水牛卵丘细胞和颗粒细胞单层对卵母细胞体外受精及其胚胎发育的影响

[目的]探讨卵丘细胞对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及颗粒细胞单层对水牛体外胚胎发育的影响。[方法]①按卵母细胞有无卵丘细胞情况分为五个组:即自然裸卵组(Ⅰ组)、自然裸卵+卵丘细胞共成熟组(Ⅱ组)、人为裸卵+卵丘细胞共成熟组(Ⅲ组)、AB级卵母细胞成熟后去除卵丘细胞受精组(Ⅳ组)、AB级卵母细胞对照组(Ⅴ组)分别进行体外成熟及体外受精培养。②不同牛品种的颗粒细胞单层与受精卵共培养效果比较。[结果]表明:在体外成熟方面,Ⅰ组与Ⅱ组无显著差异(P>0.05),但显著低于Ⅲ组(P<0.05),极显著低于Ⅳ组、Ⅴ组;受精卵分裂率方面,Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅲ组无显著差异(P>0.05),极显著低于Ⅳ组、Ⅴ组(P<0.01);但在囊胚率方面,对照组Ⅴ组囊胚率极显著高于其他试验组30.50%(P<0.01)。用不同牛品种颗粒细胞单层进行受精卵培养的试验表明,水牛受精卵与水牛颗粒细胞单层共培养效果30.03%明显优于黄牛颗粒细胞单层的效果23.04%(P<0.05)。[结论]卵丘细胞对卵母细胞的体外成熟、体外受精及胚胎发育均有促进作用;水牛受精卵与同科属的水牛颗粒细胞单层共培养效果优于黄牛颗粒细胞单层的效果。

颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响

为优化颗粒细胞单层共培养体系,研究了不同类型、不同种属的颗粒细胞单层及不同时间更换培养单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响。结果表明,就卵裂率、囊胚率和囊胚孵出率而言,壁颗粒细胞单层组与丘颗粒细胞单层组之间无显著差异(P>0.05);来自黄牛、猪和小鼠的颗粒细胞单层在支持黄牛孤雌胚胎体外发育方面无显著差异(P>0.05);就囊胚率而言,共培养的第3天和第6天两次更换单层分别与共培养的第4天更换单层和始终不更换单层的对照组之间无显著差异(P>0.05),但第4天更换单层与对照组之间有显著差异(P<0.05)。所以,不同类型和不同种属的颗粒细胞单层都能很好地支持黄牛孤雌胚胎的体外发育,在胚胎的体外发育过程中更换培养单层可以明显提高胚胎的囊胚率和囊胚孵出率,并且在共培养的第4天更换培养单层可以得到较高的囊胚率。

颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响

为优化颗粒细胞单层共培养体系,实验研究了颗粒细胞单层体外培养时间、颗粒细胞单层的种属及更换培养单层时间对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响。结果表明:将培养0、2d和4d后的颗粒细胞单层用于胚胎的体外共培养,3组的卵裂率和囊胚率分别为84.47%/40.23%、78.49%/36.99%和71.55%/25.30%;来自黄牛、小鼠和猪的颗粒细胞单层在支持黄牛孤雌胚胎体外发育方面无显著差异(P>0.05);第4天更换培养单层的囊胚率最高(55.17%),与不更换单层的对照组(41.25%)有显著差异(P<0.05)。

颗粒细胞和培养微滴大小对牛卵母细胞体外受精后胚胎发育的影响

以屠宰场牛卵巢为材料,研究了颗粒细胞单层(GCM)和培养微滴大小对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响.试验1从卵泡抽取卵丘卵母细胞复合体(COCs),并根据卵母细胞外面卵丘细胞的层数将其分为3类,分别在体外成熟(IVM)和早期胚胎的体外培养(IVC)培养液中添加GCM,与不添加的对比;添加GCM对1级卵母细胞的卵裂率、6～8细胞发育率和囊胚率无明显影响,但添加GCM的2级、3级卵母细胞,受精后的卵裂率、6～8细胞发育率和囊胚率分别高于未添加组(P＜0.05).试验2将取自每头牛的约20枚卵母细胞,分别置于不同大小的微滴(30μl,50 μl,100μl和200μl)中培养、受精,30μl和50 μl组的囊胚发育率明显高于100 μl和200 μl组.

牛体外授精技术研究

武汉市畜牧兽医科学研究所王秀阁等,利用牛卵细胞进行体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)、体外培养发育(IVC)和胚胎移植(ET)等方面进行了研究。结果表明,卵巢卵母细胞培养于A、B、C三种成熟液内的体外成熟率分别为94.61％、89.47％和70.43％,体外受精率分别为71.86％、78.