颗粒细胞线粒体DNA拷贝数用于评估胚胎发育潜能的临床价值

目的 探究颗粒细胞线粒体DNA拷贝数用于评估胚胎发育潜能的临床应用。方法 选取2020年1月-2021年12月本院辅助生殖技术助孕的新型卵裂期胚胎总计90个,选择数字聚合酶链式反应(PCR)检测胚胎培养液中颗粒细胞线粒体DNA拷贝数(mtDNA),依据胚胎评分分为高分组(n=70)、低分组(n=20),对比基础内分泌条件、妊娠结局等的差异。结果 高分组在FSH、LH、Hcg日内膜厚度、mtDNA拷贝数高于低分组,E2、P低于低分组,差异有统计学意义(P<0.05)。高分组妊娠成功率高于低分组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胚胎培养液中对mtDNA拷贝数的获取是进行胚胎质量评估的一项重要手段,与形态学评分相结合能评价胚胎质量,当mtDNA拷贝数越高则胚胎质量越好,有助于辅助生殖技术中选择最优胚胎植入,提高妊娠率。

炎症因子对非PCOS患者颗粒细胞活性氧水平及线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨炎症因子对非多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞活性氧(ROS)水平及线粒体DNA(mt DNA)的影响。方法选择体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的非PCOS患者50例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分为炎症因子处理组和对照组,处理组分别加入5 nmol/L的炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α,对照组加入等量炎症因子稀释液,比较各组颗粒细胞ROS水平及mt DNA拷贝数是否存在差异。结果 IL-1、IL-6、TNF-α处理组颗粒细胞ROS水平及mt DNA拷贝数均显著高于对照组(均P<0.05)。结论炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α可导致颗粒细胞氧化应激水平增高和线粒体受损。

卵巢储备功能下降患者颗粒细胞mtDNA拷贝数及4977bp缺失的研究

目的:研究卵巢储备功能下降(DOR)患者颗粒细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数和4 977 bp缺失情况,初步探讨DOR患者颗粒细胞mtDNA结构的完整性。方法:选取DOR组及对照组各50例,分离提纯卵泡液中颗粒细胞,提取DNA,RT-PCR相对定量颗粒细胞mtDNA拷贝数及PCR检测其4 977 bp缺失情况。结果:DOR组及对照组均未检测到mtDNA 4 977 bp缺失,其拷贝数相对量差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:DOR患者颗粒细胞mtDNA结构基本完整,颗粒细胞可作为DOR患者卵母细胞浆内线粒体自体移植的供体细胞。

人颗粒细胞线粒体DNA缺失的研究

目的 探讨颗粒细胞线粒体DNA突变在女性生殖老化中的可能机制 ,并为颗粒细胞线粒体移植提供理论基础。方法 分离 70例临床行常规体外受精 (IVF)和胞质内单精子注射 (ICSI)患者的颗粒细胞 ,抽提DNA ,PCR检测颗粒细胞线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA) 4 977bp缺失情况。 结果 所有颗粒细胞均未检测到mtDNA4 977bp缺失。结论 人颗粒细胞mtDNA并不发生 4 977bp缺失 ,这可能与其不是有丝分裂后细胞 ,仍具有增殖能力 ,受到的氧化损伤较少有关。颗粒细胞参与生殖老化的机制可能与其mtDNA突变无关。

线粒体DNA拷贝数作为生物标志物的研究前景

线粒体是细胞内的能量工厂,参与多种重要生物学过程.线粒体脱氧核糖核酸(DNA)拷贝数在不同的组织器官和生理状态下具有巨大差异,与衰老、癌症及多种疾病密切相关,作为生物标志物在疾病诊断中具有重要的应用价值.对人体中线粒体DNA拷贝数的多样性,尤其是其在不同生理状况或疾病下的变化进行综述,探讨线粒体DNA拷贝数的生物学意义及其作为生物标志物的潜力.

