风寒湿外邪作用于EPO影响痹证(类风湿关节炎)的发生

目的明确风寒湿外邪作用于促红细胞生成素(EPO)影响痹证(类风湿关节炎)的发生机制。方法(1)30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、单纯完全弗氏佐剂(CFA)组、风寒湿+CFA组,每组10只大鼠。单纯CFA组大鼠正常饲养14 d,风寒湿+CFA组大鼠风寒湿刺激14 d,再尾根部皮下注射0.1 mL含100μg热灭活结核杆菌(Mtb)的CFA诱导佐剂性关节炎(AIA)。分别于实验前、风寒湿刺激14 d及CFA免疫后7 d尾动脉取血,采用ELISA法检测血清EPO含量。(2)30只雄性SD大鼠随机分为单纯CFA组、风寒湿+CFA组、风寒湿+CFA+rhEPO组,每组10只大鼠。单纯CFA组正常饲养14 d,风寒湿+CFA组、风寒湿+CFA+rhEPO组,风寒湿刺激14 d,再尾根部皮下注射0.1 mL含100μg Mtb的CFA诱导AIA。风寒湿+CFA+rhEPO组自风寒湿刺激第1天起,尾静脉注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)。观察大鼠的发病时间和发病率;CFA免疫后8 d,腹主动脉取血,采用ELISA法检测血清TNF-α含量。(3)选取RA寒湿痹阻证伴慢性疾病性贫血患者、RA寒湿痹阻证伴缺铁性贫血患者、RA寒湿痹阻证无贫血患者及健康志愿者各20例,取静脉血,采用ELISA法检测血清EPO含量。结果(1)风寒湿刺激14 d及CFA免疫后7 d,风寒湿+CFA组大鼠血清EPO水平明显低于正常对照组大鼠和单纯CFA组大鼠(P<0.05)。(2)风寒湿+CFA+rhEPO组大鼠AIA发病时间和发病率与单纯CFA组相比无显著差异;风寒湿+CFA+rhEPO组大鼠血清TNF-α含量显著低于风寒湿+CFA组大鼠(P<0.01),而与单纯CFA组相比无显著性差异。(3)RA寒湿痹阻证伴慢性病贫血患者血清EPO含量显著高于健康志愿者(P<0.01),但却显著低于RA寒湿痹阻证伴缺铁性贫血组(P<0.05)。结论风寒湿外邪通过抑制EPO表达而影响痹证(类风湿关节炎)的发生。

风寒湿外邪对痹证(佐剂性关节炎)发生发展的影响

目的探讨风寒湿外邪对痹证[类风湿关节炎]发生发展的影响。方法 (1)雄性SD系大鼠20只,采用分层随机法分为单纯完全弗氏佐剂(CFA)组(10只)及风寒湿14天+CFA组(10只)。单纯CFA组大鼠正常饲养14天,风寒湿+CFA组大鼠风寒湿刺激14天,尾根部皮下注射0.1mL含100μg结核分支杆菌(Mtb)的CFA诱导佐剂性关节炎(AIA)观察并记录大鼠发病数,计算发病率。(2)雄性SD系大鼠30只,分层随机分为单纯CFA组(10只)、风寒湿7天+CFA组(10只)及风寒湿14天+CFA组(10只),3组大鼠分别尾根部皮下注射0.1mL含200μg Mtb的CFA诱导AIA。观察各组大鼠发病时间及关节炎指数。(3)雄性SD系大鼠30只,分层随机分为正常组(10只)、单纯CFA组(10只)及风寒湿14天+CFA组(10只),观察并记录各组大鼠精神状态、舌质、大便情况,测量体质量、饮水量和光辐射热刺激撤足时间。(4)雄性SD系大鼠20只,分层随机分为正常组(10只)及风寒湿14天组(10只),检测外周血CD4+T细胞亚群。结果 CFA(含100μg Mtb)注射后,单纯CFA组大鼠关节炎发病率为50%,风寒湿刺激14天+CFA组大鼠达到100%(P=0.039)。风寒湿刺激14天+CFA组在CFA(含200μg Mtb)注射后出现关节炎时间为(8.3±1.2)天,比单纯CFA组大鼠[(13.2±1.2)天]显著提前(P<0.01);与单纯CFA组比较,风寒湿14天+CFA组大鼠体毛欠光泽、明显畏寒、蜷卧懒动、大便稀溏,舌质偏淡、舌苔腻。风寒湿14天+CFA组大鼠关节炎初发阶段体重显著下降(P<0.05,P<0.01),后足肿胀程度显著增加(P<0.05,P<0.01),饮水量显著减少(P<0.05),热刺激撤足时间显著增加(P<0.01)。风寒湿14天组大鼠外周血中CD4+T细胞亚群数量较正常组明显升高(P<0.05)。结论风寒湿外邪影响AIA病证的发生,在疾病初发阶段中医证候表现为风湿寒痹证,其形成机制可能与CD4+T细胞亚群异常活化有关。

