自制抗体的颗粒增强透射免疫分析法测定人血清胱抑素C的评价

目的:用自制抗体研制可在自动生化分析仪应用的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETIA)定量测定人血清胱抑素C(Cys C)的试剂盒.方法:构建人CysC的原核表达载体pET32a(+)/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫大白兔,制备Cys C抗血清;以自制的CysC抗血清包被乳胶颗粒,研制PE-TIA法定量检测血清Cys C的试剂盒,并对其分析性能进行方法学评价.结果:本法回收率为97.5%～105.0%,批内及批间CV均<5%,线性范围8.11～0.25mg/L,检测限0.2mg/L;本法与Dako法和BN-Prospect法呈正相关(P<0.0001);胆红素对高浓度Cys C测定有干扰作用,Hb和葡萄糖对本法无干扰.结论:应用自动生化分析仪的自研法性能满意.

颗粒增强免疫透射比浊测定血中Cyst C全自动分析法的建立与评价

目的:建立颗粒增强免疫透射比浊测定血中胱蛋白酶抑制剂C(Cyst C)全自动分析,评价该法常规用于检测血中胱蛋白酶抑制剂C的可行性。方法:将含有Cyst C血样本与乳胶颗粒增强的Cyst C多克隆兔抗体按一定体积比混合,在一定量的兔免疫球蛋白及表面活性剂存在条件下,抗原、抗体结合反应在一定温度、时间内产生一定大小的颗粒,许多颗粒在反应液体中形成一定的浊度,利用Olympus AU2700全自动生化分析仪透射比浊测定,并对方法的不精密度、准确度、干扰试验及与Dade Behring BN ProSpec免疫散射比浊测定方法比较等进行评价。结果:Cyst C浓度为1.03mg/L、5.67mg/L样本的批内不精密度CV分别为4.8%、1.9%。向Cyst C浓度为0.79mg/L、1.18mg/L、1.46mg/L、2.46mg/L样本中加入1.65mg/L的标准液测定回收率分别为100%、95%、85%、87%,平均回收率为92%。样本中的类风湿因子、胆红素、血红蛋白、三酰甘油等干扰物浓度分别达975U/ml、400μmol/L、5g/L、6.7mmol/L时对检测无显著性影响。Cyst C浓度在0.41mg/L^6.60mg/L范围内检测线性良好。血清、肝素抗凝血浆及EDTA抗凝血浆样本测得的Cyst C结果未发现显著性差异(F=0.065,P=0.938)。与Dade Behring BN ProSpec免疫散射比浊测定方法比较有良好的相关性,Y=0.98x-0.054,r=0.997,P<0.01,但两者存在非常显著性差异(P<0.01),本法结果较Dade Behring BN ProSpec免疫散射仪测定结果略低,两种方法的平均偏差为-0.0678mg/L。结论:建立的颗粒增强免疫透射比浊法测定血CystC重复性好、准确度高。血清、肝素抗凝血浆及EDTA抗凝血浆均可用于分析。测定不受类风湿因子(≥975U/ml),胆红素(≥400μmol/L),血红蛋白(≥5g/L)及三酰甘油(≥6.7mmol/L)的干扰。与Dade Behring BNProSpec免疫散射比浊测定方法测定结果比较有良好的相关性,适用于在全自动生化分析仪上作常规检测。

颗粒增强免疫透射比浊法测定甲胎蛋白方法学评价

目的对定量测定甲胎蛋白(AFP)的颗粒增强免疫透射比浊法(PETIA)进行方法学评价。方法应用OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪定量测定AFP,探讨该检测方法的精密度、试剂开瓶稳定性、检测下限、敏感性、线性范围、干扰和准确性;并与SIEMENS CENTAUR电化学发光法(ECLIA)定量测定临床新鲜血清AFP的结果进行相关性分析,同时对其参考区间进行验证。结果 29.95和132.25 ng/mL的新鲜血清测定的批内变异系数(CV)分别为1.67%和1.52%;天间CV分别为7.17%和7.84%;测定下限和敏感性分别为0.52和0.53 ng/mL;5.4～256 ng/mL范围内其测定的线性相关系数(r2)达0.999 4,回归方程为Y=1.014X+1.063 3;高、低水平浓度的定值质控血清测定的相对偏差分别为5.96%和8.40%,远小于卫生部临床检验中心AFP室间质评能力比对试验(PT)评价标准的"靶值±20%";107例临床病例测定结果与SIEMENS化学发光分析仪测定的结果相关性良好,YECLIA=1.138 7XPETIA+2.835 3(r2=0.992 1);一定程度的溶血、黄疸及脂血对该测定无明显干扰;20名健康体检者AFP测定结果均处于厂家推荐的参考区间内。结论 PETIA测定AFP可作为一种简便易行、快捷价廉、准确可靠的临床常规检测方法,特别适合于健康体检时大规模筛查。

胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测CEA和AFP的结果对比

目的比较胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物的结果。方法选取的210名受试者为2015年7月至2020年4月收治的结直肠癌患者(n=124)和同期体检的健康人群(n=86)。受试者均清晨采集全血标本,分别应用胶乳增强透射免疫比浊法、电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)水平,比较两种检测方法的检测结果,并对结果进行Pearson相关性分析和肿瘤诊断的ROC曲线下面积分析。结果两种方法的检测值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson直线相关性分析显示两种方法的检测值呈正相关(r CEA=0.733、r AFP=0.669,P<0.01)。ROC曲线分析显示,胶乳增强透射免疫比浊法检测CEA、AFP的结果在诊断肿瘤中的AUC分别为0.674、0.655,电化学发光免疫分析法检测CEA、AFP的结果在诊断肿瘤中的AUC分别为0.606、0.639,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论胶乳增强透射免疫比浊法、电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物的结果基本一致,相关性良好,均有助于提升临床肿瘤疾病的诊断准确性。

颗粒增强免疫透射比浊法检测血清高半胱氨酸

目的建立测定血清中高半胱氨酸(Hcy)的颗粒增强免疫透射比浊法。方法血清Hcy经S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHase)与腺苷转化为S-腺苷高半胱氨酸(SAH),用抗SAH抗体与转化后SAH以及胶乳颗粒结合的SAH先后反应,根据生成免疫复合物的变化值计算出SAH浓度;依据美国CLSI标准和指南性文件,对方法进行评价。结果建立的方法检测范围为3.0～53.0μmol/L,最低检测限0.6μmol/L;批内不精密度1.00%～2.09%;日间不精密度4.69%～5.44%;方法回收率为97.3%～105.6%;Vit-C≤1 000 mg/L、胆红素≤400μmol/L、乳糜≤0.8%、Hb≤6.0 g/L对测定结果无显著性干扰;参考值为<15.5μmol/L;与高效液相色谱(HPLC)法相关性良好(r=0.994,P<0.01),测定结果无显著性差异。结论建立的方法可用于临床实验室检测血清Hcy浓度。

颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的性能评价

目的对颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白进行性能评价。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件对颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的精密度、准确度、参考范围进行验证。结果该方法的批内变异系数是0.70%~0.78%,批间变异系数是0.50%~0.43%,小于厂商提供的1.2%的变异系数。准确度评价显示的偏倚均小于要求范围,评价通过。参考区间符合厂商说明。结论颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的基本性能均符合厂商声明。

胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测癌胚抗原结果比对

目的探讨胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原的结果差异性。方法随机抽取门诊体检标本204例,用胶乳增强透射免疫比浊法和电化学发光免疫分析法同时检测血清中癌胚抗原的浓度,比较两者间差异及相关性。结果两方法学检测结果具有高度相似性,Sprerman相关性检验,相关系数为0.998。结论胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测值的相关性良好,胶乳增强透射免疫比浊法值得在临床上推广使用。但建议各地区基层医院实验室建立本实验室参考范围。

胶乳增强免疫透射比浊法测定全血糖化血红蛋白A_1c

目的建立胶乳增强免疫透射比浊法测定全血中的糖化血红蛋白A1c.方法用免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c,并对其重复性、准确性、线性范围、相关性实验和干扰实验加以评价.结果高、低浓度的糖化血红蛋白A1c批内CV为3.2%和4.1%;批间CV为4.6%和5.8%,总CV分别为6.7%和4.6%.线性范围为2%～15%;平均回收率分别为106.7%和102.4%.与微柱法测定结果比较具有良好的相关性(P>0.05).一定程度脂浊和黄疸对测定无明显干扰,抗坏血酸对测定无影响.结论胶乳增强免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c具有较好精密度和准确度,并且快速、灵敏和可靠,适合临床实验室常规开展.