高原习服适应中白细胞线粒体DNA拷贝数的变化规律

线粒体是机体能量工厂,是组织、细胞氧利用的关键场所。90%-95%机体耗能通过线粒体的氧化磷酸化作用获得。线粒体在细胞、组织和机体的低氧习服适应过程中发挥着重要的作用。线粒体DNA（mtDNA）与线粒体的功能密切相关,

血细胞线粒体DNA拷贝数变化与高原红细胞增多症易感性的关联研究

目的探讨血细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的变化与高原红细胞增多症易感性的关联性。方法分别采集年龄、职业等相匹配的高原红细胞增多症患者37例及对照组42例的静脉血2 mL,提取总DNA,通过定量PCR法(染料法)检测白细胞的mtDNA相对拷贝数。结果高原红细胞增多症患者中,mtDNA拷贝数显著低于对照组(P<0.05)。通过线性回归分析显示,在对照组中,随血红蛋白浓度的增加mtDNA拷贝数增加(P<0.05);然而在高原红细胞增多症病例组中,随着血红蛋白浓度的增加,mtDNA拷贝数降低(P<0.05)。结论高原红细胞增多症患者中,mtDNA拷贝数较低,可能作为该病的分子标记。

精确定量肺组织细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立

目的建立一种精确定量肺组织细胞线粒体DNA拷贝数的方法。方法结合2个单独的实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体HV1和核β-globin基因分别进行定量。以线粒体DNA HV1和核单拷贝基因β-globin分别作为线粒体和核DNA拷贝数的标记,对肺组织线粒体DNA的含量进行了精确定量[拷贝数/细胞,即相对拷贝数/二倍体核基因组(diploid nuclear genome)=2×HV1/β-globin]。结果肺组织线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为(733±196)。结论该技术可对线粒体DNA拷贝数进行准确的测定,并计算出线粒体DNA拷贝数绝对数量的变化。

猪卵母细胞线粒体分布及线粒体DNA拷贝数变化

本研究旨在观察猪卵母细胞线粒体分布及线粒体DNA拷贝数变化,以期作为判定哺乳动物卵母细胞胞质成熟的指标,同时也为今后克隆技术的发展和相关基因表达调控的研究提供基础。运用线粒体分子探针标记技术检测体外成熟不同时期卵母细胞中线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测其线粒体DNA拷贝数的变化趋势,揭示线粒体分布、线粒体DNA拷贝数变化与卵母细胞发育潜能的关系。结果表明,猪卵母细胞成熟前后,线粒体分布由未成熟的周边分布变为成熟后的均匀分布,并且线粒体簇变大,着色变深。卵母细胞成熟0、11、22h的mtDNA拷贝数分别为(2 519.52±940.39)、(3 421.47±345.71)和(9 747.58±1 928.24),他们之间无显著性差异(P>0.05)。卵母细胞成熟33h的mtDNA拷贝数为(39 913.61±1 180.26),显著高于成熟0、11和22h的mtDNA拷贝数(P<0.05)。卵母细胞成熟44h的mtDNA拷贝数为(130 074.30±78 119.45),显著高于成熟33h的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,随着卵母细胞成熟进程的推进,线粒体活性增强,线粒体DNA拷贝数明显增加。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血白细胞线粒体DNA拷贝数变化及其与吸烟的关系

目的探讨慢性阻塞性肺疾病患者外周血白细胞线粒体DNA(mt DNA)拷贝数变化及其与吸烟的关系。方法选择60例COPD患者为COPD组,45例健康人为对照组,提取两组外周血白细胞基因组DNA。比较两组间mt DNA拷贝数,以及COPD组中吸烟与不吸烟患者的mt DNA拷贝数。结果 COPD患者外周血白细胞mt DNA拷贝数低于对照组,吸烟者mt DNA拷贝数低于不吸烟者(均P<0.05)。结论 COPD患者外周血白细胞mt DNA拷贝数的降低,其中吸烟者外周血白细胞mt DNA拷贝数更低。COPD的发生可能与外周血白细胞mt DNA拷贝数减少有关。

黄瓜生殖细胞分离及其线粒体DNA的观察与拷贝数定量分析

该研究以6~8月上午10点左右摘取的新鲜黄瓜花朵为材料,采用渗透压冲击的方法分离黄瓜生殖细胞,并应用竞争型定量PCR技术测定其线粒体DNA数量,分析生殖细胞在发育过程中线粒体DNA的变化,以明确高丰度线粒体DNA的来源,为进一步研究被子植物调控线粒体DNA扩增的分子机制奠定基础。结果显示：（1）DAPI染色观察发现,黄瓜生殖细胞的细胞核周围存在大量的细胞器DNA荧光点,表明黄瓜生殖细胞的细胞质中存在大量的线粒体DNA。（2）成熟黄瓜生殖细胞平均包含（1 037±126）个线粒体DNA拷贝。（3）成熟生殖细胞内线粒体DNA含量为早期生殖细胞的14.5倍,表明成熟生殖细胞中的线粒体DNA主要来自于生殖细胞形成后其内活跃的线粒体DNA扩增。研究认为,黄瓜生殖细胞内活跃的线粒体DNA是黄瓜线粒体父系遗传的基础。

