细菌性“颤抖病”病原的体外中药药敏试验

嗜水气单胞菌 2菌株ES - 1、ES - 2对地锦草、黄莲、五倍子和增效剂具高度敏感性 ,这 4种药物可作为防治由该菌引起疾病的首选药物 ,同时发现这 2株菌对黄芪、穿心莲、连翘等具有不同程度的耐药性。通过 3种高度抑菌药物间及与增效剂之间的相互作用 ,得出增效剂对五倍子、黄莲有明显的增效作用 ,地锦草和五倍子具有协同作用 ,尤其增效剂对五倍子的增效作用效果最为明显 ,该复方药物可作为由该菌引起疾病的高效、低成本。

患颤抖病中华绒螯蟹体内类立克次体侵染的光镜和电镜观察

对江苏和安徽地区患颤抖病的中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)各器官和组织进行光镜和电镜观察。结果表明 ,类立克次体 (Richettsia likeOrganisms,RLOs)广泛寄生于病蟹各器官和组织中。它们特异性地寄生于病蟹各器官的肌肉和结缔组织以及血细胞中 ,血淋巴中的小颗粒细胞是类立克次体的主要繁殖场所和传播载体。类立克次体对病蟹机体的结缔组织的广泛侵入 ,以及对胸神经节及神经与肌肉的接头—运动终板的侵染正是颤抖病症状 (不食、肌无力、肢体阵发性颤抖 )的病理结构基础。本研究旨在探讨RLOs与中华绒螯蟹颤抖病的关系 。

中华绒螯蟹颤抖病组织病理学研究

采用常规石蜡切片技术、以正常样品作对照 ,对患颤抖病的中华绒螯蟹不同组织进行病理学观察 ,旨在为颤抖病病原的确定及诊断等提供参考 ,同时期望加深对河蟹发病机制及死亡过程的认识。结果表明 ,患病河蟹的鳃、心脏、肝胰腺、腹节神经等组织器官发生了不同程度的病变 ,其病理特征主要表现为 :细胞浊肿、变性、坏死 ,某些细胞的细胞核固缩、碎裂或崩解 ;结合前人的研究 ,推测鳃、心脏、肝胰腺、腹节神经是病原体感染河蟹的主要靶组织器官 ;河蟹具有重要生理功能的鳃、心脏、肝胰腺组织发生了严重病变 ,使其功能遭到破坏 。

患“颤抖病”中华绒螯蟹体内类立克次体生物的寄生

中华绒螯蟹 (以下简称河蟹 )“颤抖病”是近几年来我国河蟹养殖区危害最大的病害之一 ,对取自江苏省淮阴地区的病蟹进行的组织和超微结构研究显示 ,在所有病蟹体内均发现大量寄生的类立克次体生物 ,而在取自未发病区域的健康河蟹体内没有发现类立克次体生物 ,类立克次体生物主要分布在河蟹的肌肉组织、结缔组织和血细胞内 ,它可以破坏河蟹肌细胞的肌纤维和肌原纤维 ,损害运动系统 ,这与河蟹的颤抖现象相吻合 ,因此作者推断它有可能是引发“颤抖病”

中华绒螯蟹颤抖病病原的初步研究

本文作者将发生颤抖病的中华绒螯蟹内脏匀浆，３００００ｒ．ｐ．ｍ离心３０分，将沉淀重悬，细菌过滤器过滤后，注射病蟹内脏接种健康的中华绒螯蟹进行人工感染试验，感染蟹表现出与野外发病中华绒螯蟹同样的症状。超薄切片后，电子显微镜下在细胞质中可观察到病毒样颗粒及略小于细胞核大小的病毒包埋体样结构。

中华绒螯蟹“颤抖病”病原、病理学初步研究

本文对健康和患“颤抖病”的中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)进行超微病理学研究 ,在病蟹中发现类立克次体生物大量寄生 .该微生物多呈球状或棒状 ,直径在 0 .2 2 - 0 .35μm之间 ,具细胞壁和细胞膜 ,但无典型的细胞核 .该微生物在发病初期主要出现于血细胞中 ,发病晚期大量出现于鳃腔中和心脏、附肢肌肉、消化道、消化腺和生殖腺中的结缔组织及神经胶质中 .回感实验表明该生物是江苏淮阴地区河蟹“颤抖病”的病原体 。

