测定结果无显著性差异。结论建立的方法可用于临床实验室检测血清Hcy浓度。

颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的性能评价

目的对颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白进行性能评价。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件对颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的精密度、准确度、参考范围进行验证。结果该方法的批内变异系数是0.70%~0.78%,批间变异系数是0.50%~0.43%,小于厂商提供的1.2%的变异系数。准确度评价显示的偏倚均小于要求范围,评价通过。参考区间符合厂商说明。结论颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的基本性能均符合厂商声明。

胶乳增强免疫比浊共振散射法测定血清C反应蛋白

目的建立胶乳增强免疫比浊共振散射测定血清中C反应蛋白的新方法。方法 C反应蛋白抗体胶乳与C反应蛋白发生免疫反应导致510nm处产生共振散射峰,利用其共振散射强度测定血清中C反应蛋白。结果 C反应蛋白线性范围为0.02～1.40μg/ml,回归方程为ΔIRs=643.4ρ+21.7,相关系数为0.998 9,检出限为0.004 1μg/ml。结论用于血清中C反应蛋白测定,仪器简单,操作简便,选择性好,结果满意。

7种半胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测系统的分析性能评价

目的评估7种半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)检测系统的分析性能。方法应用美国临床实验室标准化协会(CLSI)系列文件评估5个颗粒增强免疫透射比浊(PETIA)检测系统和1个均相溶胶颗粒免疫法(SPIA)检测系统的精密度、正确度、空白限(LoB)、抗干扰性以及与SIEMENS BNⅡ颗粒增强免疫散射比浊(PENIA)检测系统(简称BNⅡ系统)的相关性和偏差。结果 6个检测系统(以A^F表示)和BNⅡ系统在Cys C浓度为0.8~5.0 mg/L时的总批内变异系数(CV)均<3.75%,总批间CV除E系统外均<5%;正确度验证显示A^E系统和BNⅡ系统测定ERM-DA471的绝对偏倚分别为0.00、0.00、1.01、-0.01、-0.50和-0.35 mg/L,相对偏倚分别为0%、0%、18.43%、-0.18%、-9.12%和-6.39%;测定CAP室间质评物显示仅D系统和BNⅡ系统较为理想。A^F系统及BNⅡ系统的LoB分别为0.00、0.00、0.31、0.01、0.10、0.06和<0.05 mg/L。干扰分析显示Hb≤13 g/L、TG≤28 mmol/L时,对A、B系统及BNⅡ系统无明显影响(干扰<±10%),其他系统均有不同程度干扰。相关分析显示A^F系统与BNⅡ系统相关性较好[相关系数(r)均>0.975,P<0.01]。偏差分析显示,A^F系统与BNⅡ系统的平均偏差分别为-0.02、-0.10、-0.31、0.05、0.04、0.36 mg/L。结论 Cys C各检测系统测定有证参考物质ERM-DA471的最大偏倚可达到1 mg/L,最大相对偏倚为18.43%;其中PENIA在测定ERM-DA471和CAP室间质评物时结果低于PETIA;部分检测系统分析性能存在不足。

初步建立武汉地区健康成人血浆Cystatin C生物参考区间

目的通过比较不同性别年龄人群血浆Cystatin C值的差异,尝试建立本地正常人群血浆Cystatin C的生物参考区间。方法研究对象为武汉地区480名成人健康体检者,按不同年龄性别分为四个亚组,18-50岁女性组,50岁以上女性组,18-50岁男性组,50岁以上男性组,每组各120例。采用颗粒增强散射免疫比浊法测定血浆Cystatin C含量。检测结果用SPSS软件进行数据分析。结果50岁以下成人:Cystatin C生物参考区间:0.55-0.93 mg/L,50岁以上人群:Cystatin C生物参考区间:0.88-1.19 mg/L。结论不同性别组Cystatin C生物参考区间差异无统计学意义,P>0.05,但不同年龄组Cystatin C生物参考区间差异有统计学意义,P<0.05。

兰州市健康人血清胱抑素C浓度参考范围的调查

目的调查兰州市健康人血清胱抑素C(CysC)浓度的参考范围。方法应用颗粒增强免疫透射比浊法测定115例健康受检者血清胱抑素C浓度;用SPSS11.0软件对检测结果进行统计学处理。结果115例健康受检者的血清胱抑素C浓度与性别无关。受检者的血清胱抑素C浓度1～50岁年龄段血清胱抑素C的浓度水平一致,95%的可信区间为0.790～1.250mg/L;大于50岁年龄段95%的可信区间为0.660～1.760mg/L。结论兰州市1～50岁血清胱抑素C的参考范围是0.790～1.250mg/L,大于50岁年龄段的参考范围是0.660～1.760mg/L,与文献报道基本一致。

沧州地区PENIA法测定血清胱抑素C参考区间调查

目的探讨血清胱抑素C(Cys-C)的测定方法及健康人血清Cys-C的参考区间。方法采用颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA),对436例健康人进行血清Cys-C水平测定。结果健康人血清Cys-C水平为0.876mg/L,标准差0.101;批内变异系数1.21%,批间变异系数3.60%,回收率99.8%。血清Cys-C水平与年龄、性别无相关性。结论沧州地区健康人群血清Cys-C的参考区间为0.614～1.218mg/L,该法准确、灵敏、稳定、简便。