用酶增强免疫分析法监测他克莫司血药浓度的质控评估

目的：评价酶增强免疫分析法（EMIT）监测患者全血中他克莫司浓度的质量,建立并改进他克莫司血药浓度监测的质量控制方法。方法：以标准质控为样本,进行预防性质量控制和室内质量控制研究。对2008年血药浓度监测中随行质控样本的测定值做回顾性研究并进行统计学分析,建立新的质控规则。结果：他克莫司低、中、高浓度（4.3、8.9、18.0 ng/ml）2009年质控样本的日内、日间RSD为1.8%-11.2%,平均回收率为90.5%-114.0%,符合《中华人民共和国药典》生物样品测定的要求。2008年质控样本的低、中、高浓度（3.8、7.5、15.0 ng/ml）的随行质控RSD分别为21.8%、14.2%和15.5%,适合本单位的质控规则为12S/13S/22S/41S/7tr。结论：EMIT法准确度和精密度良好,是一种较理想的他克莫司血药浓度测定方法,但影响因素较多,特别是温度对其影响较大,因此必须做好质量控制。

酶增强免疫分析法与微粒子酶联免疫吸附法检测他克莫司药物浓度的结果对比研究

目的对酶增强免疫分析法(EMIT)与微粒子酶联免疫吸附法(MEIA)进行比对实验,评估SYVAViva-E临床化学分析仪(简称SYVA Viva-E)和Abbott IMX分析仪(简称Abbott IMX)2种检测系统测定他克莫司(FK506)药物浓度的一致性。方法将Tac/Csa CONTROL质控品分别用SYVA Viva-E(EMIT)和Abbott IMX(MEIA)进行批内、批间精密度测定。FK506的靶值(检测范围):A1水平为4.3(2.1～6.5)ng/mL、A2水平为8.9(5.3～12.5)ng/mL、A3水平为18.0(14.0～22.0)ng/mL。将158份临床患者样本分为极低浓度(0.1～<2.0 ng/mL)、低浓度(2.0～<8.0 ng/mL)、中浓度(8.0～<14.0 ng/mL)、高浓度(14.0～<20.0 ng/mL)和极高浓度(20.0～24.0 ng/mL)5个组,用SYVA Viva-E和Abbott IMX平行测定FK506浓度,观察2种检测系统测定临床样本的相关性。结果当FK506浓度处于A1水平时,SYVA Viva-E的批内、批间精密度及检测结果均值均高于Abbott IMX(P<0.05);处于A2、A3水平时,2种检测系统批内、批间精密度及检测结果均值相近,差异无统计学意义(P>0.05)。Abbott IMX的检测精密度优于SYVA Viva-E。当临床样本浓度<8.0 ng/mL时,SYVAViva-E检测结果的均值比Abbott IMX约高1.0 ng/mL,二者比较差异有统计学意义(P<0.01),与测定质控品的结果一致;当样本浓度≥8.0 ng/mL时,SYVA Viva-E检测结果的均值与Abbott IMX相近,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。2种检测系统测定临床样本的总体相关性较好(r=0.977),但SYVA Viva-E检测结果均略高于Abbott IMX。结论应用EMIT检测FK506时,其检测结果略高于MEIA,尤其在低浓度范围更加明显。2种检测系统在检测FK506浓度时可能存在系统偏差。

纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价

目的建立纳米颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定乳酸脱氢酶同工酶3(LDH3)的分析方法。方法确定最适反应条件,包括抗体浓度、胶乳微球粒径、交联剂[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)]浓度、缓冲液种类及p H值、反应时间,并建立检测血清LDH3的PETIA方法。按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP5-A2文件要求,评价方法的精密度、线性范围、回收率、抗干扰能力和分析灵敏度,并初步建立参考区间。结果 PETIA最适反应条件:抗体浓度为0.1 mg/m L、胶乳微球粒径为120 nm、交联剂(EDAC/NHS)浓度为10 mg/m L、缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)、p H值为7.8时偶联率最佳,室温(25℃)和低温(4℃)放置24 h偶联率保持不变。采用建立的PETIA检测LDH3低值(16.5 U/L)、中值(65.0 U/L)和高值(155.0 U/L)的批内变异系数(CV)分别为5.77%、4.02%、3.77%,批间CV分别为6.59%、4.44%、3.93%;线性范围为3.6~200.0 U/L;平均回收率为102.1%;900 U/L类风湿因子、500μmol/L胆红素、9 mmol/L甘油三酯、5 g/L血红蛋白、5 g/L维生素C均无明显干扰;分析灵敏度为3.6 U/L;参考区间为13.5~75.9 U/L。结论建立的PETIA测定LDH3具有方法简单、快速、灵敏等优点,且结果准确,可用于全自动生化分析仪,能够满足临床检验的要求。