中华绒螯蟹颤抖病的人工复制试验

用在江苏采集的发生“颤抖病”的中华绒螯蟹 (BY0 )组织匀浆 ,经除菌处理 ,人工接种健康绒螯蟹 ,约 10d发病 ,出现典型症状 ,继而死亡。将人工复制发病的绒螯蟹 (BY1)除菌后 ,接种健康绒螯蟹 ,同样使其发病并死亡(BY2 )。电镜观察BY0、BY1、BY2的超薄切片 ,其神经组织和肝胰脏等的细胞质中发现圆形病毒颗粒 ,大小约 5 5～ 6 5nm ,具有外膜样结构。因此 ,可以认为中华绒螯蟹颤抖病的病原为病毒。

中华绒螯蟹颤抖病药物治疗的初步研究

用水产常用清塘剂、杀菌驱虫药、消毒剂、中草药及自配药物克螺威1号(SI-1)对中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体进行体外药敏试验。结果表明,螺原体对生石灰、茶籽饼、敌杀死、硫酸铜、硫酸锌、次氯酸钙、三氯异氰脲酸、二氧化氯、溴氯海因、二溴海因、高锰酸钾、五倍子、黄连、黄柏及自配药物克螺威1号具有不同程度的敏感性。通过最小杀菌浓度(MBC)比较,螺原体对清塘剂茶籽饼、杀菌驱虫药硫酸铜、消毒剂次氯酸钙、中草药黄连、自配药物克螺威1号更为敏感,其中克螺威1号为最敏感药物,最小抑菌质量浓度(M IC)为0.16 mg/L,MBC为2.5 mg/L。对克螺威1号进行急性毒性试验和颤抖病治疗试验表明,克螺威1号的96 h LD50为1106.62 mg/kg,安全使用量为110.66 mg/kg。用其治疗人工诱发颤抖病的中华绒螯蟹,克螺威1号具有显著效果(P<0.05),随后在10个被确诊为螺原体引发中华绒螯蟹颤抖病的养殖场进行药物治疗试验,在6个养殖场治疗有效,而在其他4个养殖场治疗无效,治疗试验效果不一,用克螺威1号治疗中华绒螯蟹颤抖病具有较好的前景,但仍需进一步做大面积长期临床试验。

患“颤抖病”中华绒螯蟹血细胞中类立克次体寄生的超微结构观察

本文对患“颤抖病”的中华绒螯蟹血细胞内类立克次体生物RLOs的寄生及繁殖特性进行了超微结构研究。正常中华绒螯蟹的血细胞可分为三类 :无颗粒细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞 ,而RLOs只特异性地侵染小颗粒细胞。RLOs以胞吞的方式进入小颗粒细胞 ,并在细胞内大量增殖形成包涵体 ,使细胞肿胀、瓦解、坏死 ,进而释放出RLOs 。

患"颤抖病"中华绒螯蟹病原的电镜观察

对患典型颤抖病中华绒螯蟹Eriocheirsinensis的组织进行了超薄切片电镜观察,结果发现在病蟹的鳃上皮细胞、肝胰腺上皮细胞和血淋巴细胞中有一种微生物大量寄生。该微生物的大小介于病毒和细菌之间,具有明显的细胞壁和细胞膜双层结构,但无明显的细胞核。从该微生物的细胞大小、形态结构和寄生部位上初步判定为一种类立克次氏体。

河蟹细菌性颤抖病的诊断与治疗

本文报道了在稻田养殖环境下发生的一例河蟹颤抖病的诊断与治疗的过程。结果表明 ,本例河蟹颤抖病是由苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis)和反硝化产碱菌 (Alcaligenesdenitrificans)混合感染引起 ;药敏试验结果显示两种细菌均对喹诺酮类、氯霉素和中草药中的黄连、黄芩、大黄、地锦草、五倍子、薄荷、大青叶、板兰根等有高度敏感。

中华绒螯蟹“颤抖病”病毒提纯方法的比较

以患“颤抖病”中华绒螯蟹组织浓缩液为材料,比较了差速离心结合PEG盐析法(方法1)、葡聚糖柱层析法(方法2)和蔗糖密度梯度超速离心法(方法3)三种方法分离提纯病毒的效果,对提纯病毒进行紫外吸收测定及电镜检查等。结果表明:方法3是用于分子生物学等深入研究该病的比较理想的提纯方法;而方法1所得病毒浓缩液虽纯度不及方法3,但基本可以满足一般研究的要求,且对仪器及技术的要求相对较低;方法2则介乎方法1与方法3之间。故可根据具体需求和实验室条件选择适合的中华绒螯蟹“颤抖病”病毒提纯方法。

