敲低额外11-19白血病融合基因蛋白通过激活线粒体通路诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡

目的 探讨额外11-19白血病融合基因蛋白(extra eleven-nineteen leukemia fusion gene protein, EEN)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的影响及其作用机制。方法 用免疫组织化学染色检测EEN在NSCLC组织和癌旁组织的表达水平,Western blot检测EEN在正常肺上皮细胞BEAS-2B细胞和NSCLC细胞A549细胞中的水平。在A549细胞中转染sh-EEN后,使用MTT测定细胞活性,Annexin V-FITC/PI流式细胞术和TUNEL染色分析细胞凋亡,使用荧光探针DCFH-DA测量细胞内ROS生成水平,使用JC-1染色测定线粒体膜电位的变化,通过Western blot分析凋亡相关蛋白水平。结果 与癌旁组织相比,EEN在NSCLC组织中表达上调;与BEAS-2B细胞相比,EEN在A549细胞中水平明显升高。沉默A549细胞EEN后,A549细胞生长受到抑制,细胞凋亡显著增加,ROS水平升高,线粒体膜电位丢失,Cyt C释放入细胞质,同时伴随着Bcl-2降低、Bax升高和Caspase-3活化。结论 EEN在NSCLC中表达增加。敲低EEN可诱导NSCLC细胞凋亡,且这一过程至少涉及到ROS/线粒体凋亡信号通路的激活。

PCR扩增体系的体积减少对DNA分析的影响

目的探讨PCR扩增体系的体积减少对DNA分析的影响。方法4份样品采用ProfilerPlus试剂盒,在同样条件下,对50μl、25μl、12.5μl、6.25μl四种体积的体系进行扩增,扩增产物分别经ABIPRISMTM310型基因分析仪、ABIPRISMTM377型测序仪、ABIPRISMTM3100型基因分析仪电泳,并经GeneScan3.1基因扫描软件和Genotyper2.5分析软件分析得到实验结果。结果小体积的扩增体系容易出现等位基因的丢失、额外等位基因的产生等现象。结论在检材情况较差时,应该慎用小体积的扩增体系。