免疫增强透射比浊法测定超敏C-反应蛋白的方法学评价

目的 :对免疫增强透射比浊法在全自动生化分析仪上测定超敏C 反应蛋白 (Hs CRP)的方法进行评价。方法 :检测该方法的分析范围、最低检测限、精密度、抗干扰能力及参考范围。结果 :免疫增强透射比浊法测定Hs CRP的分析范围为 0 .12 5～ 12 .5mg/L ,最低检测限为 0 .115mg/L ,批内、批间精度分别为 0 .89%和0 .90 %;本实验室Hs CRP的参考范围为 0 .2 0～ 2 .6 0mg/L。结论 :免疫增强的透射比浊法在全自动生化分析仪上测定Hs CRP的方法具有敏感性高、稳定性好、方便快速的优点 ,适宜于在临床推广应用。

液相色谱-质谱联用和酶增强免疫分析法测定人全血环孢素A浓度比较

目的建立液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定人全血环孢素A(CsA)浓度,并与酶增强免疫分析(EMIT)法进行相关性分析。方法以乙腈为沉淀剂,环孢素D(CsD)为内标,Waters Atlantisd C18(3.9 mm×150 mm,3μm)色谱柱为分析柱,10 mmol·L^(-1)醋酸铵乙腈-10 mmol·L^(-1)醋酸铵为流动相进行梯度洗脱,质谱方法应用电喷雾电离源(ESI源),采用多反应监测方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应为CsA m/z 1 220.0→m/z 1 202.8,内标CsD m/z1 216.8→m/z 119.4。分别采用LC-MS/MS法和EMIT法测定124例患者服用CsA后的全血药物浓度,比较两种方法测定结果的相关性。结果以LC-MS/MS法测定结果(X)与EMIT法测定结果(Y)作线性回归方程,Y=0.999 3X+20.387(r=0.983,n=124,P<0.05),EMIT法测全血CsA的浓度较LC-MS/MS法偏高。结论 LC-MS/MS法和EMIT法测定人全血CsA的浓度相关性良好,在CsA药物浓度监测中,对不同测定方法的测定差异,应予以关注并作相应调整。

胶乳增强免疫透射比浊法检测胱抑素C的技术性能评价

目的:对检测血清胱抑素C(Cys-C)的胶乳增强免疫透射比浊法进行方法学的技术性能评价。方法:应用NCCLS的标准化评价方案和全自动生化分析仪,评价胶乳增强免疫透射比浊法测定血清Cys-C的准确度、精密度、线性范围和干扰因素。结果:平均回收率为97.1%;正常值和高值的批内变异系数CV%分别为2.53%和2.31%,批间CV%分别为2.75%和2.68%,日间CV%分别为3.16%和3.03%,总CV%分别为4.12%和3.93%;线性范围为0.00～8.90 mg/L;血红蛋白(负干扰)在5 g/L、总胆红素(正干扰)442 μmol/L和甘油三酯(负干扰)9 mmol/L以下时对血清Cys-C的测定均无显著性干扰,即检测结果基本不受溶血、黄疸和脂浊的影响。结论:胶乳增强免疫透射比浊法的准确度和精密度均符合要求,线性范围宽,具有自动化程度高、检测速度快、成本低、安全等优点,是目前临床实验室常规测定血清Cys-C的首选方法。

胶乳增强免疫透射比浊法测定Cys C的性能评价

目的建立满足临床要求的测定半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,CysC)的方法。方法在全自动生化分析仪上建立胶乳增强免疫透射比浊法测定血清CysC的方法,按照国家实验室认可及美国病理学家协会(CAP)认可要求,依据NCCLS EP5-A文件分析该方法的日内和日间精密度;采用回收试验反映该方法的准确度;依据NCCLSEP6-P文件评价该方法的线性范围;评价该分析方法的最低检测限;并对该方法的参考范围做验证。同时对该方法的灵敏度、携带污染率、稀释方案等给予评价。结果该方法日内精密度高、低值分别为0.78%和0.54%,日间精密度高、低值分别为1.23%和1.25,均低于CLIA,88要求的1/4TEA(<5.0%)和1/3TEA(<7.5%);高、低值的回收率为92.7%和96.9%(标准为95.0%—105.0%);线性范围在(0.13—6.92)mg/L,满足试剂所提供的线性范围;参考范围验证结果符合临床要求。结论胶乳增强免疫透射比浊测定CysC,其精密度、回收率、线性范围、参考范围及其他指标均符合临床实验室要求。