细菌性河蟹颤抖病的鉴定与药敏试验

从来自启东的颤抖病蟹的肝胰腺和血淋巴中分离得到细菌 ,经人工感染试验确定为病原菌。该菌的生理、生化试验结果显示为嗜水气单胞菌。药敏结果显示 ,四环素、卡那霉素、吡哌酸对该病原菌均有很好的敏感性 。

ELISA双抗体夹心法检测河蟹“颤抖病”病毒

用纯化的河蟹“颤抖病” (暂定名 )病毒分别免疫家兔和山羊 ,制备高效价的抗血清。羊抗血清经硫酸铵盐析纯化。经方阵滴定 ,选择P/N =2 95时作 1∶10 0稀释的抗血清为工作浓度 ,建立ELISA双抗体夹心法检测样本 14 4份 ,包括来自长江水域的野生河蟹、人工感染发病的河蟹、 1999年和 2 0 0 0年从江苏采集的自然发病的病蟹及市场购买河蟹。结果显示 ,病蟹和市场购买河蟹的阳性率为 6 6 7%～ 10 0 % ,人工感染的病蟹和人工感染石蟹致病组阳性率均为 10 0 % ,来自长江水域的健康河蟹及未接种病毒的对照石蟹阳性率均为 0 ,表明建立的方法可以用于检测河蟹“颤抖病”

中华绒螯蟹“颤抖病”研究进展

综述了近年来中华绒螯蟹“颤抖病”研究进展 ,提出该病可能是由多病原引起 ,并展望了“颤抖病”

中华绒螯蟹酚氧化酶原系统与颤抖病的关系(英文)

近年来,颤抖病给中华绒螯蟹养殖业造成了巨大的经济损失.酚氧化酶原系统是甲壳动物最主要的体液免疫系统,当外源微生物侵入体内时,它发挥最基本的免疫防御作用来抵抗感染.酚氧化酶原系统的变化是蟹类健康状况的重要指标.prophenoloxidase和peroxinectin是酚氧化酶原系统中两个重要的体液免疫分子.实验从分子和蛋白两个水平研究了中华绒螯蟹酚氧化酶原系统与颤抖病的关系,建立了一种新的通过测定酚氧化酶原系统活性来判断蟹体质状况的方法.在分子水平上,中华绒螯蟹体液免疫分子prophenoloxidase和peroxinectin的部分基因序列被克隆和测序,并检测出这两种分子mR-NA水平的表达情况与颤抖病的感染程度呈正相关,患病组蟹mRNA的表达水平远高于正常组;在蛋白水平上,酚氧化酶的活性被测定,在正常情况下,蟹体内酚氧化酶活性处于低水平状态,当被感染颤抖病后,酚氧化酶活性有一定程度的升高.这些结果提示了酚氧化酶原系统在抗颤抖病感染时起重要作用,为进一步研究预防和治疗颤抖病的新途径提供了理论依据.

河蟹颤抖病病毒的分离纯化及其动物致病性试验

将人工复制发病的河蟹 (中华绒螯蟹 )组织匀浆 ,离心上清经聚乙二醇 (PEG 6 0 0 0 )沉淀 ,再经分子筛层析 ,分部收集分别测定 2 5 6～ 30 0nm的吸光值。各收集峰用PEG2 0 0 0 0 ,于 4℃浓缩 ,制作负染标本经透射电镜观察 ,发现在第一峰浓缩液中存在大量球状病毒颗粒 ,大小 5 0～ 10 0nm。用纯化的病毒进行动物致病性试验 ,接种石蟹 (锯齿华溪蟹 )发生“颤抖病” ,并用ELISA双抗体夹心法进行检测 。

中华绒螯蟹颤抖病诊断和防治技术

中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）俗称河蟹（以下简称河蟹）,河蟹颤抖病是对其养殖危害最大的重大流行病,自从1994年发现以来,每年都是各地的河蟹养殖最严重的疾病之一,尽管近年来河蟹颤抖病发生有减缓趋势,但局部地区仍有大面积暴发,死亡率仍可高达50%以上,给河蟹养殖造成巨大损失。经过多年的系列研究,已证实螺原体是引发河蟹颤抖病的主要病原,该病原也是水产新型病原,