两种测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C方法的结果比较

目的了解颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)和颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)结果的相关性,为不同的方法学检测血清Cys C是否具有一致性提供参考依据。方法按照美国临床实验标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件进行评估,将测得的数据进行相关回归分析,计算2种方法间的偏倚。结果PENIA和PETIA测定Cys C的相关方程为YPETIA=1.352XPEN IA-0.009,相关系数(r)=0.976。结论这2种方法测定血清Cys C有良好的相关性。当实验室内同一项目存在2套以上分析系统检测时,应对其进行对比分析和偏倚评估,为室间评价结果提供参考依据。

PETIA法检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C方法学评价

目的对颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）进行方法学评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP5-A、EP6-A、EP9-A及EP7-P文件对PETIA测定血清Cys C的精密度、可报告范围、方法学比较及干扰实验进行评价和比较。结果PETIA的低水平样本批内变异系数（CV）为1.34%、批间CV为2.19%、日间CV为1.82%、总CV为2.56%;高水平样本批内CV为1.15%、批间CV为1.40%、日间CV为2.23%、总CV为2.58%。可报告范围为0.44-4.46 mg/L。PETIA与颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）呈显著相关[决定系数（r^2）=0.997 2,P〈0.01]。血红蛋白（Hb）〈5 g/L、三酰甘油（TG）〈12 mmol/L、总胆红素（TB il）〈150μmol/L时,PETIA测定Cys C高、低水平样本的干扰值均在干扰限度值（1.96s）范围内。结论PENIA具有良好的重复性,与PENIA有良好的相关性,抗干扰能力较强。因此PETIA是测定血清Cys C较理想的方法,可应用于临床检测。

两种方法检测超敏C反应蛋白诊断2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度的价值

目的探讨两种方法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)对2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉内中膜厚度(IMT)增加的诊断价值。方法选择2013年4月至2015年4月我院收治的84例T2DM患者,以彩色多普勒超声诊断仪检查患者颈动脉的结果为标准,按IMT<0.9 mm和IMT≥0.9 mm分成颈动脉正常组40例和颈动脉增厚组44例。同期另选42例健康查体者为正常对照组,分别采用乳胶增强免疫散射比浊法和颗粒增强免疫透射比浊法检测所有受检者的全血hs-CRP和血清hs-CRP的水平,用受试者工作特征(ROC)曲线评价两种方法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能。另用总胆固醇(TC)联合全血hs-CRP检测评价对T2DM患者IMT增加的诊断效能。结果两种方法显示IMT增厚组的全血[(4.78±1.04)mg/L]和血清hs-CRP水平[(4.43±0.95)mg/L]均高于IMT正常组[(1.85±0.78)mg/L和(1.70±0.89)mg/L]和正常对照组[(0.98±0.67)mg/L和(0.87±0.59)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。用ROC曲线分析得全血hs-CRP的诊断灵敏度(76.2%)较高,而特异性(47.1%)较低,曲线下面积为0.612,而颗粒增强免疫透射比浊法检测血清hs-CRP的诊断灵敏度(69.0%)较低,特异性(52.9%)较高,曲线下面积为0.596;全血hs-CRP联合总胆固醇(TC)诊断的灵敏度(83.3%)和特异性(64.7%),曲线下面积为0.732,均高于hs-CRP单项指标诊断效能。结论 T2DM患者IMT增加时,血液中hs-CRP水平升高;乳胶增强免疫散射比浊法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能优于颗粒增强免疫透射比浊法;全血hs-CRP联合TC检测能提高对T2DM患者IMT增加的诊断灵敏度和特异性。

Cystatin C的检测及临床应用

Cystatin C(Cys C)是近年来研究发现的一种特异性高、准确性好、较肌酐清除率更为敏感的评价肾小球滤过率的新指标．Cys C能自由通过肾小球滤过膜，在近曲小管几乎被完全重吸收，然后完全分解代谢，不再重新回到血液循环中去，同时肾小管也不分泌，所以在血液中的浓度较为恒定，成为反映肾小球滤过率的灵敏指标．常用颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)和颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)检测Cys C，操作简单、速度快，在儿科疾病、糖尿病、心血管疾病、肿瘤化疗及肾移植后评估肾小球滤过率等方面具有很高的临床价值．

血清胱抑素C在评价系统性红斑狼疮患者肾功能损害中的作用

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清胱抑素C浓度对其肾功能损害的诊断价值。方法:对63例SLE患者采用乳胶颗粒增强透射免疫比浊法测定血清CysC浓度,同时进行尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)和24 h尿蛋白定量(UPro)测定,并对SLE组和正常对照组进行统计学分析与比较。结果:SLE组血清CysC浓度1.4984±1.5956,正常对照组血清CysC浓度0.7267±0.1617,P<0.01;SLE患者进行CysC与BUN、SCr、UPro相关性比较,相关系数分别为0.8326、0.9568、0.5263;CysC诊断肾功能损害敏感性明显高于BUN、SCr,对于狼疮性肾功能损害患者,经过治疗,CysC含量逐渐减低。结论:SLE患者血清CysC浓度测定,有助于SLE患者早期肾功能损害的诊断,并为治疗和予后提供依据。

PETIA与PENIA测定IgE的分析灵敏度比较

血清免疫球蛋白E（immunoglobulinE，IgE）主要是用于过敏性疾病的诊断。目前临床常用的检测方法主要有颗粒增强免疫透射比浊法（parti—cleenhancedimmunoturbidimetricassay，PETIA）和免疫散射比浊法（particleenhancedimmunonephe—lometryassay，PENIA）。这2种方法是目前公认的最为理想的方法。过去人们大多认为用散射比浊法检测特定蛋白的分析灵敏度较高，而传统免疫透射比浊法的分析灵敏度较低。因此，我们分析了这2种方法检测IgE的灵敏度。