喉癌及癌前病变中线粒体DNA拷贝数改变与临床病理的相关性研究

目的研究喉癌、癌周正常组织及癌前病变中线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数改变情况,及其与临床病理特性的关系。方法选取40例喉癌及8例喉癌癌前病变标本,分离癌及癌周组织,分别提取总DNA。选取mtDNA的CoxⅡ和核DNA的β-actin为目的片断,进行荧光定量PCR扩增,以CoxⅡ/β-actin拷贝数平均比定量分析mtDNA的拷贝数情况,并分析拷贝数改变与临床病理特征的关系。结果喉癌组织、癌周组织及癌前病变中mtDNA平均(CoxⅡ/β-actin)比分别为0.9141、0.8103和0.4538,癌和癌周组织、癌和癌前组织及癌周和癌前组织的mtDNA拷贝数差异均有统计学意义(P=0.048,0.003和0.004),有淋巴结转移和无淋巴结转移的喉癌mtDNA平均(CoxⅡ/β-actin)比分别为1.3089和0.6743,差异有统计学意义(P=0.045),mtDNA的拷贝数随肿瘤分期的增加、分化程度的降低而增加但差异无统计学意义(P=0.486和0.459)。结论喉癌中mtDNA拷贝数显著高于癌周组织及癌前病变组织,喉癌中mtDNA拷贝数随淋巴结转移而增加,mtDNA拷贝数改变可能参与喉癌的发生发展。

线粒体DNA拷贝数在结直肠癌术后复发病例中变化的意义

目的 :探讨结直肠癌(CRC)术后复发患者的线粒体DNA(mtDNA)拷贝数异常与临床病理指标的关系。方法:选取50例术后复发CRC患者及50例初发CRC患者肿瘤、癌旁组织及外周血标本,分别提取基因组DNA,进而计算出mtDNA拷贝数;然后与临床及病理指标相比较分析。结果:无论是复发CRC患者还是初发CRC患者,肿瘤组织内mtDNA拷贝数均明显低于癌旁组织(P<0.05),同时其外周血中mtDNA拷贝数明显低于正常健康人(P<0.05);mtDNA拷贝数高低与复发CRC患者肿瘤的分化程度及淋巴结转移率密切相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤浸润深度及远处转移无相关性(P>0.05)。结论:线粒体DNA拷贝数的降低与复发CRC发生、发展和复发密切相关。

线粒体DNA拷贝数在胃癌术后复发病例中变化的意义

目的探讨胃癌术后复发患者的线粒体DNA(mtDNA)拷贝数异常与临床病理指标的关系。方法选取50例胃癌术后复发患者及50例初发胃癌患者肿瘤、癌旁组织及外周血标本,分别提取基因组DNA,进而计算出mtDNA拷贝数;然后与临床及病理指标相比较并进行统计学分析。结果无论是复发胃癌组患者还是初发胃癌组患者,肿瘤组织内mtDNA拷贝数明显低于癌旁组织内mtDNA拷贝数(P<0.05),同时其外周血中mtDNA拷贝数明显低于正常健康人外周血中的mtDNA拷贝数(P<0.05),mtDNA拷贝数高低与胃癌患者肿瘤的分化程度及淋巴结转移率有统汁学关联(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤浸润深度分期无统计学联系(P>0.05)。结论线粒体DNA拷贝数的降低与胃癌发生、发展及术后复发有统计学关联。

肺癌线粒体DNA拷贝数改变和微卫星不稳定性

目的了解和分析肺癌中线粒体基因组拷贝数的改变及微卫星不稳定性(mitochondrial microsatellite instability,mtMSI)。方法采用PCR-单链构象多态性(PCRSingle-stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)分析、序列测定和实时荧光定量PCR等方法,对37例肺癌组织线粒体DNA的拷贝数和线粒体DNA控制区内的微卫星不稳进行检测。结果肺癌组织线粒体DNA的拷贝数/细胞为(395±125),显著低于相对应的正常肺组织(733±196)(P<0.01)。37例肺癌样本中共检出mtMSI12例(32.4%)。肺癌组织线粒体基因组拷贝数的改变与控制区内的微卫星不稳定性有关(P<0.05)。结论肺癌组织中线粒体DNA的拷贝数显著降低,可能与控制区内的微卫星不稳定性有关。

