补肾促卵颗粒对体外受精周期颗粒细胞骨形成蛋白-15蛋白表达的影响

目的:观察补肾促卵颗粒对IVF周期颗粒细胞骨形成蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)的影响,探讨提高妊娠率的可能机制。方法:将因输卵管因素行体外授精-胚胎移植(IVF-ET)82例患者随机分为治疗组(IVF治疗周期加用补肾促卵颗粒)42例,对照组(IVF治疗周期加用安慰剂颗粒)40例。观察临床肾虚证候积分变化情况,促性腺激素(Gn)用量及用药天数,取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及颗粒细胞BMP-15蛋白表达情况。结果:治疗组患者肾虚症状得到明显改善,治疗组Gn用量及用药天数低于对照组,优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);颗粒细胞BMP-15蛋白表达都优于对照组。结论:补肾促卵颗粒改善了卵母细胞成熟度,提高胚胎质量及临床妊娠率,可能与通过提高颗粒细胞BMP-15蛋白的表达有关。

卵母细胞分泌的因子与IVM

卵子体外成熟(IVM)是一项可以获得成熟卵子的重要辅助生殖技术。但是过去十几年的进展都很缓慢。一个关键的问题是不了解卵子发育能力的组成及调控机制,包括卵子-卵丘细胞缝隙连接的联系,以及这2种细胞之间的双向旁分泌信号作用。通过在体外恰当地操纵卵子-卵丘细胞之间的相互作用,可提高体外成熟卵子授精后的胚胎发育潜能。

卵泡发育过程中卵母细胞与周围体细胞之间的相互作用

随着我们对卵泡形成过程中调节因素的认识的不断深入,我们认为卵母细胞在促进卵泡生长和指导颗粒细胞分化方面起着主导作用。这种作用是通过卵母细胞分泌可溶性的旁分泌生长因子作用于邻近的颗粒细胞,反过来这些细胞又调节卵母细胞的发育的方式实现的。生长分化因子-9(GDF-9),GDF-9B(BMP-15)和/或BMP-6是卵母细胞分泌的因子中的主要成分,这些因子与其它转化生长因子-β形成一种复杂的局部相互作用形式,调节卵泡发育。

卵母细胞分泌的生长分化因子-9和骨形成蛋白-15与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨卵母细胞分泌的生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)与卵母细胞发育潜能的关系。方法:收集因输卵管性不孕接受IVF-ET治疗患者的卵泡,每侧卵巢穿刺取卵时首先选择一个直径≥18 mm卵泡抽吸,对卵母细胞进行成熟度分型,并观察其受精、卵裂及胚胎评分情况。受精后按是否形成优质胚胎将将卵泡分为优质卵母细胞组和非优质卵母细胞组,采用Western blotting方法检测比较各组卵泡液中GDF-9和BMP-15的含量。结果:①优质卵母细胞组的GDF-9蛋白相对含量为2.498±0.133,非优质卵母细胞组为1.305±0.406,差异有统计学意义(P=0.008)。②优质卵母细胞组的BMP-15蛋白相对含量为3.379±0.482,非优质卵母细胞组为1.336±0.214,差异有统计学意义(P=0.003)。结论:在优质卵母细胞组卵泡液中GDF-9和BMP-15水平均较高,提示人卵泡液中GDF-9、BMP-15水平可以反映卵母细胞的发育潜能,GDF-9、BMP-15水平可以作为评价卵母细胞质量的指标。

生长分化因子-9和骨形成蛋白-15对多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡的影响

目的探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达对卵丘细胞凋亡的影响。方法收集本院行卵胞质内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS组(n=30)和对照组(n=60)患者的卵丘细胞。TUNEL法及流式细胞术检测卵丘细胞凋亡;免疫组织化学方法检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15蛋白表达,运用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统对染色强度定量分析;Real-time PCR技术检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL)-2、BCL-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达。结果 PCOS组穿刺卵泡数、获卵数高于对照组(P<0.01);PCOS组卵丘细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组卵丘细胞胞质中均呈阳性表达;PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15、BCL-2、BAX mRNA的表达低于对照组(P<0.05),BAX/BCL-2比值高于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示PCOS患者GDF-9、BMP-15与BCL-2 mRNA表达呈正相关,与BAX mRNA的表达呈负相关。结论 PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15异常表达可能是卵丘细胞凋亡增加的原因之一。

中药补肾调经方对体外受精-胚胎移植超排卵周期妊娠结局及骨形成蛋白(BMP)-15的影响

目的:探讨中药补肾调经方对提高IVF-ET超排卵周期所获卵和胚胎质量的作用及其机制。方法:将70例因输卵管因素行IVF-ET的患者随机分为中药+控制性超排卵(实验组,n=35)和单纯控制性超排卵组(对照组,n=35),应用Western blotting法测定取卵日成熟卵泡卵泡液中骨形成蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)的含量;用RT-PCR法检测颗粒细胞中BMP-15 mRNA的表达;并比较组间的获卵数、受精率、优质胚胎率及妊娠率等。结果:实验组卵泡液中BMP-15mRNA水平及颗粒细胞中BMP-15 mRNA的表达均显著高于对照组(P<0.05);实验组的临床妊娠率(71.42%)显著高于对照组(48.57%)(P<0.05)。结论:补肾调经方可以提高IVF-ET妊娠率,其作用机制可能与调控卵泡液和颗粒细胞BMP-15水平有关。

