基于乙型肝炎病毒核心蛋白的颗粒性肽展示载体的构建

为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1～6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1～3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4～6拷贝的重组抗原则未见明显表达.电镜检测显示重组抗原CI、CII和CIII可以形成形态与HBcAg类似的类病毒颗粒,颗粒直径在30～34nm之间.ELISA分析显示这3种VLP抗原具有很强的preS1抗原的免疫反应性,而对HBc单克隆抗体则基本失去反应性.提示外源多肽pre(21 47)可被有效地递呈至类HBc颗粒的表面,且外源多肽的插入使HBc主要的免疫优势表位遭到了破坏.这些证据表明利用HBcAg的专一性呈递能力来构建多价抗原可作为免疫原设计时的一种策略.

日本血吸虫表位肽-DNA颗粒性疫苗对小鼠免疫应答的影响

采用已构建的日本血吸虫Si22．6抗原CTL、Th和B细胞表位肽-DNA颗粒性疫苗（PDDV）及其混合疫苗免疫C57BL／6小鼠。36只小鼠随机均分6组，即18K对照组（[K]18-空质粒PDDV）、PBS对照组、C组（C-PDDV）、T组（T-PDDV）、B组（B-PDDV）和C-T-B组（C-PDDV、T-PDDV和B-PDDV等量混合），每鼠分别在第0、3和6周麻醉下经尾脊部皮下注射100μlPDDV（含10μgDNA和28μg肽），对照组注射等量的空质粒DNA和[K]18肽或PBS。末次免疫后7d，脱颈处死，制备脾细胞悬液，经日本血吸虫成虫抗原（SWA）刺激后根据，^3H标记的胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）检测脾细胞增殖反应，ELISA法检测脾细胞培养上清中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）的含量。EUSA结果显示，T组小鼠脾细胞中IFN-γ的含量[（76．0±11．2）ps／ml]，高于PBS[（13．0±2．1）pg／ml]和18K对照组[（14．0±3．2）pg／ml]（P〈0．01），T组和C—T-B组小鼠脾细胞中IL-4的水平分别为（152．0±21．1）和（86．0±12．2）pg／ml，高于其他组（P〈0．01或P〈0．05）。T组小鼠脾细胞经SWA刺激后，增殖反应明显高于PBS和18K对照组（p〈0．01）；而C-T-B组小鼠脾细胞的增殖反应与PBS和18K对照组相比．差异无统计学意义（P〉0．05）。说明T-PDDV和C-T-B混合PDDV诱导的免疫应答强于单价的C-PDDV和B-PDDV。