免疫增强透射比浊法测定超敏C-反应蛋白的实验研究

目的对免疫增强透射比浊法测定超敏C-反应蛋白（hs—CRP）进行实验研究。方法用国产试剂检测该方法的分析范围、最低检测限、精密度、准确度、抗于扰能力，同时与国外试剂进行对比试验。结果国产试剂免疫增强透射比浊法测定hs—CRP的分析范围为0．1～17．0mg／L，最低检测限为0．1mg／L。而且当调整仪器设定参数，使反应时间缩短至4min，分析范围可增宽为0．1～20．0mg／L，批内精密度小于4．3％，天间精密度小于5．3％，偏倚小于12．7％；抗干扰能力强，尤其对类风湿因子，当它小于700U／mL时没有观察到干扰。对比试验显示，相关系数为0．988，回归方程Y=1．1176 X-0．7822。结论国产试剂免疫增强透射比浊法在全自动生化分析仪上测定hs—CRP具有灵敏度高、稳定性好、抗干扰能力强、准确度高、成本低、测定更快速等特点，适宜于在临床推广应用。

酶增强免疫分析法测定环孢素A和他克莫司血药浓度的质量控制

目的 评价和分析酶增强免疫分析法（EMIT）监测患者全血中环孢素A（Cs A）和他克莫司浓度的室内质控结果。方法 对四川省医学科学院·四川省人民医院药学部实验室2013年6月~2014年9月作Cs A和他克莫司血药浓度监测的随行质控结果进行评价与分析,建立常规中心线及控制限,绘制质控图。结果 Cs A和他克莫司低、中、高3个水平的常规中心线分别为69.19、159.41、388.11 ng/m L和5.21、9.20、19.34 ng/m L;Cs A的低、中、高浓度的日内和日间精密度的RSD分别为10.38%、8.61%、9.40%和16.10%、13.31%、12.64%,相对回收率分别为95.26%、110.65%、107.51%和104.80%、98.30%、98.18%;他克莫司的低、中、高浓度的日内和日间精密度的RSD分别为10.21%、8.69%、4.29%和19.93%、14.02%、13.96%,相对回收率分别为117.20%、107.55%、103.47%和112.20%、105.00%、104.00%,均符合《中国药典》2010年版的要求。运用Westgard多规则控制方法对质控结果进行分析检出Cs A失控2次;他克莫司失控7次。结论 EMIT测定Cs A和他克莫司血药浓度具有较好的精密度和稳定性,适于临床开展治疗药物监测,但应建立质控方法对质控结果进行评估,以保证实验室测定数据的准确性,为临床提供准确的监测结果。

近红外颗粒速率免疫透射法测定血胱抑素C的性能评价

目的应用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)的评价方案,客观地对近红外颗粒速率免疫透射比浊法测定血液中胱抑素C(CystatinC,CysC)的性能进行评价。方法利用IMMAGE800特定蛋白仪的近红外颗粒速率免疫透射比浊法(以下简称免疫透射比浊法),对方法进行精密度、线性、干扰试验及与AULYMPUSAU2700全自动生化仪免疫透射法进行比较分析。结果Cys-C浓度的低值,高值两者分别为:批内CV为2.3%、2.09%;批间CV为3.31%、2.42%;日间CV为3.93%、2.48%;总CV为4.85%、2.85%日均值为0.891mg/dl、5.381mg/dl。样本在F-Bil干扰物试验中,浓度为0.11～1.13μmol/L,测定结果无干扰;在C-Bil干扰物试验中,浓度在0.12～1.16μmol/L,测定结果无干扰。在Hb干扰物试验中,浓度在0.4858～4.858g/L测定结果无干扰。在乳糜浊度干扰物试验中,浓度在155～1550度,测定结果无干扰。与AULYMPUSAU2700全自动生化仪的免疫透射比浊法比较有良好的相关性,Y=0.992X+0.186,γ=0.990,P<0.01。免疫透射比浊法测定结果略低,两种方法的平均偏差为0.1720mg/L;多于95%的测定值落在0.1073mg/L到0.2367mg/L。结论建立在IMMAGE800特定蛋白仪上用国产免疫透射试剂的近红外颗粒免疫透射比浊检测方法,进行方法学评价,证明该方法的重复性、准确性是符合临床检测要求的。

微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定β_2-微球蛋白的评价

对微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定血清和尿液β2-微球蛋白(β2-MG)结果偏差进行评估。按照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)EP9-A文件,以微粒子酶免疫分析法为实验方法,胶乳增强免疫比浊法为比较方法进行对比及偏差评估,将测定数据进行相关分析,并对两种分析系统之间的预期偏差进行评估。结果发现,除高浓度(>10mg/L)尿液样本外,其余各浓度的血清和尿液β2-MG用两种方法的测定结果的偏差均在可接受的范围。在使用性能较好的全自动生化分析仪和相配套试剂的前提下,微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法对血清和尿液β2-MG的测定结果基本一致。