NK细胞颗粒酶F切割底物Drp1诱导细胞凋亡

目的前期发现Drp1(Dynamin-related protein 1)可能参与小鼠颗粒酶F(Granzyme F,Gzm F)诱导的细胞凋亡通路,本文试图证明Drp1是颗粒酶F新的作用底物,并且参与诱导Bax/Bak非依赖性细胞死亡。方法表达活性Gzm F以及无活性点突变的颗粒酶F(Ser195Ala Gzm F,S-AGzm F),通过不同浓度梯度以及不同时间处理全细胞裂解液,Western blot鉴定颗粒酶F对Drp1的切割情况;模拟生理情况下的Loading条件,通过腺病毒Ad将颗粒酶F转导进入细胞,进一步验证Drp1为颗粒酶F的生理底物;构建Drp1高表达质粒pc DNA-Drp1,在细胞中高表达Drp1,Western blot验证并通过Ad将颗粒酶F导入此细胞,流式细胞术检测Drp1高表达对凋亡影响情况。结果颗粒酶F能够在不同浓度和时间切割Drp1,并且产生Mr约60 000的切割片段。随着颗粒酶F作用时间和浓度的提高,被切割的Drp1量也依次提高;模拟生理情况下,Gzm F/Ad转导进入细胞后,Drp1被切割,证明Drp1是颗粒酶F的生理底物;成功构建Drp1高表达载体,将颗粒酶F导入细胞,流式细胞术检测到Drp1高表达细胞的凋亡明显降低。结论 Drp1是颗粒酶F的底物且可能在颗粒酶F诱导细胞凋亡通路中扮演重要角色。