线粒体DNA拷贝数的研究新进展

线粒体DNA(mtDNA)拷贝数是mtDNA在线粒体基因组中的个数,目前存在几种mtDNA拷贝数调控模式假说。mtDNA拷贝数受线粒体转录因子A、同源重组修复蛋白Rad51、DNA聚合酶γ等调控。氧化应激对mtDNA拷贝数的影响与其对mtDNA的损伤程度有关,呈双向调节作用。近年来研究发现,mtDNA拷贝数变化与骨质疏松、糖尿病、心血管疾病、肿瘤等多种疾病的发生、发展有一定的相关性,且在不同疾病或疾病发展的不同阶段变化不同。

含砷中药青黄散对骨髓增生异常综合征患者线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨含砷中药青黄散治疗前后骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndromes,MDS)患者的线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数的变化,并对其作用机理进行初步研究。方法收集2016年4月至2018年7月中国中医科学院西苑医院血液科门诊的MDS患者40例为治疗组,以青黄散为主联合补肾健脾方治疗6个月。以RT-PCR方法检测青黄散治疗前后MDS患者骨髓单个核细胞的mtDNA拷贝数,同时以9例健康体检者的外周血有核细胞mtDNA拷贝数为正常对照组;以试剂盒检测青黄散治疗前后MDS患者骨髓上清液中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的变化。结果与正常对照组比较,治疗组治疗前MDS患者的mtDNA拷贝数明显增高(P<0.05);治疗组经青黄散治疗后mtDNA拷贝数与治疗前比较明显减低(P<0.05)。治疗组MDS患者经青黄散治疗后MDA的表达增加与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论含砷中药青黄散治疗MDS的机理之一是改变mtDNA的拷贝数,而这种拷贝数的改变可能与砷制剂引起的氧化应激有关。

肺癌组织中线粒体转录因子A的表达与线粒体DNA拷贝数变化的关系

目的探讨肺癌组织中线粒体转录因子A的表达与线粒体DNA拷贝数变化的关系。方法采用实时荧光定量PCR和RT-PCR方法,对肺癌及相应正常肺组织中mtTFA mRNA的表达及其与线粒体DNA拷贝数变化的关系进行了检测和分析。结果癌组织和癌旁正常组织mtTFA mRNA的表达量之间无明显差异(P=0.221)。线性回归分析结果表明,癌旁正常组织中,mtTFA mRNA的表达量和线粒体DNA拷贝数之间有直接的相关性(r=0.910,P<0.01);而在癌组织中,线粒体DNA拷贝数和mtTFA mRNA的表达水平无关(r=0.135,P>0.05)。结论 mtDNA转录、复制的核调节因子mtTFA的表达水平和肺癌线粒体DNA拷贝数之间无相关性。

骨关节炎患者线粒体转录因子A表达与线粒体DNA拷贝数关系的研究

目的研究膝关节骨关节炎患者与正常人外周血及关节软骨细胞中的线粒体转录因子A(TFAM)表达和线粒体DNA拷贝数的关系,探讨其相关性。方法选择20例的膝关节骨关节炎患者为骨关节炎组,以正常关节软骨患者20例为对照组。各收集其外周血及关节软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光PCR(SYBR GREEN I染料法)检测外周血及软骨组织中TFAM mRNA的表达水平和软骨细胞线粒体DNA拷贝数。结果骨关节炎组外周血和软骨细胞TFAM mRNA的表达量均低于正常组患者(P<0.05),且二者表达量呈正相关(P<0.01);骨关节炎组线粒体DNA的平均拷贝数均于正常组患者软骨细胞(P<0.01),且与软骨细胞TFAM mRNA的表达量呈正相关(P<0.01)。结论 TFAM通过增加其线粒体DNA拷贝数,这将可以对骨关节炎的病因提出新的解释和补充,可能为骨关节炎的检测和治疗提供新的途径。

血浆游离线粒体DNA拷贝数与2型糖尿病患者合并动脉粥样硬化的相关性研究

糖尿病已成为继心血管病和肿瘤之后的第三大慢性非传染性疾病，并且由之引发的多种并发症，更是致残、致死的主要原因，严重影响人类的健康和生活质量，其中大血管病变（冠心病、脑梗死）是糖尿病致死的首要病因．颈动脉和下肢动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要危险因素，与普通人群相比，2型糖尿病患者动脉粥样硬化出现更早、进展速度更快、病变更弥散、广泛，易累积远端血管。