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P<0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P<0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。

骨形态蛋白(BMP)-15对子宫内膜异位症患者IVF结局影响的临床研究

目的:探索卵丘颗粒细胞早期凋亡和骨形态蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)对子宫内膜异位症(EMs)患者IVF结局的影响。方法:行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的不孕患者,根据不孕指征分为EMs组及对照组。分别记录患者一般情况、获卵数、正常受精卵数、卵裂数、优质胚胎数、胚胎种植数和临床妊娠率。流式细胞仪测定所有对象卵丘颗粒细胞的早期凋亡率,Western blotting检测卵泡液中BMP-15蛋白的表达量。结果:获卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率差异无统计学意义(P>0.05);EMs组与对照组相比,获卵数分别为8.2±5.7个和12.0±5.8个,着床率分别为29.73%和47.31%,临床妊娠率分别43.37%和69.32%,差异均有统计学意义(P<0.05)。EMs组卵丘颗粒细胞的早期凋亡率为37.82±15.81%,对照组为8.85±5.58%,差异具有统计学意义(P<0.01)。卵泡液中BMP-15蛋白相对表达量EMs组为0.67±0.18,对照组0.94±0.33,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EMs患者IVF着床率及临床妊娠率降低,可能与卵母细胞分泌较少的BMP-15、颗粒细胞早期凋亡率增加,影响卵母细胞质量和胚胎的正常发育有关。

多囊卵巢综合征患者卵泡发育不良与干细胞因子表达水平的相关性研究

目的:研究辅助生殖治疗的多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡中干细胞因子(SCF)、生长分化因子-9(GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(BMP-15)的表达水平与卵泡发育异常的关系。方法:收集30例PCOS患者和40例正常对照者的卵泡液和颗粒细胞。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测卵泡液中SCF、GDF-9和BMP-15的表达水平,采用免疫荧光染色法测定颗粒细胞中SCF的表达水平。结果:PCOS患者(n=30)卵泡液中GDF-9、BMP-15和SCF的浓度均明显低于正常对照组(n=40),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,PCOS患者颗粒细胞中SCF的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:PCOS患者卵泡液中GDF-9、BMP-15和SCF的表达均明显降低,并且PCOS患者颗粒细胞中SCF的表达也显著下降,这可能与其卵泡发育不良有关。

基于AMH/AMHRⅡ信号通路探讨消囊调经汤治疗PCOS-IR模型大鼠的作用机制

目的:基于抗苗勒氏管激素(AMH)/抗苗勒氏管激素Ⅱ型受体(AMHRⅡ)信号通路,探讨消囊调经汤改善多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠的作用机制。方法:48只成年雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、消囊调经汤组(11.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、达英-35组(0.21 g·kg^(-1)·d^(-1)),除空白组外各组大鼠通过高脂高糖饮食联合来曲唑构建PCOS-IR模型,给药组灌胃给予相应剂量药物15 d,每给药4 d间隔1 d,空白组及模型组灌胃给予等体积生理盐水。治疗期间每天记录大鼠动情周期,治疗结束后记录体质量、Lee’s指数,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定AMH、促黄体生成素(LH)、LH/卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平,血糖仪检测空腹血糖(FPG),放射免疫分析法(RIA)检测空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(QUICKI),全自动生化检测仪测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织形态学变化,免疫组织化学法(IHC)检测卵巢组织内AMHRⅡ、骨形态发生蛋白-15(BMP-15)、Smad5蛋白水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析AMHRⅡ、BMP-15、Smad5蛋白表达水平。结果:与空白组大鼠比较,模型组大鼠阴道脱落细胞可见大量白细胞,以动情间期为主;体质量、Lee’s指数、糖脂代谢指标(FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC)、AMH及性激素(LH、LH/FSH、T)水平显著上升(P<0.01),QUICKI及E2水平显著下降(P<0.01);卵巢表面囊性突起较多、湿重较大,卵巢组织有较多闭锁状、囊性扩张性卵泡,颗粒细胞层厚度减少,不见卵母细胞;卵巢组织中AMHRⅡ蛋白表达水平显著上升(P<0.01),BMP-15、Smad5蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。与模型组大鼠比较,消囊调经汤组大鼠阴道脱落细胞于治疗第5~6天起见角化细胞,逐渐出现稳定的动情周期;体质量、Lee’s指数、糖脂代谢指标(FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC)、AMH及性激素(LH、LH/FSH、T)水平明显下降(P<0.05,P<0.01),QUICKI及E2水平显著升高(P<0.01);卵巢表面较光滑、湿重较轻,卵巢组织可见卵母细胞及成熟卵泡,颗粒细胞层厚度增加,形态完整;卵巢组织中BMP-15、Smad5蛋白表达水平显著上升(P<0.01),AMHRⅡ蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论:消囊调经汤可能通过下调AMH/AMHRⅡ的同时介导PCOS-IR大鼠卵巢组织中BMP-15、Smad5上调,从而改善大鼠卵巢功能、性激素及糖脂代谢水平。