“风寒湿”外邪影响Th17/Treg失衡促进类风湿关节炎病证发生的分子机制研究

目的探讨Th17/Treg细胞在类风湿关节炎(痹证)中的表达情况及“风寒湿”外邪影响痹证发生的分子机制。方法(1)雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、单纯佐剂性关节炎(AIA)组和AIA风寒湿痹组,每组30只。正常对照组和单纯AIA组大鼠正常饲养;AIA风寒湿痹组每天置于人工智能气候箱内接受风寒湿刺激,14 d后单纯AIA组和AIA风寒湿痹组免疫含有热灭活结合杆菌的完全弗氏佐剂(CFA);AIA风寒湿痹组CFA免疫后风寒湿再刺激6 d。各组动物CFA免疫前1天、免疫后第6、10天,分离外周血单核细胞(PBMCs),流式细胞术检测CD4^(+)Th17和CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞,分析Th17/Treg细胞比例。(2)雄性SD大鼠20只,随机分为正常对照组和AIA风寒湿痹组,每组10只。正常对照组和AIA风寒湿痹组大鼠的实验条件同(1)。CFA免疫后第14天麻醉大鼠,分离PBMCs,流式细胞术检测外周血CD4^(+)T细胞pSTAT3蛋白、CD4^(+)IL-17^(+)淋巴细胞pSTAT4和pSTAT6的蛋白平均荧光强度,RT-PCR检测外周血CD4^(+)T细胞中RORγt、Foxp3、STAT3、STAT4、STAT6 mRNA的表达。结果随着AIA风寒湿痹大鼠病情的进展,外周血CD4^(+)Th17细胞比例逐渐增加,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞比例逐渐降低,与同时间点单纯AIA组大鼠比较,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,AIA风寒湿痹组大鼠外周血CD4^(+)pSTAT3^(+)和CD4^(+)IL-17^(+)pSTAT4^(+)及CD4^(+)IL-17^(+)pSTAT6^(+)蛋白表达量显著增加,CD4^(+)T细胞中Foxp3 mRNA表达量显著降低,而RORγt、STAT3、STAT4、STAT6 mRNA表达量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论“风寒湿”外邪可能通过JAK/STAT信号通路激活Th17细胞分化,并抑制Treg细胞分化,导致Th17/Treg细胞失衡,从而促进RA病证的发生。

基于“风寒湿三气杂至合而为痹”的类风湿关节炎病因病机与病证动物模型研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种以慢性侵蚀性关节炎为主要特征的自身免疫性疾病,属于中医“痹证”范畴,与中医古籍所记载的“历节”“鹤膝风”“尪痹”等病证相似。RA确切病因和发病机制尚不清楚,《素问·痹论》中“风寒湿三气杂至合而为痹也”是中医论治“痹证”的理论基础。阐释“风寒湿三气杂至合而为痹也”的科学内涵,明确风寒湿外邪在RA发生中的作用,对于促进中医药论治RA的理论提升和临床指导应用具有重要意义。文章综述自20世纪80年代以来,“风寒湿三气杂至合而为痹也”的现代研究和论证以及RA病证结合动物模型研究报道和进展,以期为中医药论治RA的理论传承和创新发展以及RA发病机制研究提供新思路。